急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义

目的通过检测急性髓细胞白血病患者外周血各淋巴细胞亚群的分布,探讨该类患者免疫功能状况。方法通过流式细胞术检测健康对照组(n=20)、急性髓细胞白血病初发患者(n=31)及完全缓解期患者(n=31)外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD16+CD56+NK细胞比例;通过细胞杀伤实验分析NK细胞和γδT细胞的杀伤活性以及与Treg的关系。结果与对照组相比,初发白血病患者和完全缓解患者外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞比例无明显差异,但CD4+CD25+Treg比例明显增高,TCRγδ+T细胞和CD16+CD56+NK细胞比例明显下降。初发病患者NK细胞和γδT细胞具有杀伤活性,但Treg能明显抑制其杀伤活性。结论急性髓细胞白血病患者外周血γδT和NK细胞虽具有杀伤功能,但比例明显下降,Treg对其杀伤功能具有抑制作用。     

ACSS2通过PI3K/AKT信号通路调控食管鳞癌细胞的顺铂敏感性

目的: 探讨乙酰辅酶A合成酶2（acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2）表达对食管鳞癌细胞顺铂（cisplatin,DDP）敏感性的影响和可能机制。方法: 通过免疫组化和蛋白质印迹法检测40对食管鳞癌瘤体和癌旁组织中ACSS2蛋白的表达。蛋白质印迹法验证食管鳞癌细胞株TE-1、ECA-109和KY-SE150与正常食管鳞状细胞Het-1A中ACSS2的表达差异;利用脂质体转染siRNA-ACSS2或者慢病毒转染LV-ACSS2至TE-1细胞构建ACSS2下调或过表达细胞株;CCK8实验检测下调ACSS2对顺铂IC50值的改变;顺铂处理（5 μg/mL）前后,流式细胞术检测ACSS2干扰处理对TE-1细胞凋亡水平的影响;蛋白质印迹检测PI3K/AKT信号通路及凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3的表达。结果： 免疫组化及蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌组织中ACSS2蛋白表达显著高于癌旁组织（P<0.001）,食管鳞癌细胞株中ACSS2表达水平明显高于正常鳞状上皮细胞Het-1A。CCK8结果显示siRNA-ACSS2处理显著下调TE-1细胞对顺铂的IC₅₀值（P值均<0.05）;流式细胞术结果证实,抑制ACSS2表达可显著上调食管鳞癌细胞凋亡率（P <0.01）;结合5 μg/mL顺铂处理,ACSS2干扰后TE-1细胞凋亡率明显上升（P值均<0.001）;蛋白质印迹结果表明,顺铂处理上调TE-1细胞中ACSS2及p-PI3K、p-AKT的表达;顺铂作用下,靶向抑制ACSS2后可见p-PI3K、p-AKT的显著降低而凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3表达量明显升高,过表达ACSS2在维持PI3K/AKT信号活化的同时可有效逆转cleaved-Caspase-3的形成。结论： ACSS2通过调控PI3K/AKT信号通路活化以及cleaved-Caspase-3表达参与食管鳞癌细胞顺铂敏感性调节。     

CCR6-CCL20对食管鳞癌患者体内Th17细胞分布的影响

目的研究CCR6-CCL20对食管鳞癌患者体内Th17细胞分布的影响。方法采用流式细胞术检测食管鳞癌患者手术切除的癌组织、癌旁组织及外周血中Th17细胞的比例及CCR6+Th17细胞的比例。RT-PCR方法检测组织中CCL20 mRNA水平。结果与癌旁组织及外周血相比,癌组织中Th17细胞明显升高(P<0.01);癌组织中CCR6+Th17细胞的比例高于癌旁组织及外周血(P<0.01);癌组织中CCL20 mRNA水平高于癌旁组织(P<0.01),并与Th17呈正相关。结论 CCR6-CCL20趋化轴可能在食管鳞癌患者Th17细胞浸润到肿瘤组织中发挥重要作用。     

骨髓细胞形态学检查室间质控结果分析

卫生部临床检验中心开展的全国医院细胞形态学室间质评活动,从1999年开始,由发放血涂片改为发放彩图来回报结果。从彩图上指认各种细胞,颇有“纸上谈兵”的味道,现将我们近几年的工作体会总结如下。     

人ULBP1重组蛋白的克隆表达和多克隆抗体制备

目的:表达人UL16结合蛋白l(ULBP1)胞外段重组蛋白,并制备兔抗人ULBP1多克隆抗体.方法:利用RT-PCR技术获得人ULBP1分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-ULBP1.测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4h后,对表达产物进行鉴定.用镍柱对人ULBP1重组蛋白进行纯化,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法对制备的多克隆抗体进行生物学鉴定.结果:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP1(aa81～244),并获得了高纯度的人pQE30-ULBP1 (aa81～244)重组蛋白.制备的多克隆抗体能够识别肺癌细胞株A549表面表达的天然构象ULBP1分子.结论:成功表达了人ULBP1(aa81～244)重组蛋白并成功制备了兔抗人ULBP1的多克隆抗体.     

慢性肾衰竭患者血清Chemerin水平及其与肾功能的关系研究

目的探讨慢性肾衰竭(CRF)患者血清Chemerin水平及其与肾功能之间的关系。方法收集2010年6月—2012年3月在我院门诊就诊或住院的慢性肾脏病3、4期患者158例作为CRF组,选择同期行体格检查的健康体检者140例作为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测两组受试者的血清Chemerin和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;核素动态显像法测定肾小球滤过率(GFR);生化方法测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),并观察上述指标与血清Chemerin水平之间的关系。结果 CRF组患者血清Chemerin水平为(101.3±31.7)μg/L,高于对照组的(68.4±25.4)μg/L,差异有统计学意义(t=2.656,P<0.01);hs-CRP水平为(3.80±0.88)g/L,高于对照组的(1.60±0.76)g/L,差异亦有统计学意义(t=2.241,P<0.05)。CRF患者血清Chemerin水平与GFR呈负相关(r=-0.58,P<0.01),与BUN、Scr、hs-CRP水平均呈正相关(r=0.43,P<0.05;r=0.51,P<0.05;r=0.41,P<0.01)。多元逐步回归分析发现GFR是影响血清Chemerin水平的独立相关因素。结论 CRF患者的血清Chemerin水平与肾功能有关,随肾功能的降低,其血清Chemerin水平升高。     

人ULBP3在不同肿瘤细胞和肿瘤组织的检测及分析北大核心CSCD

目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在不同类型肿瘤细胞和不同实体肿瘤中的表达。方法流式细胞术检测膜型ULBP3在SW620结直肠癌细胞、SGC7901胃癌细胞、A549肺癌细胞和结肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中的表达情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中ULBP3的表达;时间分辨荧光免疫分析法检测肿瘤细胞株培养上清和肿瘤患者血清可溶性ULBP3(sULBP3)的水平。反转录PCR方法检测ULBP3 mRNA在肿瘤中的表达。结果 ULBP3在SW620细胞、SGC7901细胞中表达,在A549细胞中不表达;ULBP3在结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中广泛分布;sULBP3存在于SW620细胞、SGC7901细胞培养上清液和结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌患者血清中。结论 ULBP3可在不同实体中肿瘤细胞表达,血清sULBP3是潜在的肿瘤标志物。     

细胞组织化学染色及其酶型对急性早幼粒细胞性白血病的诊断意义

近年来 ,随着免疫分型、染色体、分子生物学等新技术的应用与发展 ,大大提高了对各种白血病的鉴别诊断。但作为基础的血细胞组织化学染色却不容忽视 ,通过观察其表现出的阳性率和积分 ,尤其是酶型(骨髓片行组化染色后 ,其酶反应处呈现的不同形状称酶型 )将有助于鉴别各种白血病 ,现将其在急性早幼粒细胞性白血病 (Ｍ3 )中的表现介绍如下。1　对象和方法1.1　对象　 1999年 3月～ 2 0 0 0年 4月 ,天津血液病研究所门诊和住院的初诊Ｍ3 病人 6 5例 ,均经形态学 (异常早幼粒≥ 30 % ) ,免疫学和染色体等检查而确诊。1.2　方法　ＰＯＸ(过氧化物…     

人GITR_(aa27-165)蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

目的: 表达和纯化人GITR胞外段(hGITRaa27-165)融合蛋白, 制备hGITRaa27-165融合蛋白的兔源性多克隆抗体(pAb).方法: 利用PCR从pGEM T-hGITR获得hGITRaa27-165编码序列, 将其亚克隆至原核表达载体pQE30, 构建重组表达质粒pQE30-hGITRaa27-165; 将阳性重组质粒转化大肠杆菌, IPTG诱导表达融合蛋白, 通过Profinity IMAC Ni-Charged Resin亲和层析柱进行纯化; 纯化蛋白免疫新西兰大白兔, 获取多克隆抗血清并利用Protein A Sepharose柱进行纯化, ELISA法检测抗体效价, Western blot法检测抗体特异性.结果: 构建了pQE30-hGITRaa27-165原核表达载体, 原核蛋白hGITRaa27-165蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达, 通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hGITRaa27-165蛋白, 蛋白浓度为400 mg/L, 制备的抗hGITRaa27-165多抗效价高达1:1.6×105, Western blot鉴定其具有良好的特异性.结论: 获得高纯度hGITRaa27-165蛋白, 并制备特异性pAb, 将为进一步研究hGITR的生物学功能提供实验基础.     

RIA一抗包被管法在实际应用中所存在问题的探讨

放射免疫分析(RIA)一抗包被管法特点是将RIA反应体系中的第一抗体包被试管 . 在实际使用中 , 第一抗体在RIA反应体系中的首先存在使常规加样方式打破了RIA原有的竞争格局 , 标本的加入就会立即发生抗原、抗体特异性结合反应 , 有违RIA(平衡法)的基本原理 , 最终影响结果的准确性 . 本文以FT4 RIA一抗包被管法为例 , 做了下列验证试验 .