CD226基因敲除加重小鼠放射性肝损伤的发生

目的观察CD226基因敲除(KO)对小鼠放射性肝损伤的影响。方法雄性野生型(WT)和CD226KO小鼠随机分为非辐照组和辐照组,非辐照组不经过任何处理,辐照组接受8 Gy ~(60)Co照射建立急性放射性损伤模型。观察小鼠存活和体质量改变情况, HE染色观察肝脏和结肠病变情况,实时定量PCR检测肝和结肠组织炎症因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、 IL-12p40、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA水平。结果与辐照WT小鼠相比,辐照后的CD226KO小鼠体质量明显下降,存活率下降; CD226KO小鼠肝脏损伤加重,肝指数(肝质量/体质量)下降显著, iNOS、 IL-1β、 IL-6、 IL-12p40、 TNF-α、 MCP-1 mRNA水平显著升高;但CD226KO小鼠结肠炎症减轻,炎症因子mRNA水平降低。结论 CD226缺失降低辐照小鼠存活率,与肝损伤加重密切相关。     

人滤泡辅助性T细胞(Tfh)上CD226分子的表达格局

目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析鉴定人滤泡辅助性T(Tfh)细胞,对外周血和扁桃体来源的Tfh上CD226分子的表达格局进行研究,采用免疫组化染色的方法,检测异位淋巴组织来源的生发中心中CD226分子的表达情况.方法:采用密度梯度离心法分离人外周血PBMC;扁桃腺经研磨、200目滤网过滤获取扁桃腺细胞,对两种细胞采用不同荧光素标记的抗CXCR5、CD4及CD226抗体进行染色和FCM分析.常规制备类风湿性关节炎(RA)关节滑膜活检组织石蜡切片,采用免疫组化的方法分析CD226分子的表达格局.结果:外周血及扁桃腺Tfh细胞上可以检测到CD226分子,外周血Tfh上CD226阳性率为(91.88±0.52%),MFI值为201.49±6.2;扁桃腺Tfh上CD226表达阳性率为(90.81±0.69%),MFI值为230.81±8.4,表达密度稍高于其他CD4+T细胞.RA患者关节滑膜组织可以观察到异位生发中心(G,C),并检测到CD226分子的表达.结论:健康人外周血、扁桃腺及RA患者关节滑膜组织中存在不同比例的Tfh细胞,其膜上CD226分子的表达具有独特的格局,该结果为进一步研究其功能提供了思路.     

病毒感染性疾病中血小板减少机制的研究进展

血小板的生物学功能是参与凝血和维持血管系统完整性。血小板减少症见于多种血液系统疾病、放化疗损伤及药物相关性血小板减少,也可作为多种疾病的伴发症状,如肿瘤和感染等。病毒感染性疾病可导致血小板减少,其可能的机制主要有血小板生成减少和消耗增加,且不同病毒导致血小板减少的机制也不尽相同。本文对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、汉滩病毒、登革热病毒及人类免疫缺陷病毒(HIV)等病毒感染性疾病中血小板减少机制研究进展进行综述,特别是新近发现的注射新冠疫苗后发生血栓性血小板减少可能的机制,可为病毒感染性疾病中血小板减少的预防与治疗提供新的思路。     

PBL结合典型病例在高血压教学中的应用和探讨

传统的教学模式偏重于灌输书本知识,忽视了对学生应用和实践能力的培养,使书本知识与临床问题不能有效结合。以问题为基础的学习（PBL）教学法是一种以学生为中心的教学方法,它强调以问题解决为中心,学生在教师的指导下,通过自主探究和合作解决问题,从而掌握隐藏于问题背后的知识点。高血压是一种病程长、并发症多的慢性疾病,它所涉及的知识点多,内容复杂。在高血压的教学中,使用PBL教学法结合典型病例,可以更有效地激发学生的学习积极性,有助于帮助学生全面地掌握高血压的相关知识,提高学生解决问题的能力,从而显著提高学习效果。     

细胞因子诱导的imDCs鉴定及免疫学功能研究

目的:分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)的免疫学功能,诱导同种异体复合组织移植局部免疫耐受性。方法:采用细胞因子诱导培养黏附法,取大鼠骨髓前体细胞,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4细胞因子诱导下培养7 d,收集贴壁细胞光学显微镜观察imDCs的形态学特征,用质量分数2%锥虫蓝染色检测活性细胞率;应用流式细胞仪分析imDCs表面标志分子;MTT比色法测定imDCs与同种异体T淋巴细胞混合培养后T淋巴细胞的增殖能力。结果:制备诱导培养的imDCs具有形态不规则、表面粗糙层叠状皱褶、胞质突起短而多、树枝样分叉明显等典型形态特征;活性细胞率高达93%;表面较特异标志分子OX62为(61.08±4.86)%,OX62阳性细胞表达CD80、CD86、组织相容性复合体-Ⅱ表达率分别为(3.56±0.73)%、(5.38±1.09)%、(6.45±0.74)%,均为较低表达;imDCs对同种异体T淋巴细胞基本无刺激增殖能力。结论:用细胞因子诱导培养黏附法取骨髓前体细胞,可较快分选出活性和纯度较高、数量足够的imDCs,为同种异体复合组织移植诱导免疫耐受防止排斥反应的研究奠定良好的基础。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究

目的 探讨供体抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg),对同种异体复合组织 移植(CTA)受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响.方法 采用免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg,将数 量1×10~6的CD4~+CD25~+Treg输注入CTA受体的大鼠,术后30 d采取外周血,尼龙毛柱分离T、B细 胞,检测在IgM 抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定(CPM)值及血清lgG和IgA水平,判断 CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况,并进行统计学分析.结果 分选的CD4~+CD25~+Treg纯度为95.6%.T、B细胞CPM值:正常对照组分别为2436±358、2418±348,Treg 局部干预组为2273±136、2252±127,Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218,Treg未干预组分 别为3749±245、3720±224;Treg 未干预组与其三组比较差异均有统计学意义(P<0.01).血清IsG、IgA水平:Treg 局部和全身干预组分别为(12.56±1.30)g/L、(2.38±0.21)g/L和(13.48±1.23) g/L、(2.86±0.24)g/L,与正常对照组(12.35±1.28)g/L、(2.36±0.12)g/L比较差异无统计学意 义(P>0.05),三组与Treg未干预组(16.58±1.12)g/L、(3.75±0.37)g/L比较差异有统计学意义 (P<0.01).Treg 局部和全身干预组CTA存活时间分别为(97±13)和(63±lO)d,显著长于Treg未 干预组的(22±8)d(P<0.01).结论 供体抗原特异性CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能有明显的 抑制作用,能诱导CTA免疫耐受,延长其存活时间,且局部应用效果优于全身.     

人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定

目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.     

趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca~(2+)浓度变化的影响

为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2 + 浓度变化的影响 ,从PBMC中分离纯化CD8+ T细胞 ,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下 ,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后 ,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后 ,细胞内Ca2 + 浓度的变化。发现受SDF 1作用后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 浓度变化均不明显 ,而IP 10刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平在短时间内明显上调 ,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞 ,在MIP 1β刺激后 ,也观察到类似趋势 ;受Eotaxin刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平均有微小上升 ,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞。说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后 ,细胞内Ca2 + 浓度有不同程度的变化 ,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性。     

肾综合征出血热患者体内可溶型和膜型 TNF-α,FasL,TRAIL表达水平的研究

目的观察HFRS患者体内可溶型和膜型凋亡诱导配体的水平,探讨凋亡诱导配体与HFRS免疫病理损伤的关系.方法应用夹心ELISA方法检测了HFRS患者血浆中TNF-α、sFasL和sTRAIL的水平,同时利用流式细胞术检测了膜型凋亡诱导配体在HFRS患者PBMC上的表达.结果膜型凋亡诱导配体在健康对照的PBMC上几乎不表达,HFRS患者PBMC上TNF表达率为(0.90±0.05)%;FasL 的表达率为(19.83±6.40)%;TRAIL的表达率为 (15.79±4.73)%.HFRS患者急性期血浆中的TNF(77.69±21.11)pg/mL、 sFasL(40.69±6.75) pg/mL 和 sTRAIL(19.04±5.54) pg/mL水平分别是健康对照的4.8倍(16.26±14.09) pg/mL、6.0倍(6.76±1.01) pg/mL和1.8倍(10.72±1.41) pg/mL.结论 HFRS患者体内高表达的凋亡诱导配体可能与HTNV感染所致的免疫病理损伤有关.     

人CD112(Nectin2/PRR2)单克隆抗体的制备和鉴定

目的：表达和纯化CD112 胞膜外区重组蛋白, 制备针对CD112胞膜外区的单克隆抗体（mAb）, 并且研究CD112的分布.方法：采用基因重组技术在真核系统表达CD112-Fc融合蛋白, 亲和层析法进行蛋白纯化;纯化的CD112-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 杂交瘤技术建立分泌CD112 mAb的杂交瘤细胞株, 间接ELISA、 Western blot及FCM鉴定mAb 的特异性.用流式细胞术（FCM）检测 CD112 的细胞系分布.结果：构建了高效真核表达载体pIg3C-CD112, 表达并纯化了CD112-Fc融合蛋白, 其纯度大于 90%.以纯化重组蛋白为免疫原共制备9株分泌抗CD112 mAb的杂交瘤细胞株（命名为FMU-CD112.1 ～FMU-CD112.9）, 制备腹水并纯化 mAb.FMU-CD112.1、 3、 6和8能用于Western blot, FMU-CD112.1、 4、 6和8可用于 FCM.CD112细胞分布检测显示该分子主要分布在正常上皮及内皮细胞系、巨核细胞谱系和部分T细胞系, 并高表达于上皮及内皮来源的肿瘤、胶质瘤等细胞系.结论：成功地表达纯化了CD112-Fc融合蛋白并建立了稳定分泌CD112 mAb的杂交瘤细胞株, 为CD112的功能研究打下坚实的基础.