IL-12基因转染的人树突状细胞加强细胞免疫反应的体外研究

目的:探讨IL-12基因转染的树突状细胞(DCs)能否体外加强细胞免疫反应.方法:脂质体转染(经过Flt-3L、SCF、GM-CSF刺激)增殖周期中的DCs前体细胞.加入GM-CSF、IL-4和TNF-α扩增转染细胞.在流式细胞仪上分析细胞表型及IL-12的表达.成熟DCs装载上分别能与HLA-I 类和HLA-II类分子结合的多肽,观察IL-12基因转染DCs对特异性Th细胞发育及特异性CTL诱导和功能的影响.结果:IL-12基因转染细胞在上述细胞因子作用下发育成为能有效表达IL-12并具有典型形态学与表型特征的DCs.在装载上CD4+T细胞表位HBcAg50-69后,能诱导这些细胞发育成为IFN-γ产生型的Th1细胞.HLA-A201亚型DCs在其同时装载CD4+T和CD8+T细胞相应的表位后,IL-12 基因转染DCs所诱导产生的自身淋巴细胞的CTL效应增强.结论:IL-12基因转染的DCs能增强对Th1细胞的刺激和CTL效应的诱导能力,提示它在肿瘤疫苗发展中的潜力.     

慢性乙肝病毒感染者进展为肝癌病程中血清循环免疫复合物的含量变化和意义

目的 探讨人外周血清循环免疫复合物(CIC)的含量变化与肝癌发生的关系.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测20例临床病理确诊的肝癌和13例肝血管瘤患者术前血清中CIC的含量.采用ELISA法检测45例慢性乙肝病毒(HBV)感染最终进展为肝癌者以及与之匹配的45例慢性HBV感染未进展为肝癌者入组时、随访过程中和随访结束时血清中CIC和抗肝肾微粒体抗体(抗LKM-1)的含量,采用荧光定量PCR法检测这些患者入组时、随访过程中和随访结束时血清HBV-DNA的含量.结果 20例临床手术后病理确诊的肝癌患者术前血清中CIC的含量为(5738±1485)mU/L,显著高于13例肝血管瘤患者[(2410±1080) mU/L;P＜0.001].45例经过长期随访最终进展为肝癌的慢性HBV感染者血清CIC的含量随病程进展而逐渐升高,在肝癌临床诊断时达到最高,与其入组时相比,差异有统计学意义(P＜0.001);而对照组患者血清CIC的含量未见明显变化(P=0.118).随访方过程中,血清CIC的升高与肝癌累积发病率密切相关(HR =2.77,95％ CI为1.47～5.22).最终进展为肝癌的慢性HBV感染者在入组时、随访进程中和临床确诊为肝癌时的血清抗LKM-1和HBV-DNA含量均显著高于与之相匹配的对照组,并维持在较高水平.最终进展为肝癌的慢性HBV感染者血清CIC的含量与HBV-DNA的含量之间仅在肝癌临床诊断时存在相关性(r=0.344,P=0.026).结论 在慢性HBV感染进程中,血清CIC含量的逐渐升高可能是由慢性HBV感染进展为肝癌的重要转归指标之一.     

启东市乙肝干预研究随访人群高血压发生率及与体重指数的关联研究

目的 了解启东市乙肝干预研究队列随访人群体重指数、血压水平的分布特征,探讨两者间的关联,为慢性病预防研究提供基础资料。方法 采用横断面调查方法,在2013年1~10月对启东市乙肝干预研究队列研究对象分层随机抽样,进行问卷调查（社会人口学特征、吸烟饮酒）和体格检查（测量身高、体重、血压）,收集健康体检数据,分析研究对象的性别、体重指数及烟酒嗜好与血压间的关联。结果 本次调查抽样人群8269人,超重率和肥胖率分别为17.90%和5.74%,高血压发生率为14.60%。男性高血压发生率高于女性,差异有统计学意义（P<0.05）。男女性高血压发生率随体重指数的增加而上升,趋势检验差异均有统计学意义（P均<0.05）。吸烟者与饮酒者高血压患病率分别高于不吸烟者和不饮酒者,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 结合调查结果,应加强对启东市乙肝干预研究队列青年群体健康宣传教育,倡导健康生活习惯,积极控制超重与肥胖,减少高血压发病风险。     

乳糖化聚赖氨酸共价结合物的制备和分析

目的：化学合成乳糖化聚赖氨酸共价结合物，分析其组成，方法：以氰基硼氢化钠为还原剂通过还原氨化将乳糖（Lac)与聚赖氨酸（PLL）共价连接，用SephadexG10纯化后用分光光度法分析其组成，红外光谱确定结构。结果：红外光谱分析显示糖与聚氨酸形成了共价结合物，组成分析确定乳糖与聚PLL的摩尔比为16：1，结论：分析结果表明，成功制备出了结构，组成确定的共价结合物。     

T淋巴细胞抗原受体的结构和功能

1 抗原受本在 T 细胞发育中的功能膜结合抗原受体在调节淋巴细胞的存活、生长和分化过程中发挥着关键性作用。原 T 细胞进入胸腺微环境后,T 细胞抗原受体(TCR)β基因首先进行重排,其重排过程具有等位排斥现象。TCRα链缺乏时,V—D—J 重排的 TCRβ链在转化的鼠胸腺细胞表面也能表达。细胞浆内的 CD_3成分保留至功能性 TCRα链重排发生时。     

流行性出血热病毒感染乳鼠脑组织的病理组织学与电镜观察

对分离自急性期病人尿液中的１株流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）１１４株感梁的乳鼠脑组织进行了病理组织学和电镜观察，结果显示感染乳鼠脑组织呈病毒性脑炎样改变，以海马回和大脑皮层的病变较重，海马回神经元细胞内质网和高尔基复合体明显扩张，池内和囊泡内均有管样结构，部分神经元细胞核回铝，核膜完整结构消失。成熟的病毒颗粒呈圆形或椭圆形，直径８０～１６０ｎｍ，病毒是从高尔基囊泡膜内壁上芽生进入池内的。这些形态学和形态发生学特征符合布尼安病毒科汉坦病毒属的特征，并从超微结构上为ＥＨＦＶ直接作用的发病学说提供了证据。     

椰毒假单胞菌部分16srRNA序列测定法

详细介绍了椰毒假单胞菌部分１６ｓｒＲＮＡ序列测定法。常规提取细菌ＤＮＡ，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增目的基因，琼脂糖凝胶电泳后回收目的基因。纯化后克隆到Ｍ１３ｍｐ１９噬菌体上，转染大肠杆菌ＪＭ１０９菌株。挑选无色噬斑扩增并提取其双链ＤＮＡ，酶切分析为阳性克隆，提取其单链ＤＮＡ在ＡＢＩ公司３７０Ａ型自动测序仪上测序。     

人IL—12双亚基共表达载体的构建及其表达

构建人ＩＬ－１２的高效表达载体。方法采用ｐＣＤＮＡ３．１从已克隆ｐ４０ｃＤＮＡ基因与国外提供的ｐ３５ｃＤＮＡ基因上获得相应的编码荐因，分别构建表达载体进行转染。此后，又利用ｐＬＸＰＸＳＮ构建ＩＬ－１２双亚基共表达的逆转录病毒载体转导人肝癌细胞株，并经Ｇ４１８筛选。结果有功能活性的ＩＬ－１２的产生需要ｐ３５和ｐ４０基因的等量共转染，为此，人ＩＬ－１２双亚基共表达载体在转肝癌细胞株并经选择后，上清液中     

IL-12基因转染B细胞的抗原提呈功能研究

目的 以IL-12双亚基共表达载体pL35P40SN转染B细胞,并检测其对Th细胞发育分化和CTL功能的影响。方法 尼龙毛法分离T,B细胞,以pL35P40SN转染B细胞,并以ELISA检测其IL-12的分泌,以IFN-γ的合成分泌检测其对Th1细胞发育分化的影响,以^3H-TdR法检测其对CTL特异杀伤HepG2细胞功能的影响。结果 以pL35P40SN转染B细胞后,pL35P40SN基因转染的B细胞IL-12分泌量、Th应答细胞上清IFN-γ分泌量和CTL的杀伤功能显著高于pLXPXSN和未转染的细胞。结论 pL35P40SN转染B细胞后,可刺激Th1细胞发育分化和CTL的特异性杀伤功能。     

乳糖-聚赖氨酸复合物对肝细胞导向能力的研究

目的 :利用肝细胞膜存在的去唾液酸糖蛋白受体 ,合成一种能够携带目的DNA分子特异性富集到肝组织中的载体。方法 :在弱碱性溶液中 ,在氰基硼氢化钠作用下 ,通过还原氨化法进行乳糖 (Lac)与聚赖氨酸 (PLL)的共价连接 ,SephadexG 10分离纯化产物 ;采用真核细胞表达基因 β 半乳糖苷酶报道基因 ,在细胞培养中和小鼠体内观察乳糖 聚赖氨酸复合物 (Lac PLL)对肝细胞的导向能力。结果 :Lac在氰基硼氢化钠作用下能有效地结合到PLL分子上 ,Lac与PLL的摩尔比为 16∶1;Lac PLL复合物在体外能够与DNA分子形成稳定偶联物 ,使其所偶联的DNA分子有效地进入到肝癌细胞 ,并使相应基因在细胞中表达。小鼠尾静脉注射DNA/Lac PLL偶联物10 μg后 ,DNA能有效地在肝组织中富集并在肝细胞中表达。结论 :Lac PLL是一种有效的对目的DNA分子具有肝细胞特异性导向能力的载体。