糖皮质激素性骨坏死动物模型的构建

目的探讨构建糖皮质激素性骨坏死动物模型的方法。方法 6月龄雌性新西兰兔10只,体质量（2.6±0.5）kg。用16号骨髓穿刺针穿透右侧股骨大粗隆间部骨皮质向骨髓腔内缓慢注射9.68×10-3M地塞米松,50 s注完,之后每间隔24 h于耳缘静脉给予地塞米松7.5 mg/kg,共5次。第8周取右侧粗隆间部骨组织标本进行大体和组织学观察。结果本组10只动物中有5只股骨大粗隆间部可见坏死骨组织,为色泽增白区域及黄色区域（正常骨组织为黄褐色）;组织学观察骨组织空骨陷窝形成;小梁骨之间脂肪细胞肥大,脂肪组织增生,压迫、取代红骨髓;骨髓纤维组织增生明显,新生骨形成。结论糖皮质激素大剂量局部注射联合全身应用可成功构建兔糖皮质激素性骨坏死模型。     

地塞米松诱导成骨细胞凋亡的蛋白激酶C途径

背景：地塞米松以增加细胞周期时间的方法提高细胞凋亡来减少成骨细胞和骨细胞的数量。蛋白激酶C是细胞内信号传导通路的一种,与细胞凋亡有关已有相关文献报道。目的：探讨地塞米松诱导成骨细胞凋亡在蛋白激酶C细胞内信号转导途径方向的机制。方法：取胎鼠骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,分为塞米松模型组、佛波醇组和星型胞菌素组。地塞米松模型组加入1×10-6 mol/L地塞米松,佛波醇组加入1×10-6 mol/L地塞米松和1×10-7 mol/L佛波醇,星型胞菌素组加入1×10-6 mol/L地塞米松和1×10-7结果与结论：地塞米松可明显的诱导凋亡,加入佛波醇后凋亡明显增加,加入星形孢菌素后凋亡明显减少。加入地塞米松后胞浆的蛋白激酶C明显减少,包膜明显增加。加入地塞米松不同时间,胞浆和胞膜的蛋白激酶C变化在30 min最明显。说明地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制与蛋白激酶C有关,地塞米松为蛋白激酶C激动剂。细胞受到刺激后,胞浆的蛋白激酶C转移至包膜,胞浆中的蛋白激酶C量减少,包膜中的增加。mol/L星型胞菌素,观察不同干预组细胞的增殖或抑制,并对细胞膜及细胞质中蛋白激酶C含量的变化进行检测。     

四环素对糖皮质激素诱导的骨髓间充质干细胞损伤的保护作用

目的 探讨四环素对糖皮质激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）损伤的保护作用。方法体外建立糖皮质激素诱导大鼠BMSCs损伤模型，分离与体外培养大鼠BMSCs。将大鼠BMSCs分为正常对照组、激素对照组，四环素4、20、100、500ng／ml浓度组。采用吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色法观察四环素对激素诱导的BMSCs凋亡的影响；采用MTT法检测各组BMSCs活性，绘制细胞生长曲线；用免疫组织化学方法对细胞凋亡因子bcl-2、bax进行分析；Westernblot测定细胞凋亡因子caspase-3表达。结果吖啶橙／溴化乙锭染色显示细胞损伤为凋亡。四环素对激素抑制BMSCs的增殖有明显保护作用，并与四环素的浓度成一定的量效关系；100μg／ml的四环素能明显阻断激素诱导的BMSCs凋亡，其机制可能与提高bcl-2表达、降低bax、caspas-3表达有关。结论四环素具有保护激素诱导的BMSCs损伤的作用，这为早期干预治疗激素性骨坏死提供了依据。     

地塞米松诱导成骨细胞凋亡的蛋白激酶C途径

背景：地塞米松以增加细胞周期时间的方法提高细胞凋亡来减少成骨细胞和骨细胞的数量。蛋白激酶C是细胞内信号传导通路的一种,与细胞凋亡有关已有相关文献报道。 目的：探讨地塞米松诱导成骨细胞凋亡在蛋白激酶C细胞内信号转导途径方向的机制。 方法：取胎鼠骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,分为塞米松模型组、佛波醇组和星型胞菌素组。地塞米松模型组加入1×10^-6 mol/L地塞米松,佛波醇组加入1×10^-6 mol/L地塞米松和1×10^-7 mol/L佛波醇,星型胞菌素组加入1×10^-6 mol/L地塞米松和1×10^-7 mol/L星型胞菌素,观察不同干预组细胞的增殖或抑制,并对细胞膜及细胞质中蛋白激酶C含量的变化进行检测。 结果与结论：地塞米松可明显的诱导凋亡,加入佛波醇后凋亡明显增加,加入星形孢菌素后凋亡明显减少。加入地塞米松后胞浆的蛋白激酶C明显减少,包膜明显增加。加入地塞米松不同时间,胞浆和胞膜的蛋白激酶C变化在30 min最明显。说明地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制与蛋白激酶C有关,地塞米松为蛋白激酶C激动剂。细胞受到刺激后,胞浆的蛋白激酶C转移至包膜,胞浆中的蛋白激酶C量减少,包膜中的增加。     

脂多糖对体外培养成骨细胞凋亡影响的初步实验研究

目的探讨脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)对成骨细胞凋亡的影响。方法体外培养成骨细胞作为细胞模型,对照组采用10%的FBS的DMEM/F12培养液培养,干预组在对照组正常培养1 d后加入10mmol/LLPS培养。取第3代成骨细胞按实验设计分组,于LPS作用后第1、3、5和7天进行形态学观察及成骨细胞增殖的检测,于LPS作用后第3、7、10和14天进行成骨细胞分化指标检测,于LPS作用后第1天采用流式细胞仪对成骨细胞凋亡进行检测。结果两组第1天细胞增殖差异无显著性(P>0.05),干预组第3、5和7天细胞增殖率低于对照组,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。培养后第3、7、10和14天,对照组细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)逐渐升高,干预组细胞ALP、BGP逐渐降低(P<0.05);同期比较,干预组细胞ALP和BGP含量低于对照组(P<0.01)。对照组成骨细胞第1天自发性凋亡率低于干预组(1.61±0.39)%<(3.14±0.60)%,差异有显著性(P<0.01)。结论一定浓度的内毒素可以诱导体外培养成骨细胞发生凋亡,并使其增殖与分化能力逐渐减弱。