心脏转录因子Nkx2．5真核表达质粒的构建

目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2．5的真核表达质粒，为进一步探讨Nkx2．5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx25为模板，并设计上下游引物扩增Nkx2．5编码区序列，将真核表达载体pCMV-HA和Nkx25的PCR产物分别在双酶切后用，T4连接酶连接，构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2．5，转化至大肠杆菌，提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2．5基因编码区约1000bp的目的片段。PCR和酶切鉴定结果显示，构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2．5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2．5的真核表达重组质粒，为后续研究奠定基础。