阻断IgG-FcγR结合短肽在抗中性粒细胞胞浆抗体促进中性粒细胞凋亡中的作用

目的 利用阻断IgG-FcγR结合的短肽，观察FcγR在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)促进中性粒细胞凋亡过程中的作用。 方法 人工合成短肽tg19320并鉴定其与人IgG的结合，玫瑰花环形成试验鉴定其阻断IgG-FcγR间的作用。提纯ANCA IgG并鉴定，体外分离健康人中性粒细胞。tg19320预处理经TNF-α预激的粒细胞1.5 h后，ANCA(200 ?滋g/ml)刺激粒细胞，分别在3、6、9、12和18 h收获细胞。流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位及凋亡细胞之Sub-G1峰变化，结合DNA缺口末端标记技术观察tg19320对ANCA促进中性粒细胞凋亡的抑制作用。 结果 (1)tg19320剂量依赖性与人IgG结合(P < 0.01)，并显著阻断IgG与FcγR的相互作用(玫瑰花环形成率20.3%比53.2%，P < 0.01)。(2) 正常粒细胞凋亡率随孵育时间增加，TNF-α在6 h前促进粒细胞凋亡而之后抑制粒细胞的凋亡；ANCA进行性促进经TNF-α预处理的粒细胞凋亡(P < 0.01)。tg19320处理组粒细胞凋亡率在各时间点均低于ANCA作用组(P < 0.01)，而与正常对照组比较无显著差异。结论 分支短肽tg19320可干预ANCA对中性粒细胞凋亡的促进，FcγR在ANCA促进中性粒细胞凋亡过程中具有关键作用。     

鼠源性髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体的制备及鉴定

采用鼠源性髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）与弗氏佐剂混合注射的方式制备小鼠MPO特异性抗中性粒细胞胞质抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibody, ANCA）,并予以定性及定量检测。使用B6.129X1-Mpo^tm1Lus/J小鼠（即MPO敲除小鼠）,将mMPO与完全/不完全弗氏佐剂混合,通过腹腔注射方式诱导小鼠产生适应性免疫应答。采用定性ELISA以及间接免疫荧光法检测小鼠血清ANCA水平;采用肌酐检测试剂盒（肌氨酸氧化酶法）检测小鼠血清肌酐水平以评估其肾功能。ELISA检测结果显示,实验组小鼠血清MPO-ANCA的光密度D（450 nm）值较对照组显著升高（P<0.001）,约为对照组的5.6倍;间接免疫荧光法结果提示,实验组中性粒细胞胞质有较强的荧光信号,与MPO-ANCA的核周型特点相一致;H-E染色示部分肾小球囊壁层上皮细胞过度增殖;实验组与对照组小鼠血清肌酐水平检测结果差异不显著（P>0.05）。由此,注射MPO与弗氏佐剂混合液诱导MPO^-/-小鼠产生了抗MP...     

原发系统性抗中性粒细胞胞质抗体阴性小血管炎的临床病理表现

目的总结分析原发系统性小血管炎(PSV)抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)阴性小血管炎患者的临床病理特点,并与ANCA阳性患者进行比较,以提高对该类疾病的认识。方法回顾性总结并分析我科近7年来确诊的13例原发系统性ANCA阴性小血管炎的临床病理资料,并与同期30例ANCA阳性原发性小血管炎患者进行比较。结果ANCA阴性小血管炎组患者13例,占同期诊断的原发性小血管炎患者的7.14%。与ANCA阳性组相比,阴性组皮肤和消化道受损比率显著增高,而发热及中重度贫血发生率低于阳性组,阴性组蛋白尿水平高于阳性组,两组血管炎活动积分无差异。阴性组无一例血免疫球蛋白G升高,与阳性组相比差异有统计学意义(0vs50%,P<0.01)。阴性组肾脏新月体形成发生率低于阳性组,坏死和间质小管病变两组差异无统计学意义。两组免疫抑制治疗方案和临床缓解率差异无统计学意义。结论原发性ANCA阴性小血管炎并不罕见,毛细血管襻纤维素样坏死和无免疫球蛋白G升高有助于诊断。     

利用阻断IgG-FcγR结合短肽抑制ANCA诱导中性粒细胞活化研究

目的观察阻断IgG-FcγR相互作用的分支短肽tg19320对抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA）所诱导中性粒细胞呼吸爆发的抑制作用，为探讨原发性小血管炎的新型治疗方向提供依据。方法人工合成短肽tg19320并鉴定其与人IgG的结合；玫瑰花环形成试验观察tg19320对IgG与FcγR相互作用的阻断效应。提纯活动期原发性小血管炎患者的ANCA IgG，间接免疫荧光联合抗原特异性ELISA鉴定ANCA。Ficoll-Paque密度梯度分离健康人中性粒细胞。以肿瘤坏死因子（TNF）-α（2ng／ml）预激粒细胞后以ANCA IgG（200μg／ml）刺激诱发其呼吸爆发，tg19320组以2．5mg/ml tg19320预处理粒细胞45min，中性粒细胞呼吸爆发以Ferri-cytochromere／uctionassay法检测。结果①tg19320与人IgG呈剂量依赖性的结合（P〈0．01）。②tg19320显著阻断IgG与FγR的相互作用（玫瑰花环形成率20．3％vs53．2％，P〈0．01），与人IgG组差异无统计学意义（20．3％vs 19．7％．P〉0．05）。③tg19320显著抑制ANCA所致中性粒细胞的呼吸爆发（1．83nomels／10^6 cells vss 12．99nmoles／10^6 cells，P〈0．01）。结论分支短肽tg19320体外可阻断ANCA所诱导的中性粒细胞活化。     

皮肤基底膜α5（Ⅳ）链检测对Alport综合征诊断的意义

目的 探讨皮肤基底膜α5（Ⅳ）链检测对疑似Alport综合征患者诊断的意义。 方法 回顾性分析2007年1月到2008年3月在我科行皮肤基底膜α5（Ⅳ）链检测的疑似Alport综合征患者的临床资料。 结果 共检测临床疑似患者254例（男性/女性,0.76）,平均年龄为（25.85±17.03）岁（1~71岁）,性别间的年龄差异无统计学意义。19例患者的皮肤基底膜α5（Ⅳ）链间接免疫荧光染色异常,阴性患者12例,阳性不连续患者7例,诊断为Alport综合征,诊断率为7.5%（19/254）。 结论 皮肤基底膜α5（Ⅳ）链检测能显著提高Alport综合征的诊断率,且可以为早期诊断和鉴别不同遗传类型提供帮助。     

Clara细胞分泌蛋白检测对急性肾小管坏死诊断的意义

目的：探讨Clara细胞分泌蛋白（CCSP）检测在诊断急性肾小管坏死（ATN）中的意义，以提高ATN的早期诊断率。方法：选取4例ATN患者肾活检组织，以原发性慢性肾小球肾炎[膜性肾病（MN）／微小病变（MCD）n=4]患者的肾脏及4例正常肾组织作为对照，应用免疫组化和免疫荧光方法检测肾脏组织的CCSP表达。选择10例ATN、10例原发性慢性肾小球炎（MN／MCD）和15例正常对照，采用ELISA法测定其血、尿CC16浓度。结果：免疫组化和免疫荧光结果显示,ATN组、MN／MCD组及正常对照组，肾小球中均无CCSP表达，肾小管上皮细胞有CCSP表达。而其中ATN患者则因肾小管受损，其肾小管上皮细胞CCSP表达较另2组下降。ATN患者起病期与肾功能恢复期间尿CC16差异有统计学意义[（1624．45±1119．11）ng／mL比（472．60±289．36）ng／mL，P〈0．01]。尿CC16浓度在ATN起病期显著增高，与正常对照组、MN／MCD组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：检测肾组织中CCSP有助于判断患者的肾小管功能．特别是近端肾小管受损情况：尿CC16浓度测定可作为急性肾小管损伤的指标，且与受检者肾组织中CCSP表达相吻合。     

血β痕迹蛋白与其他评价肾小球滤过功能指标的比较

近年来有研究发现,β痕迹蛋白(BTP)在肾功能下降时明显升高、在血肌酐(Scr)正常时(所谓肌酐盲区)也已升高,BTP可能是提示GFR下降的一个早期检测指标[1,2].     

抗中性粒细胞胞质抗体对中性粒细胞表面FcγⅡ/Ⅲ受体表达的影响及其意义

目的 探讨抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)对中性粒细胞表面FcγⅡ/Ⅲ(CD32/CD16)受体表达的影响及临床意义.方法 提纯活动期ANCA相关性小血管炎(AASV)患者的ANCA IgG,分离健康人新鲜中性粒细胞,以ANCA刺激粒细胞1 h后,流式细胞仪检测CD32/CD16的表达.流式细胞仪检测18例系统性小血管炎患者CD32/CD16的表达,以35名健康人为对照.同时对18例患者临床表现及血管炎活动情况进行评分,与CD32/CDl6表达进行相关分析.结果 ANCA IgG与正常人IgG相比显著上调中性粒细胞表面CD16的表达(Mnx 67±23 vs 54±21,P<0.01),但对CD32的表达无影响(Mnx 21±8vs 16±8,P>0.05).系统性小血管炎患者CD16表达的平均荧光强度显著高于正常人(Mnx 62±12 vs 53±10.P<0.01),而CD32的表达与正常人差异无统计学意义.CD16表达与伯明翰小血管炎呈显著正相关(P<0.01).结论 ANCA相关性小血管炎患者高表达Fcγ受体,ANCA可以干预CD32/CD16受体的表达,调控FCγ受体表达可能是系统性小血管炎的发病机制之一,监测CD16的表达水平对于判断疾病活动具参考价值.     

血清β痕迹蛋白对肾小球滤过功能的评估

目的:研究血清β痕迹蛋白(β trace protein, BTP)在肾小球滤过功能评估中的价值. 方法:收集2004年2月至2005年4月间我科住院的慢性肾脏病患者108例,男:57例,女:51例,平均年龄(50.39±15.37)岁,以改进的免疫比浊法,测定BTP浓度.同时检测血肌酐(SCr)、血清胱抑素C(cystatin,CysC)、同位素99mTc-GFR(GFR),并用CG公式计算肌酐清除率(Ccr)、MDRD公式计算肾小球滤过率(eGFR).以GFR为金指标,对上述检测方法行相关分析及受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,计算ROC曲线下面积(AUC),比较各种检测方法的准确性,用四格表的卡方检验进行关联性的研究. 结果:108例患者,血清BTP、Cys C、Ccr、eGFR和SCr的检测结果与GFR比较具有很好的相关性,相关系数分别为:-0.70、-0.82、0.79、0.81和-0.67,P均＜0.01.BTP、Cys C、eGFR、Ccr、SCr的AUC分别为0.913、0.889、0.878、0.864、0.846.在GFR＜90 ml/min时,BTP、Cys C、Ccr、eGFR、SCr的诊断符合率分别是:86.11%、86.11%、92.59%、89.81%,72.22%.在GFR＜60 ml/min时,其他指标的诊断符合率分别是BTP:81.5%、Cys C:79.6%、Ccr:76.8%、eGFR:77.7%,SCr:81.5%. 结论:Ccr、eGFR与同位素99mTc-GFR等具有良好的相关性;BTP敏感性优于SCr;BTP检测方法简便快速,可作为评价肾功能不全的一项新指标,但仍需进一步研究.     

肾脏疾病生物样本库信息化管理和应用

信息化管理应用于样本库能够为转化医学和遗传学研究提供扎实的基础,文章探索了信息化管理对提升肾脏疾病生物样本库规模与质量的作用。另外,介绍了样本库的标准化流程:经上海交通大学医学院附属瑞金医院伦理委员会批准,所有患者签署知情同意书。规范采集患者的外周全血及尿液,外周全血进行相应处理后获得血清、血浆和基因组DNA,对标本进行质量控制并从医院信息系统获得该患者详细临床资料后,将标本以及相应信息按照规范化流程入库,建立存录管理流程体系。本研究比较了2012年采用信息化科学管理后与之前的数据,提示信息化管理可以有效促进肾脏疾病样本库规模增长和标本质量提高,加快了生物样本库的建设和应用。