心脏转录因子Nkx2．5真核表达质粒的构建

目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2．5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2．5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx25为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2．5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx25的PCR产物分别在双酶切后用,T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2．5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2．5基因编码区约1000bp的目的片段。PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2．5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2．5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。     

转录因子Nkx2.5基因突变与先天性心脏病相关性的初步研究

目的 初步探讨转录因子Nkx2.5的基因突变与中国先天性心脏病发生之间的关系.方法 采用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对99例中国散发先天性心脏病患者及90名正常人的Nkx2.5基因的外显子1进行序列检测,分析Nkx2.5基因突变是否与先天性心脏病的发生有关.结果 在Nkx2.5基因外显子1中,3例室间隔缺损、7例房间隔缺损、1例肺动脉瓣狭窄、1例动脉导管未闭患者和3名正常人第239位发生了A-G的突变等位基因频率在先天性心脏病患者与正常人之间差异有统计学意义(P:0.031).结论 Nkx2.5基因外显子1基因突变与中国先天性心脏病的发生之间存在一定的相关性.     

心脏转录因子GATA结合蛋白4真核表达质粒的构建*☆

背景：有研究表明心脏转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与先天性心脏病的发生有密切的关系,但其机制不明,而目前尚未查及GATA4真核表达质粒构建类的报道。 目的：构建人类心脏特殊转录因子GATA4的真核表达质粒。 方法：对重组质粒pUC57-GATA4进行酶切获得GATA4基因编码区序列,将真核表达载体pCMV-Myc和GATA4基因在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-Myc-GATA4,转化至大肠杆菌,提取质粒后经聚合酶链反应、双酶切及测序鉴定。 结果与结论：实验成功酶切重组质粒获得GATA4基因编码区约1.3 kb的目的片段,聚合酶链反应和酶切鉴定以及基因测序结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的GATA4基因序列,证实成功构建了含有GATA4基因的真核表达重组质粒。     

心脏转录因子GATA结合蛋白4真核表达质粒的构建

背景:有研究表明心脏转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与先天性心脏病的发生有密切的关系,但其机制不明,而目前尚未查及GATA4真核表达质粒构建类的报道.目的:构建人类心脏特殊转录因子GATA4的真核表达质粒.方法:对重组质粒pUC57-GATA4进行酶切获得GATA4基因编码区序列,将真核表达载体pCMV-Myc和GATA4基因在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-Myc-GATA4,转化至大肠杆菌,提取质粒后经聚合酶链反应、双酶切及测序鉴定.结果与结论:实验成功酶切重组质粒获得GATA4基因编码区约1.3 kb的目的片段,聚合酶链反应和酶切鉴定以及基因测序结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的GATA4基因序列,证实成功构建了含有GATA4基因的真核表达重组质粒.     

心脏转录因子Nkx2.5真核表达质粒的构建

目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2.5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2.5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx2.5为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2.5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx2.5的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2.5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2.5基因编码区约1 000 bp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2.5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2.5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。     

转录因子Nkx2.5和GATA4的相互作用

背景:心脏发育过程是复杂多种因子相互作用的结果,对转录因子Nkx2.5和GATA4在心脏发育过程中相互作用的研究将有助进一步了解心脏发育过程。目的:分析心脏转录因子Nkx2.5和GATA4在细胞内的相互作用。方法:在构建Nkx2.5和GATA4真核表达质粒以及脑钠肽启动子荧光表达质粒的基础上,将真核表达质粒经共转染或单转染COS7细胞,利用免疫共沉淀技术验证Nkx2.5和GATA4在细胞内是否有相互作用,并通过荧光素酶分析技术分析Nkx2.5和GATA4对脑钠肽启动子序列可能存在的协同激活作用。结果与结论:通过免疫共沉淀实验发现GATA4能将Nkx2.5沉淀下来,相应的Nkx2.5也能将GATA4沉淀下来,说明在COS7细胞中,GATA4能和Nkx2.5相互作用。脑钠肽启动子荧光表达质粒并与Nkx2.5和GATA4共转染COS7细胞,比起单转染Nkx2.5或GATA4质粒,两者共转染更能激活脑钠肽启动子的表达。Nkx2.5和GATA4不仅各自在心脏发育过程中发挥重要作用,两者之间的相互协调作用对于心脏的正常发育过程同样非常重要。     

转录因子Nkx2.5和GATA4的相互作用*☆

背景：心脏发育过程是复杂多种因子相互作用的结果,对转录因子Nkx2.5和GATA4在心脏发育过程中相互作用的研究将有助进一步了解心脏发育过程。 目的：分析心脏转录因子Nkx2.5和GATA4在细胞内的相互作用。 方法：在构建Nkx2.5和GATA4真核表达质粒以及脑钠肽启动子荧光表达质粒的基础上,将真核表达质粒经共转染或单转染COS7细胞,利用免疫共沉淀技术验证Nkx2.5和GATA4在细胞内是否有相互作用,并通过荧光素酶分析技术分析Nkx2.5和GATA4对脑钠肽启动子序列可能存在的协同激活作用。 结果与结论：通过免疫共沉淀实验发现GATA4能将Nkx2.5沉淀下来,相应的Nkx2.5也能将GATA4沉淀下来,说明在COS7细胞中,GATA4能和Nkx2.5相互作用。脑钠肽启动子荧光表达质粒并与Nkx2.5和GATA4共转染COS7细胞,比起单转染Nkx2.5或GATA4质粒,两者共转染更能激活脑钠肽启动子的表达。Nkx2.5和GATA4不仅各自在心脏发育过程中发挥重要作用,两者之间的相互协调作用对于心脏的正常发育过程同样非常重要。