荨麻鞣质的体内抗氧化活性研究

为了说明荨麻鞣质的体内抗氧化活性,给小鼠灌胃荨麻鞣质50mg/kg·d,100mg/kg·d及200mg/kg·d共7d,7天后测定小鼠体内超氧化歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,说明荨麻鞣质能够明显提高小鼠抗氧化系统功能,初步确定荨麻鞣质的抗氧化性。     

BD Influx流式细胞分选仪参数调试和最佳条件的设定

目的：探索BD Influx流式细胞仪分选细胞亚群的调试参数和最佳设定条件。方法：使用两种质控试剂Rainbow Beads和Accudrop Beads作为实验材料,对BD Influx流式细胞仪的针孔、液流、荧光通道、前向角散射光信号、液滴频率、振幅和液滴延迟等参数进行优化。结果：使用型号为100μm的喷嘴,在液流聚焦清楚、液柱打入废液收集管的正中央、荧光光斑进入针孔中央且最亮、前向角散射（FSC）光光斑进入针孔中央且最亮、断点最高、液流分叉呈稳定的亮点、振幅为5.20＆#177;1.00以及液滴延迟为35.20＆#177;2.00等最佳设定条件下,其细胞样本分选纯度可达99%,工作效率可达95%。结论：流式细胞仪分选参数条件的设定,可为获得高纯度、高活性的细胞提供快速调试方法。     

体外心肺复苏在成人难治性院内心脏骤停中的应用

目的总结体外心肺复苏(ECPR)技术用于成人院内心脏骤停(IHCA)患者抢救性循环辅助治疗的临床经验。 方法总结分析2012年7月至2017年12月间于首都医科大学附属北京安贞医院住院的74例成人IHCA患者进行ECPR辅助患者临床资料,按照是否存活出院分为出院存活组(SG组,n＝23)和住院死亡组(DG组,n＝51),通过多元回归来分析影响患者临床预后的高危风险因素。 结果存活出院患者,神经系统功能良好(脑功能分级为CPC 1～2级)。与SG组患者相比较,DG组患者接受ECPR辅助前的平均年龄较高、血气pH值较低和细胞外剩余碱较低,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。体外膜氧合(ECMO)辅助期间DG组患者肾脏功能衰竭需接受持续肾脏替代治疗和严重神经系统并发症的发生率均较高,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。多元回归分析结果提示高龄(年龄≥65岁)、肾脏功能衰竭需要持续肾脏替代治疗和严重神经系统并发症是影响IHCA患者住院死亡的独立高危风险因素。 结论ECMO能够为成人IHCA患者提供有效循环辅助,挽救部分患者生命。     

疏水层析法和凝胶过滤法分离HI47抗CD20 F(ab'''')2之比较

目的　比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI4 7抗CD2 0F(ab’) 2 的优缺点。方法　采用亲和层析柱protein G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD2 0F(ab’) 2 的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80 %B液洗脱2 0min ,10 0 %B液洗脱30min ;凝胶过滤以5 0mmol LPB缓冲液(pH 7.0 ) ,0 .8mL min洗脱4h。结果　粗纯化产物主要含F(ab’) 2 、Fab’,含量分别为19.6 %、5 9.7%。采用疏水层析法1h即可完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 7% ,纯度为89.3% ;凝胶过滤4h完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 5 % ,纯度为90 .5 %。FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%。结论　疏水层析分离纯化抗CD2 0F(ab’) 2 简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产。     

哮喘片中麻黄的薄层色谱研究

目的：确定哮喘片薄层色谱鉴别的实验方法。方法：采用3种不同展开荆分别进行哮喘片中麻黄薄层色谱鉴别研究。结果：哮喘片色谱条件为：采用硅胶G色谱板,以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：8：1）为展开剂,茚三酮试液为显色荆,斑点清晰。结论：本实验精密度好且操作简便易行。     

靶向4-1BBL 和CD3 双信号的协同抗肿瘤作用机制研究*

目的:探讨人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20diabody介导的靶向杀伤作用及其机制。方法:通过表达纯化人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20diabody，利用台盼蓝计数观察联合应用人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20diabody对淋巴细胞增殖的影响；采用ELISA 检测白介素-2（IL- 2）水平。RT-PCR 检测穿孔素和颗粒酶mRNA 的表达。Calcein 检测其联合应用抗CD3/抗CD20双功能抗体及PBL 对靶细胞Raji 细胞的杀伤作用。结果:人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20diabody对靶细胞Raji 细胞的杀伤作用，其机制可能是促进淋巴细胞增殖，减少细胞死亡，促进IL- 2 分泌及上调穿孔素和颗粒酶mRNA 表达。结论:人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白与抗CD3/抗CD20diabody联合应用，分别靶向4-1BBL 和CD3 双信号发挥协同抗肿瘤作用，为肿瘤免疫治疗提供了新的思路。      

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.     

NBS法标记抗CD20F(ab')2条件的研究

目的 :探讨NBS法标记抗CD2 0F(ab’) 2 的最优条件。方法 :其它条件固定时 ,依次改变反应时间、NBS用量、反应温度、反应体积 ,进行标记后将反应混合物经PD - 1 0柱淋洗 ,收集蛋白峰 ,测定放射性计数 ,计算标记率和免疫活性分数。结果 :反应时间在 2min之前 ,标记率随时间延长而提高 ,2min后出现平台 ,3min达最大值 ,活性在 3min之前变化不大 ,之后明显降低 ;NBS/F(ab’) 2 在 1 6时标记率最高 ,1 4之后活性急剧下降 ;温度对标记率和活性的影响不明显 ;小体积反应有利于提高标记率。结论 :反应时间为 3min ,NBS/F(ab’) 2 为1 6 ,室温小体积标记为最优条件     

改善蛋白药代动力学的方法--蛋白聚乙二醇化的研究进展

蛋白作为治疗药物有很大的前途.然而,许多蛋白很容易被体内的蛋白酶水解,具有较快的肾脏清除率和体内代谢半衰期短的缺点;同时治疗蛋白是异源物质,易引起机体的免疫排斥反应,从而限制了治疗蛋白的使用范围.聚乙二醇化是聚乙二醇通过某种官能团与蛋白相连的过程,其结果是提高了蛋白的分子量、增强了抗蛋白酶水解的能力、降低了免疫原性和改善了药代动力学参数.本文综述了蛋白与聚乙二醇的连接方法、蛋白聚乙二醇化的分析方法和聚乙二醇化在临床治疗药物中的应用.