流式细胞术在医学检验专业实习教学中的应用

流式细胞术是集多种技术为一体的高技术平台,是医学研究和临床医学检验领域不可替代的重要检测技术.本文通过在医学检验专业的实习教学中讲述流式细胞术的实验原理及检测技术、介绍临床开展项目、指导学生进行实验操作以及强调流式细胞术的质量控制,帮助学生掌握流式细胞术这门新理论、新技术,从而提高流式细胞检测技术在医学检验实习教学中的研究和实践.     

MPO-ANCA相关性血管炎患者中性粒细胞外捕网与滤泡辅助T细胞间关系的探讨

目的 探讨抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎(MPO-AAV)患者中性粒细胞外捕网(NET)与滤泡辅助T细胞(Tfh)间关系及意义.方法 选择初诊未治疗的MPO-AAV患者和健康对照者各35例,流式细胞术(FCM)检测所有受试者外周血Tfh占CD4+T细胞分数(Tfh％)、表达 ICOS 的 Tfh 占 CD4+T 细胞分数(ICOS+Tfh％)及Tfh表达ICOS的平均强度(MFI);酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血MPO-ANCA、NET及IL-23水平,收集每例受试者的临床资料,评估每例患者病情活动度(BVAS-V3).结果 与健康对照组比较,MPO-AAV组外周血 Tfh％、ICOS+Tfh％、Tfh 的 MFI、NET 及 IL-23水平均高于对照组[分别为(25.7±3.9)％vs(20.7±5.3)％,P＜0.001;(1.9±1.0)％vs(0.8±0.4)％,P＜0.001;(59.5±10.3)vs(48.7±6.4)(MFI),P＜0.001;(0.6±0.2)vs(0.2±0.1)(吸光度),P＜0.001;(0.753 5±0.201 9)vs(0.237 5±0.087 0)(pg/L),P＜0.001].双变量相关性分析提示MPO-ANCA水平分别与Tfh％及Tfh的MFI呈正相关(分别为r= 0.737,P＜0.001;r = 0.628,P＜0.001),但在多变量线性回归分析显示MPO-ANCA仅与Tfh％相关(P＜0.001).IL-23分别与Tfh％、Tfh的MFI及NET水平呈正相关(分别为:r = 0.475,P = 0.004;r=0.359,P = 0.034;r =0.806,P＜0.001).虽然双变量相关性分析提示Tfh％分别与外周血中NET及IL-23水平呈正相关(分别为:r= 0.714,P＜0.001;r=0.480,P =0.004),但多变量线性回归分析显示Tfh％仅与NET水平呈正相关(P＜0.001),即NET是影响Tfh％的独立因素.同时,结果显示NET与肾损害间存在相关性(r = 0.390,P= 0.021).结论 NET可能通过激活髓样树突状细胞提升Tfh％,以辅助B细胞产生特异性自身抗体 MPO-ANCA 参与 MPO-AAV 发病.     

免疫信号途径调节细菌和疟原虫对冈比亚按蚊的感染

从昆虫到哺乳动物，NF-κB样转录因子在诱导和调节天然免疫中发挥重要作用。已证实在果蝇体内有3种NF-κB样蛋白：Dorsal主要在感染早期阶段发挥作用，而Relish和Dif参与免疫信号传导至基因转录活化，包括抗菌肽（AMPs）。Toll途径通过Dif的核转位而被激活，参与抗真菌和革兰氏阳性菌感染，是抗菌肽Drosomycin的转录诱导基因。相反，免疫缺陷（Imd）途径主要是经Relish的核转位诱导AMPs的转录，     

关于“桂枝去桂加茯苓白术汤证”的探讨

历代医家对<伤寒论>中"桂枝去桂加茯苓白术汤证"之看法存在分歧,大多认为方证有误.我们对此问题应进一步探讨研究,以免贻误后学.笔者就此谈一些肤浅看法,供同道参考.     

非洲撒哈拉以南地区人类的黑猩猩腺病毒抗体

用来自美国、泰国以及非洲撒哈拉以南地区的人类血清和黑猩猩血清，检测出了针对三种黑猩猩腺病毒的中和抗体。这些抗体在非洲撒哈拉以南地区居民血清中比居住在美国和泰国的人更常见。结果表明黑猩猩腺病毒存在种间交叉传播。     

正交法优选长泰砂仁盐炙炮制工艺研究

目的:优选盐砂仁的炮制工艺.方法:以挥发油含量为指标,以食盐用量、闷润时间、炒制温度和炒制时间为考察因素,采用正交试验法,优选盐炙砂仁的炮制工艺.用紫外分光光度法测定挥发油含量.结果:优选出的盐炙砂仁最佳炮制工艺为:食盐用量为2％;闷润时间为2 h;炒制温度为140℃;炒制时间为15 min.结论:优选出的盐砂仁炮制工艺合理可行,为盐砂仁的炮制及其质量控制提供了依据.     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.     

新型布尼亚病毒感染患者凝血功能异常及其临床意义

目的探讨新型布尼亚病毒感染后患者发热伴血小板减少症状(SFTS)发病期和恢复期的凝血和血栓相关指标及其临床意义。方法选择2020年4月12日至8月12日在安徽医科大学第一附属医院收治的新型布尼亚病毒感染后SFTS患者,其中SFTS发病期36例,SFTS恢复期18例,并招募36名健康人作为健康对照组,采集血浆标本。回顾性分析血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原含量(FIB)、血浆凝血酶时间(TT)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、纤维蛋白降解产物(FDP)、D-二聚体(D-D)、血栓调节蛋白(TM)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)、组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合物(t-PAIC)浓度。统计比较3组间上述指标的差异。结果与健康对照组比较,SFTS发病组PT[12.5(12.1,13.6)s比10.8(10.5,11.5)s,P<0.05]较长,但仍在正常参考值范围内(14.0~21.0 s);APTT[49.1(42.0,58.2)s比28.5(26.6,30.4)s,P<0.05]较长;FDP[6.07(2.67,8.64)μg/ml比1.00(0.80,1.87)μg/ml]和D-D[2.27(1.04,2.98)μg/ml比0.30(0.21,0.47)μg/ml]较高(P均<0.001);血浆TAT[16.05(8.05,26.58)ng/ml比3.55(2.60,4.85)ng/ml]和PIC浓度[4.44(2.52,5.54)μg/ml比0.84(0.60,1.35)μg/ml]较高(P均<0.001);TM[(19.41±8.29)TU/ml比(9.33±1.89)TU/ml]和t-PAIC浓度[(37.52±21.10)ng/ml比(7.06±3.37)ng/ml]较高(P均<0.001)。SFTS恢复组患者血浆中TAT浓度为9.10(3.95,18.40)ng/ml,仍高于正常参考范围(<4 ng/ml),PIC浓度低于SFTS发病组[1.91(1.45,2.93)μg/ml比4.44(2.52,5.54)μg/ml,P<0.05],TM和t-PAIC低于SFTS发病组(P均<0.05)。结论SFTS患者发病期机体凝血系统激活,血管内皮受到损伤;恢复期血管内皮损伤情况减轻,但机体依然存在一定程度的凝血系统障碍,提示当体内病毒清除后,仍需继续监测凝血指标。     

日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。