第六讲 病毒性疾病的免疫防治

由于病毒性疾病的特效化疗药物目前还较少又不理想,免疫防治仍然是控制病毒性感染的最有效措施,包括接种疫苗和免疫球蛋白,最近用转移因子治疗病毒性疾病也有一些苗头。减毒活疫苗和亚单位疫苗研制应用的进展     

第一讲 病毒的基本概念及病毒的发病学

病毒引起的人类疾患远远超过了其他微生物的感染;多数急性感染是由病毒所引起的。常见的病毒性疾病如伤风、流感、麻疹、水痘、肝炎、乙型脑炎、脊髓灰质炎等,不仅感染性强,流行广泛,而且目前还很少有特效药物。近25年来,由于病毒培养和病毒诊断技术的进展,发现了很多新病毒:包括呼吸道感染病毒、肠道感染病毒、虫媒病毒、慢病毒和肿瘤病毒等。临床医生日常医疗实践中经常碰到     

登革病毒对人血管内皮细胞产生细胞因子的影响

目的了解登革病毒感染对人血管内皮细胞产生几种细胞因子的影响。方法用登革病毒Ⅱ型（ＤＶ－２）及ＬＰＳ单独作用或联合作用于人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），于作用后４，２４，４８，７２和９６小时分别收集培养上清液，用ＥＬＩＳＡ法检测ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－６和ＴＮＦα的含量。实验数据采用方差分析处理。结果ＤＶ－２感染能使ＨＵＶＥＣ分泌ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的能力增强。病毒感染后４小时，ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的水平开始升高，并分别于感染后７２和２４小时达高峰，然后开始下降。然而，ＤＶ－２感染并不能提高ＨＵＶＥＣ分泌ＴＮＦα的能力。ＬＰＳ单独作用或ＤＶ－２与ＬＰＳ联合作用均可提高ＨＵＶＥＣ分泌ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的能力，但对分泌ＴＮＦα的能力没有明显的促进作用。结论登革病毒感染能提高ＨＵＶＥＣ分泌ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的能力。细胞因子在登革病毒的致病与免疫过程中可能起重要作用。     

幽门螺杆菌结构性群体形成的研究

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)由浮游状单细胞转变成结构性群体过程中蛋白质表达差异。方法 用超微结构形态观察及双向电泳技术比较浮游状幽门螺杆菌及其结构性群体全菌蛋白表达图谱的差异，将结构性群体形成过程中表达量显著增加的蛋白斑点，进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸，电离飞行时间质谱仪进行质谱分析，获得4个明确的肽质量指纹谱，通过蛋白质数据库进行检索分析。结果 与结构性群体形成密切相关的蛋白质为鞭毛丝帽蛋白、2-磷酸甘油酸醋脱水酶、3，和邻苯二酚-2-丁酮4-磷酸盐合成酶和热休克蛋白33同类物。结论 上述蛋白的鉴定将有助于发现幽门螺杆菌新的致病因子以及抗菌靶位。     

霍乱弧菌O1群和O139群NhaA基因的克隆和变异性研究

霍乱弧菌是一种嗜盐性细菌 ,可在较宽盐浓度和ｐＨ值范围内生长 ,Ｎａ /Ｈ 离子交换泵与此密切相关。ＮｈａＡ基因所编码的ＮｈａＡ蛋白是维持该离子交换泵必需的功能蛋白。ＮｈａＡ基因的变异可使霍乱弧菌适应不同的外环境而得以生存。为了解我国霍乱弧菌Ｏ1群和Ｏ1 3 9群ＮｈａＡ基因的变异性与致病性的关系 ,我们采用ＰＣＲ和序列分析的方法 ,对来源于我国广东省和内地部分省份的 4 0株霍乱弧菌 (包括Ｏ1群和Ｏ1 3 9群 )ＮｈａＡ基因进行克隆和序列比较分析。根据霍乱弧菌Ｏ1群野毒株ＮｈａＡ基因序列 ,设计扩增引物序列为 :上游5′ ＣＣ…     

登革2型病毒NGC株E基因扩增和部分序列分析

目的 体外扩增、克隆登革2型病毒（NGC株）包膜糖蛋白E基因约1．5kb的基因片段,并对目的基因片段进行部分碱基序列测定和分析。方法 采用逆转录聚合酶链反应扩增出E目的基因片段,经限制性内切酶Kpn1/Xbal酶切后用低熔点琼脂糖挖块回收法回收纯化,插入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点,构建重组体pcDNA3-E,转化大肠杆菌DH5a,通过对目的基因片段的部分碱基序列测定鉴定克隆的正确性,并分析其氨基酸变异。结果 从登革2型病毒（NGC株）中扩增出约1．5kb的DNA片段,目的基因片段的部分测序与参考序列的同源性为96．53％,7个氨基酸发生变异,4个变异氨基酸与登革2型病毒Jamaica株相应位置的氨基酸相同。结论 体外成功扩增并克隆DV2（NGC株）全长E基因片段,其序列变异及与其他毒株的同源性研究为登革病毒致病机理和疫苗的研究提供材料。     

应用M13引物PCR指纹法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性

目的探讨M13微卫星引物PCR指纹法用于假丝酵母菌氟康唑耐药性基因分型的可行性。方法采用纸片扩散法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性,并进一步对41株假丝酵母菌进行M13引物PCR指纹分析,采用RAPD200软件邻接法(neighbour joining,NJ)聚类分析电泳带型模式。结果41例主要从痰液和阴道分泌物中分离的假丝酵母菌标本中中,氟康唑药物敏感11株(26.8%),依赖8例(19.5%),耐药22例(53.7%),PCR指纹分析至少可检测到12种不同的条带,条带数目从2条到12条不等,电泳带型模式与感染部位和氟康唑药物反应性有关。结论假丝酵母菌氟康唑耐药性菌珠所占比例较大,M13微卫星引物PCR指纹法可用于假丝酵母菌的分子流行病学调查和氟康唑耐药性基因分型。     

用斑点免疫结合法测定登革病毒单克隆抗体亲和力

建立斑点免疫结合法（ＤＩＡ）测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白ＮＳ１四株单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的相对亲和力，４株ＭｃＡｂｓ对ＮＳ１的亲和力各不相同。按５０％最大结合浓度分析，抗体株６─１／Ｃ为０．０５μｇ／ｍｌ．１─７／Ｆ为０．６７μｇ／ｍｌ．５Ｄ为２５．００μｇ／ｍｌ，３─１１／Ｃ为５７．００μｇ／ｍｌ。以上结果为应用这些单克隆抗体提供了依据。同时，说明用ＤＩＡ法测定ＭｃＡｂ相对亲和力的可行性。     

非同位素标记探针检测登革病毒RNA的研究

用地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ，Ｄｉｇ）、生物素（Ｂｉｏｔｉｎ，Ｂｉｏ）和辣根过氧化物酶（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＨＲＰ）分别标记登革病毒２型（Ｄｅｎｇｕｅｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，Ｄｖ２）的ｃＤＮＡ，制备三种非同位素标记探针，与感染ＤＶ２的Ｃ６／３６细胞上清中病毒核酸做斑点杂交。结果表明：三种标记探针均只与ＤＶ２－ＲＮＡ呈强阳性杂交反应，显示ＤＶ２型特异性；Ｄｉｇ－探针最灵敏，可检出ＤＶ２－ＲＮＡ的最小量为０．１ｐｇ，其次为ＨＲＰ－探针（可检出０．３ｐｇ）和Ｂｉｏ－探针（可检出１～３ｐｇ）。用ＰＣＲ技术制备探针并同步标记比其他方法简便、快速，只需少量模板数小时内可获得足够量的标记探针，是值得推广使用的标记探针制备方法。