脂多糖对大鼠腹膜间皮细胞白细胞介素15、6及丙二醛表达的影响

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal me-sothelial cells,RPMC)白细胞介素15(interleukin-15,IL-15)、IL-6及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响。方法胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代用于试验。分组:①正常对照组;②LPS组:不同浓度LPS组(1、10、100mg/L)分别作用6h和12h;③不同时间组:10mg/L LPS分别作用于RPMC3、6、12、24h。实时定量PCR法测IL-15mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15和IL-6的表达;硫代巴比妥法测MDA。结果 LPS可刺激RPMC的IL-15mRNA及蛋白的表达增高且在12h内呈时间剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMC IL-6的蛋白表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMC MDA的含量表达增高且呈浓度依赖(P<0.05)。结论 IL-15作为炎症因子参与了腹膜透析相关性腹膜炎的病理过程。LPS可上调RPMC IL-15、IL-6和MDA的表达,导致腹膜炎症及氧化应激。     

脂多糖作用下腹膜间皮细胞骨桥蛋白表达及乌司他丁的影响

目的：观察脂多糖对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）中骨桥蛋白（OPN）表达的影响;观察乌司他丁（ulinastatin）作用下RPMC的OPN细胞分布及mRNA表达的影响。方法：胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组。正常对照组：不同浓度LPS（50,100μg/ml）组;50μg/mlLPS作用不同时间（8,12,24,34,48h）组;乌司他丁组：（160,320,640U/ml）与LPS50mg/L作用24h,RealTime-RT-PCR技术检测骨桥蛋白（OPN）、TGF-β1mRNA的表达。结果：LPS可刺激RPMC的骨桥蛋白表达显著增加,呈剂量、时间依赖性（P〈0.05）;乌司他丁可降低LPS引起的RPMC中的骨桥蛋白表达,呈剂量依赖性（P〈0.05）。结论：脂多糖通过上调骨桥蛋白的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,乌司他丁可以一定程度抑制骨桥蛋白引起的腹膜纤维化过程。     

高糖和脂多糖对腹膜间皮细胞中骨桥蛋白的表达及其所致纤维化的影响

目的观察高糖、脂多糖(LPS)单独及联合作用对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)中骨桥蛋白(OPN)的表达及其所致纤维化的影响。方法将培养的RPMC分为正常对照组,不同浓度葡萄糖组(1.5%,2.5%,4.25%,24 h),高糖(2.5%)作用不同时间组(8,12,24,34,48 h),不同浓度LPS组(50,100μg/mL),LPS(50μg/mL)作用不同时间组(8,12,24,34,48 h)及联合作用组(2.5%葡萄糖+LPS 50μg/mL,24 h)。采用细胞免疫组织化学法检测OPN在RPMC内的表达情况,Real-time RT-PCR技术检测OPN和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达。结果高糖、LPS单独及联合作用均可刺激RPMC的OPN表达增加,呈剂量及时间依赖性,2者联合作用时OPN表达量较高糖、LPS单独作用时增高,差异有统计学意义(P<0.05)。高糖、LPS单独及联合作用均可导致TGF-β1表达增加,作用8 h时表达水平升高,12 h降低,24 h达到高峰,48 h仍存在,与0 h组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论高糖及LPS通过上调OPN的表达引起腹膜损伤,导致腹膜纤维化,2者联合作用时通过影响OPN的表达加速了腹膜透析合并腹膜炎过程中腹膜纤维化的病理进程。     

高糖和脂多糖对腹膜间皮细胞β连环蛋白表达及纤维化的影响

腹膜间皮细胞(PMC)在腹膜纤维化中起着关键作用,在炎性反应及非生理性高糖透析液的环境下,其形态、结构及功能都发生了变化.在糖尿病肾病发病过程中,肾小管上皮细胞内的β连环蛋白( β-catenin)含量及表达上调,使下游转分化及致炎、致纤维化因子高表达[1].一、材料与方法1.实验动物:SD大鼠,体质量160～200 g,普通级,由中国医科大学实验动物中心提供.2.药品和试剂:DMEM-F12干粉培养基(美国Hyclone),胎牛血清(天津灏阳),Trizol试剂(美国Invitrogen),实时RT-PCR试剂盒(大连TaKaRa),PCR引物由北京华大基因公司合成,兔抗3-catenin多克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色液(武汉博士德),Wnt通路中的关键酶GSK-3β.     

高糖对腹膜间皮细胞β-连环蛋白及骨桥蛋白表达的作用

目的 观察高糖对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cell RPMC)中β-连环蛋白(β-Catenin)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)2者mRNA及蛋白表达的影响.方法 胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组.分为:正常对照组;不同浓度葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%) 组作用24h;2.5% 高糖作用不同时间(8,12,24,34,48 h)组,细胞免疫组织化学法检测β-Catenin蛋白在细胞上的表达情况,RealTime-RT-PCR 技术检测β-Catenin、OPN、TGF-β1mRNA的表达.ELISA法检测OPN蛋白表达.结果高糖刺激下RPMC 的β-catenin表达增加,与0 h 组比较,在8h即出现(但不具有统计学意义),12h具有统计学意义,24h达到高峰,48h 仍存在,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);高糖可刺激RPMC OPN 的表达显著增加,呈剂量、时间依赖性(P＜0.05);TGF-β表达增加,在8h表达于较高水平,12h降低,24h达到高峰,48h仍存在,与0 h组比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.01);高糖刺激下,β-Catenin、TGF-β1 表达显著增加,呈剂量依赖性,组间差异具有统计学意义( P＜0.05).结论 高糖通过上调β-Catenin、OPN的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,β-Catenin、OPN参与了腹膜间皮细胞透析相关性腹膜纤维化的病理过程.     

普罗布考对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞细胞因子表达的影响

腹膜透析(腹透)是治疗终末期肾病的有效方法之一,但长期腹透时,高糖腹透液可引起腹膜间皮细胞(PMCs)的严重损伤,其产生的促炎、促纤维化因子在病理过程中发挥重要的作用,最终导致腹膜超滤衰竭[1].腹透患者存在氧化应激状态,通过多种途径产生活性氧(ROS),对PMCs造成损害.本研究通过观察普罗布考对高糖作用下大鼠PMCsIL-18、IL-6、结缔组织生长因子(CTGF)及丙二醛(MDA)表达的影响,探讨普罗布考能否抑制上述指标的表达,改善PMCs损伤,延缓腹膜纤维化.