幽门螺杆菌结构性群体形成的研究

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)由浮游状单细胞转变成结构性群体过程中蛋白质表达差异。方法 用超微结构形态观察及双向电泳技术比较浮游状幽门螺杆菌及其结构性群体全菌蛋白表达图谱的差异，将结构性群体形成过程中表达量显著增加的蛋白斑点，进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸，电离飞行时间质谱仪进行质谱分析，获得4个明确的肽质量指纹谱，通过蛋白质数据库进行检索分析。结果 与结构性群体形成密切相关的蛋白质为鞭毛丝帽蛋白、2-磷酸甘油酸醋脱水酶、3，和邻苯二酚-2-丁酮4-磷酸盐合成酶和热休克蛋白33同类物。结论 上述蛋白的鉴定将有助于发现幽门螺杆菌新的致病因子以及抗菌靶位。     

减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建

目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 ,并构建了HPV16pCMVnirL1E7新型DNA疫苗     

评价自身抗体联合检测在诊断自身免疫性疾病中的应用

目的探讨检测抗核抗体（ANA）核型与抗可提取性核抗原（ENA）抗体及抗双链DNA（ds,DNA）抗体之间的相关性,提高对自身免疫性疾病（AID）的诊断及鉴别诊断参考价值。方法资料来源门诊及住院的AID病例血清标本进行检测,ANA检测采用问接免疫荧光法（IIF）,抗ENA抗体检测采用欧蒙斑点法（抗nRNP／SIn、Sm、SSA／Ro、SSB／Lo、Scl-70和Jo—1）六项抗体及抗（ds—DNA）抗体采用ELISA法检测。结果在98例ANA阳性病例血清标本中核型分布为：细胞核均质型（36．74％）,细胞核颗粒型（41．84％）,细胞核仁型（11．22％）,细胞核膜型（1．02％）,细胞核着丝点型（1．02％）;重叠核型中细胞核均质型／细胞核颗粒型（2．04％）,细胞核均质型／细胞浆颗粒型（6．12％）等。98例ANA与ENA同时阳性血清标本中42例抗双链DNA抗体阳性（42．86％）。36例均质型阳性样本中抗SSA／Ro抗体（24．48％）,抗SSB／Lo抗体（6．12％）,抗nRNP／Sm抗体（6．12％）。41例细胞核颗粒型阳性样本抗nRNP／Sm抗体（19．39％）,SSAfRo抗体（15．31％）,抗SSB／Lo抗体（6．12％）。ANA阳性可出现一种或多种自身抗体。结论ANA常见核型有：细胞核颗粒型,细胞核均质型及细胞核仁型。ANA均质型核型检出的抗ds-DNA抗体为主,且抗ds—DNA抗体含量与荧光强度成正比。ANA核型与抗ENA抗体二者之间有一定的相对应性。ANA及核型、抗ENA抗体和抗ds—DNA抗体的联合检测可明确诊断AID,而且利于判断患者血清中各种自身抗体与临床表现的关系。     

女性痤疮患者血清IL-1α、sIL-2R和TNF-α水平的检测

目的探讨血清IL-1α、sIL-2R、TNF-α水平与女性寻常性痤疮的关系。方法采用ELISA法检测82女性寻常性痤疮名患者及30例对照女性血清IL-1α、sIL-2R、TNF-α。结果痤疮患者血清中IL-1α、sIL-2R、TNF-α表达水平均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);I级痤疮患者IL-1α、sIL-2R表达水平均显著低于Ⅱ级、Ⅲ级(P<0.03)。结论IL-1α、slL-2R、TNF-α在女性痤疮发病中起着重要的作用。     

幽门螺杆菌细胞微生物学模型的研究

目的 建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞微生物学研究模型。方法 选择6至8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系。结果 螺杆状Hp很快与人胃粘膜上皮细胞微绒毛粘附,Hp粘附细胞处形成一个致密纤维样肌动蛋白垫,上皮细胞膜杯状内陷包绕Hp,紧密粘附于宿主细胞,Hp粘附下方细胞内微丝、微管和肌动蛋白呈局灶性聚集。圆球形Hp可出现类似生物学效应,提示两种形态的Hp皆可作用于人胃粘膜上皮细胞。此外,螺杆状Hp还可与宿主细胞膜融合,被细胞内在化,细胞内出现空泡效应。上述病理性改变与Hp感染的胃粘膜活性组织标本的检查结果基本一致。结论 原代胃粘膜上皮细胞与Hp相互作用近似于Hp体内致病的微环境,是Hp细胞微生物学研究的良好模型。     

幽门螺杆菌蛋白质组双向电泳图谱的构建及其相关技术体系的建立

目的:建立针对幽门螺杆菌蛋白质组学研究的双向电泳及其相关技术体系。方法:分别采用冻融兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10裂解提取法和超声兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10裂解提取法提取Hp菌体蛋白,取100μg菌体蛋白利用固相pH梯度等电聚焦双向电泳,对硝酸银染色后获得的双向电泳图谱进行图像分析。结果:冻融兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解液一步提取法获得573±29个蛋白斑点,超声兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解液一步提取法获得921±23个蛋白斑点。结论:超声兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10菌体蛋白提取法提高了双向电泳的分辨率,进而可增强生物质谱鉴定蛋白质的准确度。     

白细胞介素-1B基因多态性分布与胃癌易感性的相关性研究

目的 研究白细胞介素-1B(IL-IB)基因多态性与胃癌间的相关性，建立本地区IL-1B基因多态性正常分布。方法 应用基因芯片测定了54例济南地区正常人群中IL-1B基因启动子区域内-31(T-C转换)和-511(C-T转换)位点多态性。结果 本组-31CC、-31CT、-31TT和-31C携带者出现的频率分别为27％、70％、3％和97％；-511CC、-511CT、-511TT和-511T携带者出现的频率分别为39％、35％、26％和60％；-31CC／-511TT基因频率(14．5％)高于-31TT／-511CC基因频率(5％)。结论 不同地区和不同种族间IL-1B-31和-511位点多态性分布存在差别，这种差别与不同地区和种族间胃癌的易感性相关。     

腹腔镜检查结合RT—PCR在胃癌诊疗中的临床意义

目的：探讨进展期胃癌术前腹腔镜检查与RT—PCR检测腹腔灌洗液中游离癌细胞CEAmRNA的表达水平，在胃癌患者术后微转移及预后的临床意义。方法：对22例进展期胃癌患者术前行腹腔镜探查，灭菌生理盐水冲洗腹腔4～5次，收集脱落细胞．进行细胞学检查和RT—PCR检测CEAmRNA表达水平。结果：22例胃癌患者中，细胞形态学捡测31．8％（7／22）阳性，RT—PCR捡测54．5％（12／22）CEAmRNA阳性表达，二者阳性率有显著性差异（P〈0．05）。结论：诊断性腹腔镜检查、RT—PCR与PLC有效结合，可提高腹腔转移复发诊断的灵敏性和特异性，有助于对胃癌分期、淋巴转移和预后的综合判断，对胃癌的辅助治疗提供依据。     

幽门螺杆菌球形休眠体形成的比较蛋白质组学研究

目的　研究幽门螺杆菌由螺杆状转变成球形休眠体的相关蛋白。方法　运用双向电泳技术比较螺杆状幽门螺杆菌及其球形休眠体全菌蛋白表达谱 ,差异蛋白进行胶内酶切 ,肽混合物使用基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱仪 (MALDI TOF MS)进行质谱分析 ,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果　获得 9个与幽门螺杆菌球形休眠体形成相关蛋白 ,即相对分子质量 (Mr)为 2 6× 10 3的过氧化物酶、硫氧还蛋白、烯醇酶、黄素氧化还原蛋白、单链DNA结合蛋白、翻译起始因子 1、延长因子P、中性粒细胞激活蛋白和Mr 为 10× 10 3的热休克蛋白。结论　上述蛋白的鉴定为深入研究幽门螺杆菌球形休眠体形成机制 ,筛选具有潜在价值的抗幽门螺杆菌药物靶位和疫苗候选靶位具有参考价值。     

胃癌微转移诊断研究进展

胃癌微转移是胃癌复发的关键因素。应用RT PCR等分子生物学方法可有效诊断患者骨髓、淋巴结、腹腔灌洗液和外周血中微转移情况并能评价预后和治疗