| 刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 孙敏,何深一,赵广会,丛华,周怀瑜,赵群力,孟敏.刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2012(6):438-441. |
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| 作者姓名： | 孙敏 何深一 赵广会 丛华 周怀瑜 赵群力 孟敏 |
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| 作者单位： | 山东大学医学院病原生物学研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.81071373);山东省自然科学基金(No.ZR2009CM079);家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金(No.SKLVEB2011KFKT005)~~ |
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| 摘 要： | 目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。
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| 关 键 词： | 刚地弓形虫 14-3-3蛋白 真核表达 生物信息学 |
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