小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

DAPT对小鼠造血干细胞生物活性的影响

本研究探讨DAPT(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl-L:-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester)对小鼠骨髓造血干细胞(HSC)细胞周期、凋亡、分化及扩增的影响及其可能的相关机制。运用实时定量PCR检测DAPT1μmol/L作用前后细胞周期相关基因p18、p21、p27、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA表达水平及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、mcl-1、Bax、Bim、p53、Puma mRNA表达量的水平;用流式细胞术检测DAPT作用前后小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+及CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞周期及凋亡的变化;用单细胞培养检测DAPT作用前后单个HSC分化的变化;用长周期培养实验检测DAPT作用前后HSC扩增能力的变化。结果显示,Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞经DAPT处理5 d后,小鼠骨髓细胞中细胞周期相关基因CDK1、CDK2、CDK4、CDK6及p27的mRNA表达量较对照组明显升高(P<0.01-P<0.001),p18和p21表达量明显降低(P<0.01-P<0.001);凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、Bax、p53、Puma表达量较对照组明显升高(P<0.01-P<0.001),Bim表达量明显降低(P<0.001),Mcl-1的表达量无差异。加DAPT处理5 d后,小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞周期的变化无统计学意义(P>0.05),小鼠骨髓细胞CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的G0期的细胞减少,G1期的细胞明显增多(P<0.05),处于S、G2、M期的细胞数量的变化无统计学意义(P>0.05);小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞和CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞凋亡增多(P<0.05)。单细胞培养10 d实验显示,每板形成的克隆数、每孔平均细胞数的变化及DAPT对单个造血干细胞分化影响的差异均无统计学意义(P>0.05)。DAPT处理3 d后,小鼠骨髓细胞中HSC的扩增能力下降。结论:DAPT可加速小鼠骨髓细胞CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的耗竭,促进小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+及CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的凋亡,降低小鼠骨髓细胞中HSC的扩增能力,但对单个CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的增殖及分化无明显影响。     

纳武利尤单抗治疗肺癌的疗效及与IFN-γ基因突变的相关性研究

目的 探讨纳武利尤单抗治疗肺癌的疗效及对患者预后的影响,并探讨疗效与IFN-γ基因突变的相关性。方法 选取邢台医学高等专科学校第二附属医院2020年1月—2021年6月收治的肺癌患者共150例作为研究对象,根据治疗方案不同,将150例患者分为对照组和试验组,每组各75例;纳入同期邢台医学高等专科学校第二附属医院行健康体检的人群100例,设为健康对照组。对照组采用多西他赛进行化疗,试验组应用纳武利尤单抗进行治疗。比较治疗6周后两组疗效,观察用药治疗期间不良反应发生情况,随访记录患者生存情况,分析肺癌患者与健康对照人群IFN-γ基因+874A/T单核苷酸多态性,并分析IFN-γ+874A/T基因多态性与纳武利尤单抗疗效的关系。结果 试验组治疗总有效率为28.0%,高于对照组的14.6%,两组比较差异显著（P＜0.05）;试验组不良反应中脱发、贫血、肌肉酸痛、中性粒细胞减少情况均显著少于对照组（P＜0.05）;试验组疲倦、胃肠道反应发生情况与对照组比较差异无统计学意义（P＜0.05）;随访15个月后,试验组患者中位生存时间为2.500个月（95%CI：2.120～10.425）;对照组患者中位生存时间为4.264个月（95%CI：2.021～11.230）。Log-rank检验显示,两组患者生存情况无显著差异（χ²＝3.84,P=0.912）;肺癌患者IFN-γ+874TT基因型频率和T等位基因频率分别为25.33%、48.6%,显著高于健康对照人群的6.0%、22.0%（P＜0.05）;试验组75例患者中15例有效（20.0%）,有效患者中TT基因型与T等位基因占比与无效患者基因型比较,差异显著（P＜0.05）。结论 纳武利尤单抗能够提升肺癌治疗效果,并且具有较高的安全性;IFN-γ+874A/T基因多态性与纳武利尤单抗治疗肺癌疗效可能有关。     

细胞周期抑制剂SNS-032对小鼠造血干细胞生物活性的影响研究

本研究旨在探讨SNS-032（C17H24N4O2S2）对小鼠骨髓造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSC）细胞周期、凋亡、分化及自我更新的影响及其可能的相关机制。利用极限稀释实验检测SNS-032作用前后HSC自我更新的变化,用流式细胞术检测SNS-032作用前后小鼠骨髓细胞Lin-c-kit＋Sca-1＋及Lin-c-kit＋Sca-1-表型细胞的细胞周期及凋亡的变化,用实时定量PCR检测SNS-032作用前后细胞周期相关基因、凋亡相关基因及HSC自我更新相关基因mRNA表达量的水平。结果显示,SNS-032处理后,小鼠骨髓细胞中HSC的自我更新能力没有明显变化;加SNS-032处理后,小鼠骨髓细胞Lin-c-kit＋Sca-1＋表型细胞的细胞周期无统计学意义的变化（P〉0.05）,小鼠骨髓Lin-c-kit＋Sca-1-表型细胞的G1期细胞增多（P〈0.05）;小鼠骨髓细胞Lin-c-kit＋Sca-1＋表型细胞和Lin-c-kit＋Sca-1-表型细胞的细胞凋亡增多,与对照相比均无显著性差异（P〉0.05）。小鼠骨髓细胞经SNS-032处理后,HSC周期相关基因CDK1、CDK2、CDK7、p27的表达量均明显降低（P〈0.05）,而CDK4,CDK6,p21,p18,p19,p16的表达与对照组相比没有明显变化（P〉0.05）。凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Puma和p53表达量与对照组相比没有明显区别（P〉0.05）,与干细胞自我更新相关的基因中Bim,Sall4,Notch1表达量升高,但与对照组相比没有显著性差异（P〉0.05）。结论：SNS-032没有明显的抑制正常造血干细胞自我更新、分化作用,而且SNS-032没有明显的诱导正常造血干、祖细胞的凋亡作用。