血小板衍生生长因子BB在川崎病血小板增多中的作用及机制研究

目的 通过体内外实验探究血小板衍生生长因子BB (platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对川崎病（Kawasaki disease,KD）小鼠和人巨核细胞株Dami细胞生成血小板的作用及机制。方法 ELISA检测KD及健康儿童各40例血清PDGF表达水平。C57BL/6小鼠构建KD模型,随机分为正常组、KD组、伊马替尼组,每组30只。检测各组血常规及PDGF-BB、巨核细胞集落形成单位（megakaryocyte colony forming unit,CFU-MK）、巨核细胞标记物CD41表达。采用CCK-8、流式细胞术、实时定量PCR、Western blot检测PDGF-BB对Dami细胞生成血小板的作用和机制。结果 PDGF-BB在KD患儿血清中高表达（P<0.001）。KD组小鼠血清PDGF-BB高表达（P<0.05）、CFU-MK及巨核细胞标记物CD41表达增加（P<0.001）;伊马替尼组CFU-MK及CD41表达减少（P<0.001）。体外实验结果显示,PDGF-BB促进Dami细胞增殖、血小板生成、...     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞微小RNA-202的表达及意义

目的 建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞(PBMC)中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法 采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析;结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次;及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值(Ct)计算标准差和变异系数(CV),以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2％,批间CV为3.2％,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844(0.162 ～3.966),健康对照组表达量为0.014(0.007～0.221),MM组中miR-202表达明显高于健康对照组(U=48.000,P＜0.01).结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标.     

BAFF及其特异性受体BAFF—R对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨B淋巴细胞刺激因子（BAFF）及其特异性受体BAFF—R对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖及凋亡的影响。方法采用流式细胞术（FCM）、RT—PCR、WesternBlot、荧光免疫细胞化学技术检测BAFF及其受体BAFF—R的表达与定位;wsT细胞增殖实验及TUNEL法检测BAFF及其受体BAFF—R对MM肿瘤细胞生长、存活与凋亡的影响。结果①MM细胞能够表达BAFF及其特异性受体BAFF—R;②BAFF及其受体BAFF—R定位表达于KM3细胞的浆膜上;③BAFF及其受体BAFF—R促进MM细胞的增殖、存活,抗细胞凋亡。结论BAFF及其受体BAFF—R对于骨髓瘤发生、发展可能起着重要的作用。     

长链非编码RNA ZFAS1在胃癌患者血清中的表达及临床意义

目的：建立基于实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测血清长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)zinc finger antisense 1(ZFAS1)的方法,应用该技术检测胃癌(gastric cancer, GC)患者、胃良性病变患者及健康体检者血清ZFAS1相对表达水平,探讨血清ZFAS1对GC辅助诊断的应用价值。方法：随机采集南通大学附属医院经病理确诊的94例GC患者(其中包括初诊患者54例,术后患者35例和复发/转移5例)、20例胃良性病变患者的血清标本,同期匹配47例年龄相仿的健康体检者血清标本进行对比分析。通过qRT-PCR检测血清ZFAS1的相对表达水平,并评价其线性、重复性及特异性;分析血清ZFAS1表达与GC患者临床病理参数的相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC曲线)评价血清ZFAS1、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)及糖类抗原19-9(carbohydrate antigen19-9, CA19-9)单独及联合检测对GC的诊断价值。结果：检测血清ZFAS1含量的qRT-PCR方法线性良好,重复性较好,特异性较高,熔解曲线单峰特异。GC初诊患者血清ZFAS1的表达水平显著高于良性病变组、正常对照组(P<0.001);GC患者术后血清ZFAS1显著低于术前(P<0.01);GC初诊患者血清ZFAS1含量与患者肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05);ROC曲线分析显示,ZFAS1、CEA、CA19-9单独作为诊断指标时,ROC曲线下面积分别为0.816 4、0.658 8、0.556 3,三者联合诊断可提高诊断灵敏度。结论：血清ZFAS1在GC辅助诊断及术后病程监测中发挥作用。     

建立实时荧光定量PCR检测胃癌患者血清循环长链非编码RNA HULC的方法及其意义*

目的：建立基于实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测血清循环长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）HULC的方法，应用该技术检测胃癌、胃息肉患者及正常人血清HULC的表达水平，探讨血清HULC检测在胃癌辅助诊断中的价值。方法：采集经病理确诊的110例初诊胃癌患者、30例胃息肉患者的血清标本，与110例正常人血清标本进行对比，采用RT-qPCR方法检测HULC的相对表达量。结果：RT-qPCR方法检测循环HULC稳定可靠、线性良好、批内变异系数为2.89%、批间变异系数为4.85%。初诊胃癌患者血清HULC表达水平为2.423±0.326，显著高于胃息肉组的1.105±0.102和正常对照组的0.901±0.068，差异均有统计学意义（P均<0.01），而胃息肉组和正常对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。以血清HULC相对表达量1.4525作为诊断初诊胃癌患者和正常对照者的临界值，其ROC曲线下面积为0.888（95% CI 0.843～0.934），明显高于CEA 0.694（95% CI 0.621～0.737）和CA72-4 0.514（95% CI 0.433～0.595）。结论：实时荧光定量PCR是一种简便、特异性好的检测循环HULC的方法，检测血清中循环HULC浓度对胃癌早期辅助诊断有一定的价值。     

多发性骨髓瘤患者PBMC中miR-335的甲基化及其表达研究

目的探讨micorRNA-335(miR-335)表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用。方法用荧光定量PCR检测43例MM患者和30例体检健康者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-335的表达水平,用甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-335启动子区甲基化水平,分析其与各临床指标的相关性。结果 43例MM患者PBMC中miR-335的表达水平为34.8(15.3,84.9),显著低于健康对照组的269.4(63.3,780.2),Z=4.384,P0.05。11例MM患者(25.6%,11/43)呈现完全甲基化,其余患者均为部分甲基化,而23例体检健康者(76.7%)呈现完全非甲基化(Uc=6.62,P0.05)。初诊MM患者miR-335表达量高于复发/进展期患者(Z=2.309,P0.05),但复发/进展期患者中miR-335启动子区甲基化程度(75%)高于初诊患者(25%),T=24.5,P0.05。MM患者miR-335表达水平与轻链λ浓度呈相关性(r=0.51,P0.05)。结论 MM患者miR-335表达水平和甲基化可作为MM潜在的辅助诊断指标。     

人BAFF-R基因启动子活性的初步研究

目的以B淋巴细胞刺激因子受体BAFF-R基因5'上游区序列为研究对象,初步鉴定、分析该基因的启动子所在区域。方法克隆BAFF-R基因5'侧翼区1823 bp序列,构建8个含有不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-B1～B8,将这8个序列缺失重组质粒与psv-β-gal质粒共转染细胞,检测荧光素酶的相对活性,确定启动子所在区域。结果8个重组质粒中pGL3-B2、pGL3-B3、pGL3-B5、pGL3-B6启动子的活性较低;pGL3-B7启动子的活性最强,pGL3-B8启动子活性最低。结论BAFF-R基因5'端-288～-430、-712～-868和-1420～-1562三个区段可能存在转录沉默子元件,-617～-712和-1277～-1420区段存在转录增强子元件,BAFF-R基因的核心启动子可能位于-1420～+261区域。     

多发性骨髓瘤相关信号通路与miRNA相互调控的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞异常增殖的恶性肿瘤,目前仍未找到治愈的方法。MM细胞的增殖、迁移及耐药与信号通路转导有关。研究发现,微小RNA(MicroRNA,miRNA)在MM中表达异常,并且对信号通路和抑癌基因起重要的调控作用。因此,miRNA被认为是新型的生物学标志物和潜在的治疗靶点。近年来,对于MM中miRNA的表达水平及相关机制的研究众多,本文就目前MM中miRNA参与调控的信号通路以及miRNA靶向结合的mRNA作一综述。     

外泌体在肿瘤中的研究进展

外泌体(exosomes)是一种所有细胞都释放的胞外囊泡,其直径为30~150 nm。外泌体包含了DNA、RNA和蛋白质等内容物。外泌体可以调节细胞间通讯,活化它们所参与或相互作用的细胞内信号通路。外泌体可在肿瘤微环境中检测到,越来越多的证据表明外泌体在促进肿瘤生长中起到重要作用,其参与血管生成、免疫应答和肿瘤转移等活动。循环中的外泌体可能会成为液体活检且无创的生物学标志物应用到肿瘤患者的早期检测、诊断和治疗中。