大鼠骨髓间充质干细胞的原代培养条件

背景:间充质干细胞适合生长、堵养的条件尚不十分明确,目前对于间充质干细胞的分离纯化以及体外培养亦没有统一的方法,而培养出生长状态良好、数量足够多的大鼠骨髓间充质干细胞是进行以上实验的重要前提.目的:寻求适宜有效的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件,观察培养的间充质干细胞生物学特性.设计、时间及地点:分组对比观察.实验于2007-04/09在重庆医科大学附属第一医院实验中心完成.材料;6～8 周龄雄性Wistar大鼠1只,体质量120 g,用于间充质干细胞的分离及培养.方法:采用仝骨髓培养法获取间充质干细胞,按不同接种密度(1×106,5×105,1×105,5×104,1×104 cm2)、血清体积分数(体积分数5%,10%,15%的胎牛血清)、首次换液时间(接种后6,12,24,48,72 h)及pH值(分别为7.0～7.1,7.1～7.2,7.2～7.3,7.3～7.4,7.4～7.5)分组接种,10 d后进行活细胞计数.主要观察指标:不同培养条件对间充质干细胞生长的影响;倒置显微镜下观察原代及传代间充质干细胞的形态变化;采用四甲基偶氮唑盐法绘制细胞的生长曲线,并计算细胞倍增时间;常规SABC免疫组织化学法检测传代间充质干细胞CD44、CD34的表达;流式细胞仪检测传代间充质干细胞生长周期.结果:①以1×106,5×105cm2密度接种的细胞数较多,余3种接种密度获得细胞数明显低于上述2种密度(P＜0.05).首次换液时间为48 h获得的细胞数量最多,各组间相比,差异有显著性意义(P＜0.05).体积分数5%血清组较体积分数10%、15%血清组细胞数量少(P＜0.05).pH值为7.1～7.2,7.2～7.3的培养液细胞生长活跃,细胞数量多,以pH值为7.0～7.1和pH 7.4～7.5培养的细胞生长缓慢,数量较少.②刚接种的间充质干细胞呈圆形,培养6～8 h后开始贴壁,呈纺锤状或类圆形;约10 d左右细胞基本汇合长满瓶底;传代后,细胞形态以梭形为主;经过一二次传代后,细胞呈放射状或平行排列,形态趋于一致.③传代一二天细胞生长缓慢,生长停滞期:自3 d起,细胞生长进入对数生长期,四五天达到高峰:之后进入平台期,细胞倍增时间约为39.5 h.④传代间充质干细胞存在CD44抗原表达,而CD34呈阴性表达.⑤传代后82.93%的间充质干细胞处于G0/G1期,G2+M+S期细胞占17.07%.结论:细胞较佳接种密度为5×105cm2,合适血清体积分数为10%,首次换液时间为48 h,pH值为7.2左右;在适宜的培养条件下,间充质干细胞在体外生长状态良好,增殖速度快.     

Narcotrend麻醉深度监测下羟考酮注射液联合丙泊酚在门诊无痛肠息肉切除术的应用

目的探讨Narcotrend麻醉深度监测下盐酸羟考酮注射液联合丙泊酚在无痛肠镜肠息肉切除术的麻醉效果与安全性。方法选取2019年1月至12月广州中医药大学第一附属医院门诊无痛肠息肉切除患者90例(ASAⅠ~Ⅱ级),随机分为三组:Q组(羟考酮与丙泊酚)、S组(舒芬太尼与丙泊酚)和N组(生理盐水与丙泊酚),每组30例。三组患者分别静脉注射羟考酮5 mg、舒芬太尼5μg和生理盐水2 mL,5 min后静脉注射丙泊酚1~2 mg/kg诱导,并以4 mg·kg-1·h-1持续泵注至息肉切除后退镜至直肠,检查中如有体动反应,追加丙泊酚0.5 mg/kg。观察并记录三组患者麻醉诱导前(T0)、诱导后睫毛反射消失(T1)、过脾区(T2)、过肝区(T3)、切除息肉(T4)、手术结束(T5)的HR、MAP、SpO 2和Narcotrend(NT)值,记录丙泊酚用量、手术时间、阿托品应用例数、呼吸抑制次数,身体扭动次数、术后恶心呕吐及眩晕例数、复苏时间和疼痛视觉模拟评分(VAS)。结果三组患者性别、年龄、身高、体质量及治疗时间相比,差异无统计学意义(P>0.05);Q组、S组与N组相比,丙泊酚用量更少,术中身体扭动次数更少(P均<0.05);Q组较S组丙泊酚用量更小,身体扭动次数和呼吸抑制更少,苏醒时间更快,且术后眩晕例数更少、VAS评分更低(P均<0.05)。三组HR组间比较:T2、T3、T4时点Q组和S组与N组比较,差异有统计学意义(P<0.05);组内比较:T1、T2、T3、T4、T5与T0比较差异有统计学意义(P<0.05)。三组MAP组间比较:T1、T2、T3、T4时点Q组和S组与N组比较,差异有统计学意义(P<0.05);组内比较:各时点比较差异有统计学意义(P<0.05)。三组SpO 2组间比较:T1、T2、T3、T4时点Q组与N组比较,差异有统计学意义(P<0.05),T2、T3、T4时点Q组与S组比较,差异有统计学意义(P<0.05);组内比较:T2、T3、T4时点与T0、T1时点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。三组NT组间比较:T1时点,N组较Q和S组低,T2、T3、T4时点Q组与N组比较,差异有统计学意义(P<0.05);组内比较:除T0时点外各个时间点间比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论Narcotrend麻醉深度监测下,羟考酮注射液联合丙泊酚在无痛肠镜下肠息肉切除治疗中与舒芬太尼联合丙泊酚镇痛效果相当,但生命体征更平稳,安全性系数更高,具有临床应用价值。     

仿生电刺激在离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的 探讨仿生电刺激在离体心肌微环境下诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化中的作用.方法 采用改良方法分离培养大鼠MSCs及心肌细胞,并将两者按固定比例共同培养(称为MSCs/心肌细胞共培养体系),按是否给予仿生电刺激分为非电刺激组和电刺激组,刺激组每日给予频率0.5Hz、脉宽5ms、电压10V(电流强度20μA)的仿生电刺激2h,非电刺激组常规培养.每组又以实验干预培养时间(3、5、7d)分为3个亚组.分别于实验的第3、5、7天观察各组细胞生长情况,细胞免疫荧光方法检测各组MSCs细胞cTnT的表达情况,以及各组的cTnT阳性细胞率.结果 MSCs与心肌细胞共培养之后,电刺激组细胞较非电刺激组生长更为良好,且心肌波动频率高.实验第5天非电刺激组MsCs细胞尚无cTnT表达,而电刺激组有少数MSCs细胞出现cTnT表达.实验第7天非电刺激组和电刺激组MSCs均有cTnT表达,电刺激组MSCs细胞cTnT的阳性细胞率(20.98%±5.55%)明显高于非电刺激组(13.20%±3.98%.P<0.05).结论 仿生电刺激可促进离体心肌微环境诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化,使其更早出现心肌样细胞改变,并提高分化效率.     

代谢综合征合并心房颤动患者左心室整体纵向应变的变化

目的应用二维斑点追踪成像技术(2D-STI)评价代谢综合征(MS)合并心房颤动患者左心室整体纵向峰值应变(GLS),探讨其可能的影响因素。方法收集2015年1月至2016年12月福建医科大学附属泉州第一医院心内科就诊患者资料,按是否合并心房颤动将患者分为MS组(30例)和MS+心房颤动组(30例),以30名同期健康体检者为对照组。观察超声心动图常规指标及左心室GLS。结果与对照组相比,MS组及MS+心房颤动组的左心房内径(LAD)[(3.90±0.54)、(4.30±0.36)比(3.44±0.49)cm,P0.05]、左心室舒张末期内径(LVEDd)[(4.79±0.29)、(4.83±0.40)比(4.51±0.36)cm,P0.05]和左心室质量指数(LVMI)[(106.16±14.45)、(108.21±19.01)比(93.23±12.66)g/m2,P0.05]均明显增大;3组间左心室射血分数(LVEF)差异无统计学意义。与对照组比较,MS组及MS+心房颤动组左心室GLS峰值明显减低[(-18.20±2.84)%、(-15.06±3.09)%比(-24.35±1.99)%,均P0.05],以MS+心房颤动组为著;多元线性回归分析显示,合并心房颤动、肥胖及心室率与GLS呈负相关(分别B=-3.793、-3.770、-0.903,均P0.05)。结论 MS患者存在左心室纵向收缩功能受损,心房颤动、肥胖及心室率增快加重这种变化。     

仿生电刺激在心肌细胞诱导胚胎干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的 探讨仿生电刺激对离体心肌微环境诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌样细胞分化的作用.方法 原代分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞及昆明小鼠ESCs,根据是否给予ESCs仿生电刺激及心肌微环境诱导分为5组:对照组、电刺激组、心肌细胞组、电刺激+心肌细胞条件培养液组、电刺激+心肌细胞组.分别于实验第5、7、14天在相差显微镜下...     

二维斑点追踪成像评价阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者右心室收缩功能

目的应用二维斑点追踪成像评价阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAHS)患者的右心室收缩功能。方法 58例经多导睡眠监测仪器确诊的OSAHS患者分为轻度、中度及重度组,另匹配正常对照组20例。分别应用二维斑点追踪成像技术和常规超声心动图指标测量右心室结构和功能;分析比较各组间测量参数的差异。结果中度、重度组OSAHS患者与对照组比较,右心室游离壁各节段应变减低,差异有统计学意义(P0.05);重度组OSAHS患者三尖瓣环组织多普勒收缩期峰值速度(S')和三尖瓣瓣环收缩期位移(TAPSE)较正常组减低,差异有统计学意义(P0.05);四腔心右心室基部横径(RVD)、右心室面积变化率(FAC)和肺动脉收缩压(PASP)在各组间测量结果差异无统计学意义(P0.05)。结论中度、重度OSAHS患者在右心室收缩功能正常情况下存在右心室心肌功能受损,二维斑点追踪成像技术可以敏感检测出亚临床受损情况。     

应用比索洛尔联合稳心颗粒治疗老年缺血性心律失常的疗效观察

目的：探讨分析应用比索洛尔联合稳心颗粒治疗老年缺血性心律失常的临床疗效。方法：选取2011年1月至2012年10月间我院收治的老年缺血性心律失常患者58例作为研究对象,将其随机分为对照组（29例）和治疗组（29例）,应用比索洛尔为对照组患者进行治疗,应用比索洛尔联合稳心颗粒为治疗组患者进行治疗,观察对比两组患者的临床疗效及不良反应的发生情况,并将对比的结果及两组患者的临床资料进行回顾性的分析。结果：治疗组患者治疗的总有效率为96.55%,对照组患者治疗的总有效率为86.21%,治疗组患者的临床疗效明显优于对照组患者,差异显著（P＜0.05）,具有统计学意义。治疗组患者动态心电图的好转率为86.21%,对照组患者动态心电图的好转率为72.41%,治疗组患者的动态心电图疗效明显优于对照组患者,差异显著（P＜0.05）,具有统计学意义。结论：应用比索洛尔联合稳心颗粒治疗老年缺血性心律失常的临床疗效显著,值得在临床上推广应用。     

以间充质干细胞为饲养层分离培养昆明小鼠胚胎干细胞

目的:探讨以间充质干细胞作为饲养层细胞分离培养昆明小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的方法.方法:以鼠间充质干细胞作为饲养层,收集受孕3.5～4 d昆明小鼠的囊胚和桑椹胚进行培养,筛选纯化细胞集落,使其稳定传代后,采用光镜,碱性磷酸酶染色及Oct-4染色对其形态学和生物学性状进行初步鉴定.结果:以间充质干细胞作为饲养层细胞分离培养的昆明小鼠ES有其典型的形态学特征:集落呈鸟巢状,边缘清楚,表面平滑,结构致密,隆起生长,细胞之间界限不清楚;单个细胞体积小、核大;对ES细胞碱性磷酸酶进行检测,末分化的Es细胞显微镜下为黄褐色,分化的不着色;Oct-4染色阳性.结论:以间充质下细胞作为饲养层细胞分离培养昆明小鼠胚胎干细胞可行,得到的胚胎干细胞能保持特殊的形态和未分化状态.     

参松养心胶囊联合比索洛尔治疗老年高血压性心脏病室性心律失常的临床疗效观察

目的探讨参松养心胶囊联合比索洛尔治疗老年高血压性心脏病致室性心律失常的临床疗效。方法采用随机、双盲、双模拟试验法,将180例老年高血压性心脏病致心律失常患者按照1:1:1比例随机数字分组为三组(各60例):参松组服用参松养心胶囊和比索洛尔模拟剂;比索洛尔组服用比索洛尔和参松养心胶囊模拟剂;联合组同时服用参松养心胶囊和比索洛尔。比较三组患者治疗前后的心率变异性指标变化及临床疗效、不良反应发生率。结果联合组的RMSSD、SDNN、SDANN水平均显著高于另外两组,比索洛尔组的RMSSD、SDNN、SDANN水平均显著高于参松组(P0.05)。联合组的总有效率为90.00%,显著高于另外两组,比索洛尔组的总有效率为75.00%,显著高于参松组的66.67%(P0.05)。三组患者的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论参松养心胶囊联合比索洛尔治疗老年高血压性心脏病致室性心律失常能够有效改善患者的心率变异性,缓解临床症状,其临床疗效确切,不良反应少,安全性好。     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良

目的:探讨更为简便的新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的数量、存活率和纯度.方法:用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,分离新生大鼠心肌细胞,进行体外培养,观察心肌细胞形态学变化,并以细胞免疫荧光进行心肌细胞纯度鉴定.结果:心肌细胞分离良好,收获细胞数量及存活率高,可贴壁搏动生长,免疫荧光显示培养的心肌细胞纯度达95%以上.结论:改良的细胞培养技术可获得生长状态良好的心肌细胞.