旋毛虫成囊前期幼虫感染性观察

目的 观察旋毛虫成囊前期幼虫的感染性.方法 将80只雄性昆明小鼠随机分成8组,每只感染300条旋毛虫肌幼虫,感染后14～21d每天剖杀1组,将小鼠膈肌(即含9～16日龄的成囊前期幼虫)分别再喂饲10只小鼠;同时将贝氏法收集的9～16日龄的幼虫用灌胃法感染10只小鼠(每只300条).感染后42 d将2种方法感染的小鼠剖杀,分别剪碎肌肉,人工消化后收集并计数旋毛虫肌幼虫.光学显微镜下观察不同日龄幼虫的形态并测量其长度.结果 旋毛虫9～12日龄幼虫2种方法感染的小鼠均未检获肌幼虫:13～16日龄幼虫膈肌喂饲法小鼠的感染率均为100%,幼虫灌胃法对小鼠的感染率分别为30%、30%、40%和40%.幼虫日龄与喂饲法在感染小鼠后42d收集的肌幼虫数呈相关性(r=0.939,P＜0.05).旋毛虫9～16日龄幼虫长度随幼虫日龄的延长而增大,9日龄幼多呈腊肠状,未见虫体活幼;12日龄幼虫多呈卷曲状,可见缓慢蠕动;15日龄幼虫呈明显的卷曲状,幼虫周围已形成明显的囊包,可见虫体明显活动.结论 旋毛虫感染后18d的成囊前期幼虫(13日龄)对新宿主具有感染性,幼虫的感染性与长度随着日龄的延长而增大.     

镜检法与贝氏法对肉类中旋毛虫成囊前幼虫的检验效果

目的观察镜检法（trichinelloscopy）与贝氏法（Baermann’s technique）对肉类中旋毛虫成囊前幼虫（pre-encap-sulated larvae,PEL）检验的效果。方法将80只昆明小鼠随机分为8组（每组10只）,每只感染旋毛虫肌幼虫300条,感染后14～21d每天剖杀1组,应用贝氏法检查小鼠肌肉中的PEL（9～16日龄）,用镜检法检查膈肌中的PEL,用ELISA检测鼠血清抗旋毛虫抗体。另取12只小鼠,用于观察消化法对旋毛虫感染后17～19d（12～14日龄）PEL存活率的影响。结果小鼠感染旋毛虫后14和15d镜检法幼虫检出率分别为50.0%和89.0%,感染后16～21d检出率均为100%。感染后14～21d贝氏法的检出率均为100%;ELISA检测血清抗体阳性率为11.1%～40.0%。感染后14d贝氏法的PEL检出率与镜检法比较差异有统计学意义（χ^2=5.333,P〈0.05）;观察期间ELISA检测的抗体阳性率均显著低于镜检法和贝氏法的幼虫检出率（χ^2=18.9,P〈0.05）。感染后17～19d,小鼠肌肉消化4h的幼虫存活率均明显低于消化1h的存活率（χ^217=117.56,χ^218=37.48,χ^219=96.73,P均〈0.05）。结论旋毛虫感染后17～19d的成囊前幼虫不能完全抵抗胃蛋白酶的消化作用;对肉类中旋毛虫成囊前幼虫的检疫效果,贝氏法优于镜检法。     

肉类中旋毛虫成囊前期幼虫检验方法及其影响因素

目的观察人工消化法(artificial digestion method)和贝氏法(Baermann's technique)检验肉类中旋毛虫成囊前期幼虫(pre-encapsulated larvae,PEL)的效果及其影响因素。方法将45只小鼠随机分为3组(每组15只),分别经口感染20、10、5条旋毛虫肌幼虫,感染后18d剖杀,将3组小鼠肌肉剪碎后,分别应用国际旋毛虫病委员会(International Commis-sion on Trichinellosis,ICT)推荐的消化法(简称ICT-消化法)、国家标准-猪旋毛虫病诊断技术(GB/T186452-2000)中规定的消化法(简称国标-消化法)及贝氏法进行PEL的检验。结果ICT-消化法、国标-消化法与贝氏法对感染20条旋毛虫幼虫的小鼠肌肉中PEL的检出率均为100%(15/15)(χ220=0.000,P>0.05);感染10条幼虫小鼠肌肉,3种方法的PEL检出率分别为93.33%(14/15),93.33%(14/15)及100%(15/15)(χ120=1.645,P>0.05);感染5条幼虫的小鼠肌肉,3种方法的PEL检出率分别为63.33%(19/30),90%(27/30)及100%(30/30)(χ52=18.866,P<0.05)。感染旋毛虫后18d的小鼠肌肉分别消化1h、2h、3h、4h与5h,PEL死亡率分别为8.49%(53/624)、29.77%(181/608)、58.46(449/768)、67.83%(407/600)、84.70%(515/608),PEL的死亡率随消化时间的延长而升高(χ2=920.772,P<0.05)。结论对肉类中旋毛虫成囊前期幼虫检疫时,贝氏法明显优于消化法。     

旋毛虫对昆明小鼠最小感染剂量的实验研究

为观察旋毛虫感染昆明小鼠的最小剂量, 将70只雄性昆明小鼠随机均分7组, 每只鼠分别经口感染旋毛虫肌幼虫30、 25、 20、 15、 10、 5及3条, 感染后6周剖杀。取完整膈肌, 压片、 镜检、 计数虫荷。小鼠全身肌肉经人工胃液消化后计数肌肉虫荷。结果, 压片镜检法和人工消化法的幼虫检出率, 感染30、 25、 20、 15及10条旋毛虫肌幼虫的小鼠均为100% (10/10); 感染5条旋毛虫肌幼虫的小鼠, 两种方法幼虫检出率分别为70% (7/10) 和100% (10/10); 感染3条旋毛虫肌幼虫的小鼠, 两种方法均未检出幼虫。感染旋毛虫的小鼠膈肌和肌肉虫荷与感染剂量均呈正相关(r=0.759, P＜0.05; r=0.638, P＜0.05)。旋毛虫经口成功感染昆明小鼠的最小剂量为5条幼虫。     

旋毛虫幼虫在大鼠与小鼠肌肉分布及囊包内幼虫数量的观察

目的观察不同剂量旋毛虫感染大鼠与小鼠后幼虫在肌肉内的分布及囊包内的幼虫数量。方法将30只昆明小鼠和30只SD大鼠均随机分为轻、中、重度感染组(每组10只),分别按每g克体重1、5、20条肌幼虫经口感染。感染后42d剖杀,取不同部位肌肉称重后压片镜检,观察不同部位每克肌肉虫荷(larvaepergram,lpg)及囊包内幼虫数量。结果大鼠在轻度感染时以咬肌虫荷最高,中、重度感染时分别以膈肌和舌肌虫荷最高;小鼠在轻度感染时以咬肌虫荷最高,中、重度感染时均以膈肌虫荷最高。在大鼠肌肉8028个囊包中,含1、2、3条幼虫的囊包分别占97.91%、1.95%及0.14%;在小鼠肌肉7559个囊包中,含1、2、3条幼虫的囊包分别占97.33%、2.54%及0.13%。小鼠肌肉多幼虫(2～3条)囊包的检出率明显高于大鼠(χ2=5.644,P<0.05)。多幼虫囊包的检出率在大鼠和小鼠均随感染剂量的增加而升高(χ2大鼠=42.656,P<0.05;χ2小鼠=45.713,P<0.05);在含3条幼虫囊包的肌肉,重度感染的大鼠和小鼠肌肉分别占81.82%(9/11)与100%(10/10)。未发现含有4条及4条以上幼虫的囊包。结论对鼠类旋毛虫感染的流行病学调查时应首选咬肌进行病原学检查,其次为膈肌或舌肌;进行肌肉活检或肉类检疫时发现含3条幼虫的囊包提示为重度感染。     

旋毛虫肌幼虫在小鼠体内发育的实验观察

为观察旋毛虫肌幼虫在小鼠体内的发育过程及特点,取28只雌性昆明小鼠,每鼠经口感染100条旋毛虫肌幼虫,感染后8、 9、 10、 11、 13、 17、 20、 23、 27、 29、 50、 60、 240、 400 d各剖杀2只小鼠,取完整隔肌和部分腹肌,醋酸明矾卡红染色后,镜下观查肌幼虫、囊包形态,测量肌幼虫长和宽。结果显示,旋毛虫感染后10、 13 d,小鼠膈肌和腹肌中分别发现旋毛虫肌幼虫,以直杆状、弧形居多。感染后17 d,肌幼虫形态以环状、折叠、弯曲、 s形、直杆状、弧形为主,囊包雏形形成。感染后29 d,囊包基本发育成熟,囊壁细线状,囊内结构分为两层。感染后60 d,肌幼虫出现蜷曲成团,囊内结构开始出现透明化。感染后400 d,囊包退化,囊内层(深染层)出现透明。旋毛虫感染后10、 17、 29、 60 d,肌幼虫长均值分别为(131.7±21.4)、(435.5±201.5)、(928.4±188.5)、(1044.4±86.7)μm,前后二者差异均有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05);肌幼虫宽均值分别为(10.4±2.5)、(22.8±5.2)、(35.0±5.2)、(38.3±3.0)μm,前后二者差异有统计学意义(P﹤0.01)。提示旋毛虫感染小鼠后,肌幼虫及囊包发育大致可以分为成囊前期、囊包发育期、囊包成熟期和囊包退化期等4个时期。肌幼虫和囊包的形态结构变化与感染时间密切相关。     

旋毛虫成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1的克隆与表达

目的　克隆和表达旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫编码 3 1kDa抗原的结构基因 (TspE1)。　 方法　大鼠感染旋毛虫后第 17天收集成囊前期幼虫 ,提取虫体的总RNA。通过RT PCR特异性扩增目的基因 ,构建重组质粒pUC18 Ts HN3 ,将重组质粒 pUC18 Ts HN3中的目的基因亚克隆入原核表达载体pGEMEX 1,构建重组子 pGEMEX 1 Ts HN3 ,经IPTG诱导 ,在E .coliJM 10 9(DE3 )中表达。对表达产物进行SDS PAGE分析和Westernblotting鉴定。　 结果　SDS PAGE显示目的基因在大肠杆菌中获得高效表达 ,重组蛋白的分子量为 3 1kDa ,以诱导 4h时表达量最多。薄层凝胶光密度扫描分析结果显示 ,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的 2 6%。Westernblotting证实 ,融合蛋白条带能被感染旋毛虫的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别。　结论　旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1克隆和原核表达成功。     

口服不同剂量三苯双脒对小鼠体内旋毛虫成囊期幼虫的作用

目的观察口服不同剂量三苯双脒对小鼠横纹肌中旋毛虫成囊期幼虫的作用。方法 8周龄BALB/c小鼠88只,随机均分为11组,每鼠口服感染旋毛虫成囊期幼虫50条。感染后第29天,分别口服三苯双脒50、100、150、200、250、300、350、400、450和500 mg/(kg.d),1次/d,连服6 d,同时设不服药对照组,治疗期间观察小鼠的不良反应。治疗结束后第7天,剖检各组小鼠,分别取膈肌、咬肌、胸肌和腓肠肌约0.1 g,压片法检查肌肉中的成囊期幼虫,观察其存活情况,并计数活虫数和死虫数,根据各组每克肌肉平均成囊期幼虫数评价疗效。结果三苯双脒50～300 mg/(kg.d)组小鼠未见不良反应;350和400 mg/(kg.d)组小鼠则有体毛蓬乱、消瘦和进食减少等现象,并有死亡,死亡率分别为25%和50%;而剂量450和500 mg/(kg.d)组小鼠在给药4 d和5 d后全部死亡。对照组小鼠膈肌中的成囊期幼虫总数最高,咬肌次之,胸肌和腓肠肌相近。感染小鼠用三苯双脒治疗时,50 mg/(kg.d)组无效,剂量为100 mg/(kg.d)或以上,随剂量增高,4个部位肌肉中的成囊期幼虫总数和活虫数均呈下降趋势...     

人工消化法检验旋毛虫效果及其对肌幼虫的影响

目的观察人工消化法检验旋毛虫的效果及对肌幼虫活性、感染性的影响。方法将小鼠感染100条肌幼虫后30 d剖杀,分别应用3组消化法检验,即：消化2 h组（磁力搅拌法）、消化12 h组、消化20 h组,每组取肉样10份,每份含300个囊包,消化后分别计数每份肉样的幼虫数;同时对幼虫活性进行观察。40只昆明小鼠随机分为对照组和3个消化组（消化2、12、20 h组）,共4组,每组10只。对照组：每鼠感染100个囊包;消化组：将3组方法收集的幼虫分别感染小鼠,每鼠经口感染100条幼虫。感染后30 d剖杀,取膈肌压片镜检,并用磁力搅拌法收集幼虫、计数。结果消化2、12、20 h组的幼虫检出率分别为78.47%、76.73%、68.63%,死亡率分别为0.59%、4.60%、7.43%。3组收集的幼虫分别感染小鼠,30 d后剖杀,与对照组相比,消化2、12、20 h组的减虫率分别为60.56%、61.94%、73.07%。结论磁力搅拌法（消化2 h）在幼虫检出率、幼虫活性、幼虫感染性等方面均优于消化12、20 h实验组,为进行旋毛虫检验和动物实验,优先选择的方法。     

青海省部分地区家猪感染旋毛虫情况调查

目的 了解青海省家猪旋毛虫的感染情况.方法 在青海省互助土族自治县和德令哈市随机选取7个生猪屠宰点,对192头屠宰猪收集膈肌样本,先后使用压片镜检法和人工消化法对肌肉样本进行旋毛虫检验.结果 192份猪肉样本经镜检法和人工消化法检查,均未检出旋毛虫幼虫.结论 青海省互助土族自治县和德令哈市未发现自然感染旋毛虫的家猪.     

旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原的研究进展

在旋毛虫感染过程中,成囊前期幼虫（PEL）是旋毛虫侵入宿主肌肉的侵入期。旋毛虫PEL比成囊期幼虫（EL）在宿主体内约早2周出现。成囊前期幼虫抗原（PELA）对旋毛虫病的早期免疫学诊断具有较高的敏感性。而旋毛虫排泄分泌抗原具双重免疫功能,即有良好的抗原性和免疫原性。因此,本文就旋毛虫成囊前期幼虫ES抗原研究进展做一综述。     

The level of nitroblue tetrazolium (NBT) positive cells in some organs of mice infected with Trichinella spiralis

The percentage of NBT-positive cells in peritoneal fluid, spleen and mesenteric lymph node of CWF mice infected orally with 200 Trichinella spiralis larvae was investigated. The highest level of NBT-positive cells in peritoneal fluid was found on the 5-6th and 50-60th day post infection (p.i.), in spleen between the 30-75th and in mesenteric lymph node between the 50-75th day p.i. The lack of reaction between peritoneal fluid cells and newborn migrating larvae at the 15th and 20th day p.i. observed by the authors, may be associated with slight activity of these cells in the NBT reduction test between 8-30th day p.i.     

人工感染旋毛虫牛机体免疫状态的研究

人工感染旋毛虫牛,于感染前、后做白细胞分类、计数和淋巴细胞内多糖类物质含量的测定。结果发现,牛感染旋毛虫后血液中各类白细胞均增多,以嗜酸性白细胞的增多最为明显,是感染前的13.7倍,在感染后第25天达峰值,血液中的T-淋巴细胞显著增多,在第29天达峰值,其中辅助性T-淋巴细胞比抑制性T-淋巴细胞增加显著;血液中的淋巴细胞经酶联葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)标记后,表面膜免疫球蛋白阳性B(SmIg~+B)淋巴细胞明显增多,在感染后13和37天二次达峰值;血清中免疫球蛋白含量在感染后19和43天二次达高峰,其中IgG在感染后29和43天二次达高峰。这些检测结果初步提供了牛感染旋毛虫后机体的免疫状态。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌物中特异性诊断抗原的研究

目的　寻找旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)物中的特异性诊断抗原。　方法　应用SDSPAGE和Western印迹对旋毛虫肌幼虫体外培养18、30h后的ES抗原中的蛋白组分进行研究。　结果　旋毛虫肌幼虫培养18、30h后得到的ES抗原组分大致相同,两种ES抗原中主要蛋白带的分子量为112、110、108、97、53、49、45、42、35、23和16kDa。18hES抗原中的102、97、95和53kDa以及30hES抗原中的53、49、45和43kDa均与并殖吸虫病、华支睾吸虫病、日本血吸虫病及囊尾蚴病患者血清发生明显的交叉反应。ES抗原中的23kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应,而不与上述其它寄生虫感染者、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。　结论　旋毛虫肌幼虫ES抗原中的23kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。     

旋毛虫感染病兔抗体动态的研究

以旋毛虫成囊期幼虫的盐水浸出液为抗原，用ＥＬＩＳＡ方法检测人工感染旋毛虫病兔ＩｇＧ抗体的反应动态。结果表明：１，特异性抗体水平与感染度呈正相关且重感染组的特异性抗体比轻感染组早３ｄ检出。２．抗体水平随感染时间的延长而增高，从感染后７７ｄ起明显下降但可持续４个月之久。     

旋毛虫感染兔唾液中抗旋毛虫IgG抗体水平

将28只日本大耳兔随机分为实验组(20只)和对照组(8只),实验组用旋毛虫脱囊幼虫经口灌胃日本大耳兔(3000条/只),对照组不做任何处理。采集感染前和感染后1～6周兔唾液和血清以及对照组兔唾液和血清。建立旋毛虫肌肉幼虫排泄分泌抗原(MLESA)为诊断抗原的间接ELISA,测定兔唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体。结果显示,感染后1～6周,唾液阳性率分别为10%、15%、40%、65%、85%和95%;血清阳性率分别为35%、50%、80%、90%、100%和100%。感染后1～3周,唾液阳性率与血清阳性率差异有统计学意义(χ2=3.58、5.23、6.67,P0.05),感染后4～6周,两者差异无统计学差异(χ2=0.12、1.03、1.03,P0.05)。提示在血清标本采集困难的情况下,MLESA的间接ELISA法检测唾液中抗旋毛虫IgG抗体可作为旋毛虫病免疫诊断的辅助方法。     

The study of cell and tissue mechanisms of the homeostasis of "helminth-host" system at muscle trichinellosis before and after the administration of a herb biostimulator and anthelminthic

Results of micromorphological and histological studies of larvae of Trichinella spiralis and T. pseudospiralis, as well as, muscles, liver and small intestine of the rat-host before and after biostimulator administration of phytohemagglutinin and phytoanthelminthic were presented. It has been established that rats with Trichinella larvae of both species developed unspecific allergic angiomyositis, hepatitis, cholangitis, and erosio-haemorrhagic enterocolitis in the host's organism on the 35th day after infection. Furthermore, processes of compensatory hypertrophy, that support the host's (rats) homeostasis, on cell and tissue levels, were observed at histodestructional and morpho functional deficiency. It has been revealed that phytohemagglutinin, biostimulator injected into the host's organism before infection, is of immunostimulating nature and partially destroys the larvae of Trichinella. The phytoanthelminthic produces a significant trichinellocide effect: RNA synthesis and glycogen is intensified in the organs of the treated animals, their pathomicromorphogenesis weakened, and their compensatory and regenerative processes were observed. The combined use of the phytohemagglutinin and phytoanthelminthic fails to intensify the mentioned effect.     

Activity of natural killer (NK) cells in the course of experimental trichinellosis in mice.

B6C3F1 mice were infected with 200 or 500 larvae of Trichinella spiralis per mouse and pulmonary NK cell-mediated clearance of semisyngeneic tumour cells was determined in vivo on days 10, 20, 30, and 60 after the infection. Cytotoxic activity of NK cells in the lungs was substantially elevated on days 20 and 30 after challenge with both "doses" of the parasite. At the same time large granular lymphocytes (LGLs) as well as cells expressing surface asialo-GM1 molecules were isolated in elevated numbers from spleens of the infected as opposed to the normal mice. Expression of other markers of differentiation, such as THy 1, CD4, and CD8 was also enhanced on splenocytes isolated from the infected mice on day 30 but not 20 after administration of the larvae. The present results indicate that NK cell-mediated activity in vivo is stimulated above the baseline level during migration and early muscle phases of the infection with T. spiralis in mice. The possible impact of this effect upon the course of trichinellosis as well as upon the growth of tumours in the infected host is discussed.