淋球菌nsp A基因原核重组质粒的构建及表达

目的:构建奈瑟淋球菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,Nsp A)基因原核表达载体.并诱导Nsp A融合蛋白在宿主菌B121(DE3)中表达.方法:根据基因库报道的淋球菌nsp A基因序列,设计合成一对引物:以淋球菌基因组DNA为模板,PCR扩增淋球菌Nsp A基因;将PCR扩增产物与带有谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)基因的高效原核表达质粒pGEX4T-1定向重组,构建原核表达重组体pGEX4T-1-Nsp A;重组体经酶切、PCR鉴定和核酸序列分析正确后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)及Western blot技术检测重组蛋白表达情况.结果:重组体pGEX4T-1-Nsp A经BamH Ⅰ、Xhol Ⅰ双酶切、PCR和核酸序列分析表明:成功构建淋球菌Nsp A基因原核表达重组体pGEX4T-1-Nsp A;SDS-PAGE及Western blot分析显示:重组Nsp A基因在原核系统中得到了表达,融合蛋白GST-Nsp A约44 ku.结论:淋球菌NspA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步研究淋球菌Nsp A蛋白免疫学性能和研制淋球菌疫苗提供了研究基础.     

旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原的研究进展

在旋毛虫感染过程中,成囊前期幼虫（PEL）是旋毛虫侵入宿主肌肉的侵入期。旋毛虫PEL比成囊期幼虫（EL）在宿主体内约早2周出现。成囊前期幼虫抗原（PELA）对旋毛虫病的早期免疫学诊断具有较高的敏感性。而旋毛虫排泄分泌抗原具双重免疫功能,即有良好的抗原性和免疫原性。因此,本文就旋毛虫成囊前期幼虫ES抗原研究进展做一综述。     

旋毛虫成虫三种抗原SDS-PAGE及Western-blot比较研究

目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:虫体可溶性抗原显示29条蛋白带,分子量范围在112kDa~10kDa之间,其中主带13条;表面抗原显示4条主要蛋白带,分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示17条蛋白带,分子量范围在120~14kDa之间,其中主带6条,分子量分别为120、64、43、40、35、33kDa。蛋白印迹结果:虫体可溶性抗原出现13条反应条带,其中分子量为81、40、37、33、30kDa的条带着色明显;表面抗原出现4条反应条带,其分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示7条反应带,其中43、40、27、18kDa着色明显。结论旋毛虫成虫虫体可溶性抗原与排泄分泌抗原较表面抗原蛋白组分复杂,3者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度表面抗原和排泄分泌抗原高于虫体可溶性抗原,说明前两种抗原是旋毛虫成虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。     

旋毛虫成囊前期幼虫的收集

目的 探索旋毛虫成囊前期幼虫的收集时间与方法.方法 20只成年大鼠,每只大鼠经口感染3000条旋毛虫脱囊幼虫,分别于第14、15、16、17、18、19、20天将大鼠处死,用人工胃蛋白酶消化肌肉收集旋毛虫.结果 感染后第14、15、16大膈肌均未见旋毛虫,第17、18、19、20天膈肌有旋毛虫的侵入并逐渐增多;第14、15、16天均未收集到旋毛虫,第17、18、19、20天平均每只大鼠分别收集5000、8000、10000、30000条旋毛虫.结论 旋毛虫在感染后第20天是旋毛虫成囊前期幼虫收集的最佳时期.人工胃蛋白酶消化肌肉可以收集成囊前期幼虫.     

血液生化检验在糖尿病诊疗中的临床应用价值探讨

目的探讨糖尿病诊疗中运用血液生化检验的效果。方法选取该院2017年3月-2019年3月时间段确诊糖尿病患者43例为观察组,选取同期该院健康体检者43名为对照组,对两组体检者均施行血液生化检验,对比两组检验情况。结果观察组研究中所得OGTT2 h PG、GLU、HbA1c高于对照组研究中所得数值,观察组研究中所得TG、TC、CRP、CysC、Hcy高于对照组研究中所得数值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病诊疗中运用血液生化检验的效果显著,值得应用。     

旋毛虫成虫与肌幼虫表面抗原的比较分析

目的比较大理猪源旋毛虫(Trichinela spiralis)成虫与肌幼虫表面抗原(Surface antigen,SA)的蛋白组分差异,并进一步分析其免疫反应性,为分离和筛选出免疫原性和免疫反应性强的旋毛虫抗原成分提供依据。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),对成虫和肌幼虫SA蛋白成分进行分析,并进一步采用蛋白印迹(Western-blot)对其免疫反应性分析比较。结果旋毛虫成虫SA显示4条主要蛋白染色条带,分子量分别为50kDa、48kDa、40kDa和34kDa,旋毛虫肌幼虫SA显示10条主要蛋白染色条带,分别为105kDa、99kDa、80kDa、63kDa、55kDa、48kDa、35kDa、28kDa、24kDa和21kDa。;Western-blot检测结果表明,旋毛虫成虫SA出现4条反应条带,其分子量分别为50kDa、48kDa、40kDa和34kDa,旋毛虫肌幼虫SA出现7条反应条带,分子量分别为105kDa、99kDa、80kDa、55kDa、48kDa、35kDa和28kDa,其中48kDa和35kDa显色明显。结论旋毛虫成虫SA与肌幼虫SA都含有分子量为48kDa的蛋白组分,且两种抗原组分均具有较强的免疫反应性。     

探讨荧光定量PCR法与免疫胶体金法用于骨质疏松症手术住院患者感染监控的诊断价值

目的 本研究旨在探讨荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）法与免疫胶体金法检测用于骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控的临床效果。方法 选取2020年3月—2023年4月曲靖市第一人民医院收治的180例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者作为研究对象,所有患者均先后接受荧光定量PCR法与免疫胶体金法检测,以细菌培养结果作为金标准,比较两种方法的检出率,评估两种检查方法的诊断效能。结果 荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.67%、89.19%、98.60%、94.29%、97.24%,免疫胶体金法分别为82.78%、43.24%、93.01%、61.54%、86.36%,荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验,差异有统计学意义（χ2=18.827、17.458、5.567、10.124、11.533,P均<0.05）。结论 荧光定量PCR法检验在骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控中具有良好的诊断效能。在骨科住院患者感染监控中予以...     

曲靖地区TORCH感染情况分析

目的分析TORCH抗体的检测结果,进一步了解曲靖地区不同人群TORCH感染情况。方法回顾性分析3 035例TORCH抗体检测结果,并将检测结果按男性组和女性组、未成年人组和成年人组分组,统计TORCH各病原体抗体阳性率。结果 (1)TORCH-IgG各项抗体检测中,以CMV-IgG抗体总阳性率最高为84.78%。TORCH-IgM各项抗体检测中,以RUVIgM抗体总阳性率最高为9.92%。(2)女性组风疹病毒(RUV)、巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ/Ⅱ-IgG、IgM抗体阳性率均高于男性组,差异均有统计学意义(P0.05),但弓形虫(TOX)-IgG和IgM在两组间差异无统计学意义(P0.05)。(3)成年人组TOX、RUV、CMV和HSVⅠ/Ⅱ-IgG抗体阳性率均高于未成年人组,差异均有统计学意义(P0.05)。成年人组TOX、RUV和HSVⅠ/Ⅱ-IgM抗体阳性率均高于未成年人组,差异均有统计学意义(P0.05),但CMV-IgM两组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论曲靖地区CMV、RUV、HSVⅠ/Ⅱ感染率较高,成年人组和女性组感染率较高,应早期发现TORCH感染并对感染者采取一定的干预和治疗措施。     

旋毛虫成囊前期幼虫抗原保护性免疫的研究

目的比较旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原对小鼠产生的免疫保护作用。方法分别用旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原、表面抗原免疫小鼠,同时设佐剂组和阴性对照组,间隔7d免疫1次,共3次。末次免疫后7d,每只小鼠用200条旋毛虫感染期幼虫经口进行攻击感染。感染后7d和30d分别检查各组小鼠肠道成虫数和肌幼虫数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体。结果虫体抗原、排泄分泌抗原、表面抗原和佐剂组的成虫减虫率分别为84．89％、89．73％、85．65％、2．57％;肌幼虫减虫率分别为71．71％、80．98％、73．66％、5．60％。排泄分泌抗原组、表面抗原组的成虫减虫率（P均〈0．05）及肌幼虫减虫率（P均〈0．01）均高于虫体抗原组。各免疫组小鼠血清IgG抗体滴度明显升高,虫体抗原组、排泄分泌抗原组和表面抗原组的几何平均倒数滴度分别为2798．89、3474．51、2984．83,分别为阴性对照组（459．32）的6．09、7．56、6．50倍。结论旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生较强的抗攻击感染保护力。成囊前期幼虫的排泄分泌抗原显示出更强的免疫原性。