家蝇蛆粉的临床前致畸性研究

目的探讨家蝇蛆粉对大鼠的致畸性,以评价其安全性。方法家蝇蛆粉按比例定量添加到普通饲料原料中混匀,干燥,做成高、中、低剂量家蝇蛆粉饲料。将性成熟的98只SD大鼠按雌雄2：1的比例同笼交配。取64只孕鼠平均分为四组：家蝇蛆粉饲料低剂量组;家蝇蛆粉饲料中剂量组;家蝇蛆粉饲料高剂量组;普通饲料对照组。于受孕后称量体重增长情况。最后脱颈椎处死孕鼠,称子宫重量,并进行胎鼠检查。结果家蝇蛆粉饲料高、中、低剂量组与对照组相比,雌鼠体重增长未见显著差异,子宫重量未见显著差异,无吸收胎、早死胎、晚死胎;各组间雄性与雌性胎鼠数均未见显著差异;各组间雄性与雌性胎鼠的外观、体重、体长均未见显著差异。各组间胎鼠骨骼和胎鼠内脏均未见显著差异。结论家蝇蛆粉对SD大鼠未见致畸性。     

病原体的组织特异性对靶向制剂研发的启示

靶向给药是指通过靶向载体将药物选择性地输送到靶部位,可减少药物全身分布从而减少用药的剂量和给药次数,提高药物的治疗指数和降低药物不良反应,为相关疾病的诊断和治疗开辟了广阔的前景。近年来,高效特异的靶向载体/导向分子研究已成为科研人员研究和探索的热点之一。很多病原体对宿主组织具有高度选择性,研究显示这种特异选择性涉及受体-配体间的相互作用,了解病原体组织特异性的分子机制,从中得到启发,为设计、研发高效、安全、特异的靶向制剂提供了新思路。     

家蝇抗菌肽Attacin在毕赤酵母中的异源表达

目的构建家蝇抗菌肽(攻击素,attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用SacⅠ酶切线性化后,采用电转化法将其转入毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株。甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin的表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物,采用琼脂糖孔穴扩散法检测其对大肠埃希菌K12D31的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-attacin构建成功,电转化获得多拷贝整合转化子毕赤酵母GS115/pPIC9 K-attacin,表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,在约Mr22000处有蛋白条带,表达产物可抑制E.coli K12D31的生长。结论家蝇抗菌肽attacin在巴斯德毕赤酵母中成功进行了表达。     

家蝇蛆粉的临床前致畸性研究

目的探讨家蝇蛆粉对大鼠的致畸性,以评价其安全性。方法家蝇蛆粉按比例定量添加到普通饲料原料中混匀,干燥,做成高、中、低剂量家蝇蛆粉饲料。将性成熟的98只SD大鼠按雌雄2∶1的比例同笼交配。取64只孕鼠平均分为4组:家蝇蛆粉饲料低剂量组;家蝇蛆粉饲料中剂量组;家蝇蛆粉饲料高剂量组;普通饲料对照组。于受孕后称量体质量增长情况。最后脱颈椎处死孕鼠,称子宫质量,并进行胎鼠检查。结果家蝇蛆粉饲料高、中、低剂量组与对照组相比,雌鼠体质量增长、子宫质量比较差异无统计学意义,无吸收胎、早死胎、晚死胎;各组间雄性与雌性胎鼠数比较差异均无统计学意义;各组间雄性与雌性胎鼠的外观、体质量、体长比较差异均无统计学意义。各组间胎鼠骨骼和胎鼠内脏比较差异均无统计学意义。结论家蝇蛆粉对SD大鼠未见致畸性。     

家蝇天蚕素对人肝癌BEL-7402细胞的作用靶点

将家蝇天蚕素(终浓度50μmol/L)加入对数生长期的人肝癌BEL-7402细胞中作用12h,扫描电镜观察天蚕素对人肝癌细胞细胞膜的影响。在此基础上,采用绿色荧光素异硫氰酸(FITC)标记天蚕素,运用激光共聚焦显微镜观察FITC标记的天蚕素与人肝癌细胞细胞膜的作用。肿瘤细胞经天蚕素作用12h后,扫描电镜显示细胞膜表面微绒毛大部分消失;激光共聚焦显微镜显示大部分天蚕素与细胞膜结合,细胞内也发现部分天蚕素进入。     

疟原虫环子孢子蛋白的研究进展

环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP)是疟原虫成熟子孢子表面的锚定蛋白,约含400个氨基酸,由N端保守I区、种属特异性的中央重复区和C端保守Ⅱ区构成。CSP在疟原虫的迁移、靶细胞入侵和增殖过程中发挥重要作用。近年研究显示,CSP在疟疾疫苗和靶向给药系统中具有良好的应用前景。本文对疟原虫CSP的结构特征、功能及其应用前景作一综述。     

抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用

目的 研究人抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜的相关作用,为MRSA的预防治疗以及新药物开发应用提供新策略.方法 运用微量肉汤稀释法测定LL-37对临床MRSA菌株的最小抑菌浓度;建立96孔板及6孔板生物膜体外模型;通过结晶紫定量法以及激光共聚焦荧光染色法检测LL-37对MRSA生物膜形成的影响.结果 微量肉汤稀释法测得LL-37对临床MRSA菌株的MIC为12.5 μmol/L.不同浓度LL-37作用后,结晶紫定量法结果表明1/20 MIC亚抑菌浓度的LL-37即可抑制生物膜形成(P＜0.01),且抑制率随用药浓度增加也随之提高,在1/4 MIC条件下生物膜形成抑制率可达到63％.与生理盐水对照组相比,激光共聚焦扫描显微镜下可见,用药组生物膜排列稀疏,厚度变薄,组成菌量明显减少.结论 低浓度的LL-37能够抑制MRSA生物膜的形成,并且对成熟生物膜结构也具有一定的破坏作用.     

检测家蝇抗菌肽基因diptericin时间表达模式的实时荧光定量方法的建立

目的建立荧光染料(SYBR Green I)实时荧光定量PCR(real-timePCR)方法检测的家蝇抗菌肽基因diptericin时间表达模式方法。方法基于已克隆出的diptericin基因,利用软件Prmier5.0设计上下游引物,对未诱导,诱导后2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h及不同发育阶段的家蝇三龄幼虫进行real-timePCR设计引物,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。结果未刺激的三龄幼虫diptericin基因表达量非常低,与诱导后2h的相比,差1个数量级,诱导后2h开始缓慢上升,12h后达到最高峰,24h后缓慢下降,36h后回到诱后2h的水平,在家蝇三龄幼虫的卵、1龄及2龄期的表达量非常低,3龄期达到最高峰。结论实时荧光定量PCR检测家蝇抗菌肽基因diptericin的方法具有特异性好、灵敏度高,为进一步探讨家蝇抗菌肽生物活性,研究新的抗菌药物打下初步基础。     

家蝇抗菌肽diptericin基因的组织表达研究

目的运用原位杂交方法检测家蝇抗菌肽基因dipericin组织表达模式。方法基于前期实时荧光定量PCR的结果 ,选取病原诱导12 h后的家蝇三龄幼虫,提取其RNA,克隆出dipericin保守序列,应用地高辛标记的diptericin基因反义RNA探针,对经多重耐药的大肠杆菌和耐甲氧西林葡萄球菌混合液刺激前后的家蝇幼虫组织切片进行组织原位杂交。结果 diptericin基因在诱导和未诱导家蝇幼虫的体壁和肌肉均未表达,在诱导后的脂肪体及中肠有高表达,在未诱导的家蝇幼虫部分组织内也有检测到阳性信号,如气管有很弱的表达,而马氏管则诱导与未诱导均有表达。结论家蝇抗菌肽基因diptericin在家蝇抵御外界微生物感染免疫防御中,有着极其重要的作用。     

一氧化氮在微生物感染中的双向作用

1992年，一氧化氮（Nitric Oxide，NO）被《Science》杂志评为年度明星分子，对NO的生物学作用研究已经成为一个非常热门的课题。早期的研究表明，NO在促进血液循环、预防动脉硬化、恢复血管弹性、降低血压、加强心脏功能，甚至在治疗糖尿病、脑卒中、老年痴呆、性功能障碍等方面都有明显作用。最近的研究发现其在微生物感染中也具有独特的作用。