联合检测血清和胸水中多项肿瘤标志物对良恶性胸水的鉴别诊断价值

目的：探讨联合检测血清、胸水（胸腔积液）中人组织多肽特异性抗原（TPS）、可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR）、恶性肿瘤生长因子（TSGF）、癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、细胞角质蛋白19片断（CYFRA21-1）对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：79例临床已确诊的胸腔积液患者（恶性47例,结核性32例）的血清和胸腔积液采用酶免疫法进行TPS、sTNFR、TSGF、CEA、NSE、CYFRA21-1含量测定。结果：恶性胸腔积液患者的6种肿瘤标志物水平均明显高于良性疾病组,差异有统计学意义（P〈0.05）。联合检测血清及胸腔积液6项指标,平行试验对恶性胸腔积液诊断的敏感度为95.7%,特异度为59.4%,准确度为81.0%,Youden指数为0.6,较检测单一指标提高了诊断的敏感度、准确度及Youden指数;序列试验则对恶性胸腔积液诊断的敏感度为48.9%,特异度为93.8%,准确度为67.1%,Youden指数为0.4,较检测单一指标提高诊断的特异度、准确度及Youden指数。结论：联合检测血清、胸腔积液中TPS、sTNFR、TSGF、CEA、NSE、CYFRA21-1对良恶性胸腔积液的鉴别诊断有重要价值,能提高诊断准确率。     

某型号免疫分析仪甲胎蛋白分析性能验证

目的对Beckman DXI800免疫分析仪甲胎蛋白(AFP)分析性能进行验证。方法根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)系列文件制定实验方案,对该免疫分析仪检测AFP的精密度、准确度、灵敏度、测量范围、分析干扰、参考区间进行验证,并与厂商声明的性能或公认的质量标准进行比较。结果精密度、灵敏度、临床可报告范围、分析干扰、参考区间均符合厂家标准,准确度达卫生部要求。结论 Beckman DXI800免疫分析仪AFP分析性能符合质量目标要求,CLSI实验评价方案具有可操作性和实用性。     

H5N1亚型禽流感病毒NSl蛋白表达影响因素分析

目的 优化高表达禽流感病毒NS1蛋白的实验方法。方法将基因工程菌接种LB培养基,设定IPTG终浓度为0.3mmol／L,诱导温度为37℃,诱导表达6．0h,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况,确定最佳诱导时间。以o．1mm01／L为梯度,设置不同IPTG诱导浓度,37℃诱导4.0h,分析融合蛋白表达,确定最佳IPTG诱导浓度。设定IPTG至终浓度为0。6mmo1／L,分别于24℃、28℃、32℃、37℃和42℃下诱导表达4．0h,分析融合蛋白表达,确定最适诱导温度。采用最优表达条件,超声裂菌后SDS-PAGE分析融合蛋白,Westernblotting对融合蛋白进行鉴定。结果当培养温度为37℃,IPTG浓度为0。3mmol／L时,融合蛋白GST-NSl在IPTG诱导5．0h时的表达量最高,达28．5％;当IPTG诱导浓度为0。6ram01／L,在37℃诱导表达4。0h时,融合蛋白的表达量可达27．9％。选用优化的表达条件,IPTG0．6mmo1／L,37℃诱导表达4．0h,融合蛋白的表达量最高可达33．2％。进一步分析显示,融合蛋白大部分以可溶形式表达,其表达量可占菌体总蛋白的25．1％。经SDS-PAGE电泳、电转移后,用小鼠抗GST单克隆抗体进行免疫印迹分析,出现一条阳性反应带。结论通过实验优化了工程菌诱导表达的最佳IPTG浓度、最适时间和培养温度,实现了融合蛋白的可溶性高表达。     

肿瘤标志物联合检测诊断卵巢恶性肿瘤的价值

目的研究糖类抗原-125(CA125)、恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)、癌胚抗原(CEA)以及可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)四种血清肿瘤标志物联合检测在卵巢恶性肿瘤诊断中的价值。方法选取深圳市龙岗区人民医院2010年2月至2013年7月恶性卵巢肿瘤患者50例,良性卵巢肿瘤患者62例,同时选取门诊健康女性60例作为健康组,测定各组人群CA125、TSGF、CEA以及SIL-2R水平,评价四种血清肿瘤标志物的敏感度和特异度。结果四种血清肿瘤标志物在恶性卵巢肿瘤患者中明显高于良性组和健康人群组,差异有统计学意义(P0.01);四种血清肿瘤标志物诊断卵巢恶性肿瘤的敏感性依次为CA125TSGFCEASIL-2R,特异性高低依次为SIL-2RCEATSGFCA125。四种肿瘤标志物进行平行诊断试验中敏感性高达100%,在系列诊断试验中特异性高达98.39%。结论CA125、TSGF、CEA以及SIL-2R四种血清肿瘤标志物联合检测诊断卵巢恶性肿瘤具有较强的可靠性,临床上值得推广使用。     

血浆凝血因子XⅢ、IL-17水平与脑梗死相关性及预后的研究

目的：探讨血浆凝血因子XⅢ（FXⅢ）、IL-17水平与脑梗死患者病程进展及预后的相关性。方法：①对50例脑梗死患者根据头部CT或MRI病灶大小,梗死体积按Pullicino公式（长×宽×层数／2）计算进行分组：大梗死组（病灶体积〉10cm3）,中梗死组（病灶体积4～10cm3）,小梗死组（病灶体积〈4cm3）;健康对照组20例,神经功能受损程度按照NIHSS进行评分。分别在24h内、第3天、第7天、第14天采集脑梗死组抗凝血标本。采用酶联免疫双抗体夹心法检测FXⅢ、IL-17含量。②根据脑梗死组发病24h内和第14天的NIHSS评分进行近期预后分型比较。结果：①大梗死组发病24h内FXⅢ、IL-17水平明显高于对照组（P〈0．01）,中、小梗死组发病24h内FXⅢ、IL-17水平高于对照组（P〈0．05）。②大梗死组FXⅢ、IL-17水平与小梗死组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。③随着梗死病情好转,FXⅢ、IL=17水平有下降趋势（P〉0．05）。④脑梗死组患者近期预后与FXⅢ水平下降呈正相关（r=0．33）,与IL-17水平下降呈正相关（r=0．31）。结论：脑梗死患者血浆FXⅢ、IL-17水平与病程及预后呈正相关,其水平变化可作为脑梗死治疗及预后的判断指标。     

2 型糖尿病患者ABCA1 R219K 基因多态性分布及其与血脂水平的相关性研究

目的 研究三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1) R219K 基因多态性在2 型糖尿病（T2DM）患者中的分布情况，探讨其与2 型糖尿病患者血脂的关系。方法 选取2015 年12 月~ 2017 年4 月期间深圳市龙岗区人民医院收治的85 例T2DM 患者和90 例健康体检对照组纳入研究，对两组研究对象进行血液标本采集，采用聚合酶链反应（PCR）- 限制性片段长度多态性（RFLP）检测ABCA1 R219K 等位基因和基因型频率情况，对比两组患者血脂水平以及研究组不同基因型患者血脂水平情况，进一步探讨T2DM 患者ABCA1 R219K 基因多态性及其与血脂水平的关系。结果 两组研究对象TC，TG，HDL-C 和LDL-C 水平对比差异均无统计学意义（t=0.191，0.853，0.755 和0.597，均P>0.05）。两组研究对象ABCA1 R219K 等位基因和基因型频率对比差异均无统计学意义（t=0.860，2.393，均P>0.05）。ABCA1R219K 等位基因三种基因型之间TC，TG 和LDL-C 水平差异无统计学意义（F=0.02，0.14，2.00 和0.06，P>0.05）；KK 基因型HDL-C 水平明显高于RR 和RK 基因型，差异有统计学意义（t=2.543 和2.630，P<0.05）；RR 和RK 基因型之间HDL-C 水平差异无统计学意义（t=0.238，P>0.05）。结论 ABCA1 R219K 基因多态性并不是T2DM 发病的遗传学标志，但其变异参与了T2DM 患者脂代谢异常的调节。     

TNF-α和IL-6在重症急性胰腺炎患者血清中的变化及临床意义

目的探讨TNF-α和IL-6在重症急性胰腺炎（SAP）患者血清中的动态变化及临床意义。方法选取2001年10月～2010年7月入住我院的急性胰腺炎患者60例,按照病情程度分为SAP组、轻症急性胰腺炎（MAP）组．每组30例,同时将健康体检者30例作为空白对照组,用ELISA法分别检测三组人院第1天、第3天、第7天、第14天血清TNF-α、IL-6的水平,结果进行统计学分析。结果人院时SAP组TNF—α水平[（59．6±14．7）pg／mL]显著高于MAP组[（38．3±9．1）pg／mL]和空白对照组[（13．8±4．3）pg／mL]（P〈0．05）,MAP组患者血清TNF-α水平也较空白对照组显著升高（P〈0．05）,但IL-6水平SAP组f（45．8±11．2）pg／mL]和MAP组f（42．9±12．9）pg／mL]均较空白对照组f（38．9±10．9）pg／mL]无明显升高（P〉0．05）;SAP组血清IL-6在入院的第7天升高最明显[（190．1±49．9）pg／mL],分别高于MAP组[（113．9±28．1）pg／mL]和空白对照组（P〈0．05）,MAP组亦明显高于空白对照组（P〈0．05）;在人院第14天SAP组血清TNF—α[（36．8±7．1）pg／mL]、IL-6[（113．1±24．7）pg／mL]仍然高于MAP组[（14．8±3．3）、（43．6±12．8）pg／mL]和空白对照组（P〈O．05）,而MAP组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论重症急性胰腺炎患者治疗前后血清TNF-α和IL-6的水平变化。可以作为对该病的早期诊断、病情判断和预后评估的依据之一,具有重要的临床应用价值。     

H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价。结果 SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4 h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%,融合蛋白的纯度达到90%以上。Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明,皮下注射25、50、100μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P<0.01),其滴度达到1∶3 200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达。结论成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性。