经椎间孔椎体间融合与后路椎体间融合治疗腰椎退行性疾病的疗效比较

<正>本文回顾性分析了我院2010年7月至2011年5月行后路椎体间融合术(PLIF)或经椎间孔椎体间融合术(TLIF)治疗腰椎退变性疾病(DLD)112例,并对2种术式的疗效进行比较研究,现报告如下。1资料与方法1.1一般资料     

hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位

目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位.方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至cDNA.进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的cDNA全长片段,并将其亚克隆于pEGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达.进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内pEGFP-hSesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源hSesn3蛋白.结果:hSesn3基因cDNA全长片段克隆于真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序.Western blot检测到了GFP-hSesn3融合蛋白表达,分子量约为79 kDa.在MG-63细胞中pEGFP-hSesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了hSesn3蛋白.结论:成功构建了hSesn3基因cDNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中pEGFP-hSesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了hSesn3蛋白.     

骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位

目的:构建新型人源真核表达载体3* Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位.方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因eDNA全长,并将其克隆到含有3* Flag标签的真核表达载体中.进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测.同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*Flag-hPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白.结果:hPlk3基因cDNA全长成功构建于含有3* Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74kDa.3 * Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白.结论:成功的构建了含有3* Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白.3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周.     

急症胆道术后发生十二指肠瘘7例原因及防治

十二指肠瘘是腹部手术的一种严重并发症。胆道术后发生十二指肠瘘可引起局部或全身的严重病理生理改变,能否正确把握手术适应证,加强预防措施,掌握恰当处理方法,是防治十二指肠瘘的关键。本文就我院1997年至2008年急症胆道术后发生十二指肠瘘7例的治疗经过进行讨论,以探讨十二指肠瘘的发生原因及防治方法。     

氟康唑在健康人体的药代动力学及生物等效性

目的评价单剂量口服3种氟康唑制剂(抗真菌药)在健康受试者体内的生物等效性。方法采用三交叉全排列组合设计,18名健康男性受试者随机分为3组,自身交叉口服单剂量试验制剂氟康唑片、氟康唑胶囊和参比氟康唑胶囊600mg,采用液制联用法测定人血浆中氟康唑浓度。结果由DASS2.0软件计算的主要药代动力学参数:Cmax分别为(9.3±1.5)、(9.5±1.4)、(8.9±1.6)μg·mL-1;tmax分别为(1.9±0.7)、(1.9±0.6)、(2.0±0.7)h;t1/2分别为(32.4±6.1)、(34.5±5.8)、(32.6±6.4)h;AUC0-t分别为(358.7±75.0)、(359.5±76.1)、(346.0±78.4)μg.h·mL-1;AUC0-∞分别为(415.3±81.6)、(419.5±82.4)、(401.6±80.6)μg·h·mL-1。结论2种氟康唑受试制剂与参比制剂具有相同的生物效应。     

3*Flag-hPlk4真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达和定位

目的:构建3*Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法:以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因cDNA全长,并将其克隆至含有3*Flag标签的真核表达载体中.进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达.同时利用共聚焦激光显微镜观察3*Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白.结果:hPlk4基因cDNA全长成功构建到3*Flag真核表达载体中,Western blot检测到含有3*Flag的人源Plk4融合蛋白表达,进一步在U2OS骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和细胞核周,并成功纯化hPlk4蛋白.结论:成功构建了3*Flag-hPlk4真核表达质粒,同时鉴定了融合蛋白的表达,并成功纯化人源Plk4蛋白.3*Flag-hPlk4蛋白主要定位在细胞质和细胞核周.     

罗红霉素片和胶囊在健康人体的药代动力学及人体生物等效性研究

白血病是一类起源于造血（或淋巴）干细胞的恶性疾病，特点是白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段，在骨髓和其他造血组织中广泛而无控制地增生，并浸润、破坏全身各组织器官，而正常造血功能受抑制，常有贫血、发热、出血和肝、脾、淋巴结不同程度肿大的表现。     

牛磺酸对百草枯中毒大鼠肾损伤的作用及机制研究

目的:探讨不同剂量牛磺酸对百草枯中毒大鼠肾脏氧化应激和炎症反应的影响。方法:选取48只雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、百草枯染毒组、百草枯染毒+小剂量牛磺酸组和百草枯染毒+大剂量牛磺酸组。采用生化检测仪检测大鼠血清肌酐及尿素氮水平;比色法检测血标本中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平评估氧化应激状态;另以ELISA法检测血标本中IL-6及细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平评估炎症反应;DHE荧光探针检测肾脏活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot法检测大鼠肾脏标本丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)中p-P38 MAPK、p-JNK和pERK1/2的蛋白水平;并以real-time PCR法检测大鼠肾脏内TNF-α、TGF-β1及IL-6的mRNA水平。结果:百草枯中毒大鼠血清肌酐及尿素氮增高,牛磺酸干预后降低了中毒大鼠的肌酐及尿素氮水平,且大剂量牛磺酸组的肌酐及尿素氮水平更低。牛磺酸的干预不仅明显减轻了肾脏组织的氧化应激与炎症反应,同时也降低了百草枯中毒大鼠肾脏的MAPK活性。结论:牛磺酸干预能减轻百草枯中毒大鼠的肾损伤,其作用机制可能与下调了肾脏MAPK活性、减轻了肾脏氧化应激及炎症反应有关。