急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌/通透性增加蛋白表达的影响

Objective To study the effect of acute hypervolemic hemodilution on expression of plasma bac-tericidaL/permeability-increasing protein (BPI) in patients undergoing total hip replacement. Methods Twenty ASA Ⅰ-Ⅱ patients undergoing elective total hip replacement were randomly divided into two groups (n=10 for thesia. The blood loss,blood transfusion and the time of operation were recorded. Venous blood samples were taken before anesthesia (T0) ,at the begining of operation (T1) ,30 min after operation (T2) ,and at the end of operation (T3) for determination of plasma bactericidal/permeability-increasing protein. Results The blood loss and the blood transfusion in HES group were significantly lower than that of LR group[blood loss: (560±90)ml vs (810±110) ml and blood transfusion: (200±100) ml vs (600±200) ml,t=5.562 and 5.657,P<0.001]. The plasma BPI concentrations in HES group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(8.9±1.6)μg/L,(13.4±1.2)μg/L and (4.9±1.2)μg/L,P<0.05]. The plasma BPI concentrations in LR group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(7.3±1.2)μg/L,(9.9±0.8) μg/L and (5.0±1.1)μg/L,P<0.05],but were lower than those in HES group (t=2.530 and 7.674,P=0.021 and 0.001 ). Conclusion Acute hypervolemic hemodilution with 200/0.5 hydroxyethyl starch can reduce blood transfusion during total hip replacement operation and also can increase the BPI level which would beneficial for the immunological function.     

抗人CD80单链抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析

目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能。方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因。用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选。纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别。竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力。MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用。结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽。实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上。抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%。抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%。结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能。     

螺内酯诱导人急性白血病细胞Jurkat凋亡的作用研究

目的研究螺内酯对人急性白血病细胞Jurkat体外增殖的抑制及诱导凋亡的作用。方法将终浓度分别是10、50及100μmol/L的螺内酯加入Jurkat细胞的培养体系中,24 h内每隔4 h通过MTT法分析Jurkat细胞的增殖抑制率,Annexin V/PI流式细胞术法分析Jurkat细胞的早期凋亡率。结果螺内酯与Jurkat细胞共同培养12 h后,螺内酯能显著增加对细胞的增殖抑制作用,并且与药物浓度成正相关,各浓度组的抑制率随着培养时间的延长而升高,与药物干预时间成正相关;螺内酯处理Jurkat细胞24 h,各浓度组诱导细胞凋亡率分别为:10μmol/L组(11.2±0.35)%、50μmol/L组(29.8±1.27)%及100μmol/L(56.5±1.41)%,各个浓度组诱导细胞凋亡率与药物浓度成正相关。结论螺内酯对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示该药可能具有潜在抑瘤作用。     

急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌/通透性增加蛋白表达的影响

Objective To study the effect of acute hypervolemic hemodilution on expression of plasma bac-tericidaL/permeability-increasing protein (BPI) in patients undergoing total hip replacement. Methods Twenty ASA Ⅰ-Ⅱ patients undergoing elective total hip replacement were randomly divided into two groups (n=10 for thesia. The blood loss,blood transfusion and the time of operation were recorded. Venous blood samples were taken before anesthesia (T0) ,at the begining of operation (T1) ,30 min after operation (T2) ,and at the end of operation (T3) for determination of plasma bactericidal/permeability-increasing protein. Results The blood loss and the blood transfusion in HES group were significantly lower than that of LR group[blood loss: (560±90)ml vs (810±110) ml and blood transfusion: (200±100) ml vs (600±200) ml,t=5.562 and 5.657,P<0.001]. The plasma BPI concentrations in HES group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(8.9±1.6)μg/L,(13.4±1.2)μg/L and (4.9±1.2)μg/L,P<0.05]. The plasma BPI concentrations in LR group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(7.3±1.2)μg/L,(9.9±0.8) μg/L and (5.0±1.1)μg/L,P<0.05],but were lower than those in HES group (t=2.530 and 7.674,P=0.021 and 0.001 ). Conclusion Acute hypervolemic hemodilution with 200/0.5 hydroxyethyl starch can reduce blood transfusion during total hip replacement operation and also can increase the BPI level which would beneficial for the immunological function.     

小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒载体的构建及其沉默效应研究

目的:构建介导小鼠B7-1 基因RNAi 的慢病毒载体,研究其对L929 细胞表面B7-1 分子表达的沉默效应。方法:从小鼠B7-1 基因编码区选择3 段RNA 干扰靶序列,制备转录双发夹RNA 的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1 的RNAi 慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T 细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T 细胞GFP 表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1 的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒稳定感染的L929 细胞,流式细胞术分析细胞中GFP 及B7-1 分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T 细胞混合培养,分析B7-1 稳定沉默细胞刺激T 细胞增殖的能力。结果:成功了构建小鼠B7-1 基因RNA 干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达(3 ~ 5) 108 TU/ ml 的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929 细胞介导GFP 表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929 细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T 细胞增殖的能力显著下降(P<0.05)。结论:构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1 分子的RNAi 慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929 细胞表面B7-1 分子表达,抑制B7-1/ CD28 信号诱导的T 细胞增殖效应。     

胰腺肿瘤自发性破裂误诊宫外孕1例

患者女，２４岁，因突然下腹部疼痛１０小时，晕厥１次，于１９９８年１１月２４日入院。患者以往身体健康，月经周期规律。末次月经时间为１９９８年１１月４日，经量少，未婚，有性生活史。查体：Ｔ３５．４℃，Ｐ１００次／ｍｉｎ，Ｂｐ１０／８ｋＰａ。急性病容，重度...     

抗人CD86单链抗体的基因克隆、表达及结合活性分析

目的 构建并在CHO细胞中表达抗人CD86单链抗体(CD86-scFv),研究该抗体与抗原的结合特性及介导的生物学功能.方法 从分泌鼠源CD86抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL基因,构建含有前导肽L-VH-Linker-VL抗体编码基因的表达载体并转染CHO细胞.经筛选高分泌株并扩大培养后收集上清进行纯化.流式细胞术分析CD86-scFv对不同细胞膜型CD86分子的识别及与鼠源亲本抗体1D1的竞争抑制效应.MTT法分析CD86-scFv与Raji细胞表达的CD86结合后对细胞生长的影响.结果 获得了稳定表达抗人CD86-scFv的CHO细胞株及相应抗体.CD86-scFv与CD86基因转染细胞株L929-CD86、天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi细胞的阳性结合率分别为67.0％、72.3％和80.5％.CD86-scFv对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力,将CD86-scFv(终浓度20μg/mL)加入Raji细胞共同培养72 h时的细胞生长抑制率为28.3％.结论 成功构建了稳定分泌抗人CD86-scFv的CHO细胞株(命名为SA-IV).该抗体能够识别CD86分子并具有良好的生物学活性.     

再生多孔丝素膜创面局部运用激活不同部位T细胞的作用

背景:丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白,其具有良好的理化特性及生物相容性。而目前国内外有关再生多孔丝素膜植入体内后对T淋巴细胞的激活作用研究未见报道。目的:观察再生多孔丝素膜植入大鼠局部创面后对外周血单个核细胞、脾脏及胸腺中T淋巴细胞的激活作用。方法:切除SD大鼠背部皮肤建立2cm×2cm创面,随机分为2组:实验组覆盖经预处理的再生多孔丝素膜,将已切除皮肤的表皮盖在丝素膜上进行缝合,对照组仅覆盖自身表皮层。于术后第3,14,28,56,90天观察创面愈合及丝素膜的残留情况,采用双色免疫荧光及流式细胞术分析大鼠外周血、脾脏及胸腺中CD3+CD25+/CD3+T细胞百分率。结果与结论:植入早期,两组均可见局部、轻微的炎症细胞浸润,主要为淋巴细胞;至28d后,炎症细胞逐渐减少,并且在整个动态观察过程中,两组结果一致。实验组外周血中活化T细胞在14d之前呈一过性升高,随后开始下降,至28d以后,活化T细胞水平趋于稳定,与对照组无明显差异(P>0.05);脾脏与胸腺T细胞均有少量活化,随后即开始下降并趋于稳定,胸腺中CD3+CD25+/CD3+T细胞的阳性率较脾脏微高,与对照组均无明显差异(P>0.05)。说明再生多孔丝素膜对T淋巴细胞的激发作用较小,引发机体细胞免疫应答的能力较弱。     

再生多孔丝素膜创面局部运用激活不同部位T细胞的作用

背景：丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白,其具有良好的理化特性及生物相容性。而目前国内外有关再生多孔丝素膜植入体内后对T淋巴细胞的激活作用研究未见报道。目的：观察再生多孔丝素膜植入大鼠局部创面后对外周血单个核细胞、脾脏及胸腺中T淋巴细胞的激活作用。方法：切除SD大鼠背部皮肤建立2cm×2cm创面,随机分为2组：实验组覆盖经预处理的再生多孔丝素膜,将已切除皮肤的表皮盖在丝素膜上进行缝合,对照组仅覆盖自身表皮层。于术后第3,14,28,56,90天观察创面愈合及丝素膜的残留情况,采用双色免疫荧光及流式细胞术分析大鼠外周血、脾脏及胸腺中CD3＋CD25＋/CD3＋T细胞百分率。结果与结论：植入早期,两组均可见局部、轻微的炎症细胞浸润,主要为淋巴细胞;至28d后,炎症细胞逐渐减少,并且在整个动态观察过程中,两组结果一致。实验组外周血中活化T细胞在14d之前呈一过性升高,随后开始下降,至28d以后,活化T细胞水平趋于稳定,与对照组无明显差异（P〉0.05）;脾脏与胸腺T细胞均有少量活化,随后即开始下降并趋于稳定,胸腺中CD3＋CD25＋/CD3＋T细胞的阳性率较脾脏微高,与对照组均无明显差异（P〉0.05）。说明再生多孔丝素膜对T淋巴细胞的激发作用较小,引发机体细胞免疫应答的能力较弱。