氧化应激反应在边缘供肝肝移植缺血-再灌注损伤中的作用研究进展

常见的边缘供肝主要包括脂肪变性供肝、高龄供肝、小体积供肝、心脏死亡器官捐献(DCD)供肝等。边缘供肝的应用可在一定程度上解决供肝数量严重短缺的问题,但边缘供肝面临着缺血-再灌注损伤(IRI)的难题,且IRI程度相比正常供肝更加严重,是导致移植失败的重要原因,其中氧化应激反应又是引起边缘供肝IRI的重要因素。因此如何减少氧化应激反应及解决边缘供肝IRI的难题成为临床研究的热点问题。活性氧簇(ROS)介导的氧化应激反应贯穿IRI整个过程,本文就氧化应激反应在边缘供肝肝移植IRI中的作用及以ROS为靶点的防治进行综述,以期为临床提供参考。     

电磁脉冲对BV-2细胞形态和分泌功能的影响及其机制探讨

目的 研究电磁脉冲( electromagnetic pulse,EMP)对小鼠BV-2小胶质细胞形态及分泌功能的影响,并初步探讨其作用机制.方法 离体培养的BV-2细胞经200 kV/m EMP辐照200次,分别在辐照后1、6、12、24h收集细胞培养上清及细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10等细胞因子水平的变化,硝酸还原酶法检测培养上清中一氧化氮(NO)水平,DCFH-DA探针检测活性氧,免疫印迹(Western-blot)法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、c -Jun氨基末端激酶(JNK)、p38磷酸化水平和蛋白表达量的变化.应用p38抑制剂( SB203580)预处理细胞后再进行EMP辐照,然后检测培养上清中NO水平和活性氧的生成.结果 EMP辐照后1、6和12h,部分小胶质细胞出现胞体变大、突触变粗变短,且活化细胞比例与假辐照组相比明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);EMP辐照后细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-10等细胞因子水平未发生明显改变,但活性氧检测结果显示,与假辐照组(小胶质细胞平均荧光强度10.34)相比,EMP辐照后1h小胶质细胞荧光强度(平均荧光强度21.56)明显增加,6h达峰值(平均值为32.46),12h开始恢复(平均荧光强度24.36),差异均有统计学意义(P＜0.05),24h恢复至假辐照水平;EMP辐照后NO水平的变化与活性氧一致,辐照后1h开始增加,6h达峰值,12h开始恢复,24h恢复至假辐照组水平;蛋白杂交结果显示,EMP辐照后1、6h,p38的磷酸化水平和蛋白水平较假辐照组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),ERK和JNK无明显变化.应用p38抑制剂SB203580预处理细胞,明显抑制了EMP诱导的小胶质细胞对活性氧和NO的产生,活性氧水平除6h组未恢复至假辐照水平外,其他各组均恢复至假辐照水平,NO水平各组均恢复至假辐照组水平.结论 EMP辐照可活化小胶质细胞并且促进其对NO和活性氧的生成,p38信号通路参与了此过程.     

电磁脉冲对血-视网膜内屏障体外模型通透性的影响

目的 建立血-视网膜内屏障(inner blood-retinal barrier,inner BRB)体外试验模型,研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)(200 kV/m,200次脉冲)照射对血-视网膜内屏障通透性的影响.方法 以transwell半透膜细胞培养池为载体,将猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)与大鼠胶质瘤细胞(C6)非接触式共同培养,建立体外血-视网膜内屏障,测定跨内皮电阻抗(TEER)及辣根过氧化物酶(HRP)透过率,以评价该屏障建立状态.于电磁脉冲照射该模型后0.5、3、6、12、24h测定TEER及HRP透过率,研究电磁脉冲对血-视网膜内屏障通透性的影响.结果 RF/6A与C6共培养模型的TEER值最高达到145 Ωcm2(接种后第6天),与RF/6A单独培养组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).共培养模型与单独培养组间HRP透过率的差异有统计学意义(P＜0.05).共培养屏障模型抑制大分子物质穿透的能力增高,于接种后第6天达最低值,两种评价方法结果一致.EMP照射RF/6A与C6共培养模型后0.5、3、6h,TEER测定值较平行对照组降低,HRP透过率较平行对照组升高.结论 EMP(200 kV/m,200次脉冲)照射后,血-视网膜内屏障体外模型通透性增加.     

微创手术联合术后腹腔热灌注化疗对进展期食管胃交界部腺癌患者细胞免疫因子及肿瘤标志物的影响*

目的探讨微创手术联合术后腹腔热灌注化疗对进展期食管胃交界部腺癌(AEGJ)患者细胞免疫因子及甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原724(CA724)和癌胚抗原(CEA)的影响。方法选取2014年1月-2016年1月该院进展期AEGJ患者200例,依据随机数字表分为A组和B组,每组100例,A组给予微创手术常规治疗,B组在此基础上联合术后腹腔热灌注化疗治疗,比较两组细胞免疫因子(T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD25~+)、肿瘤标志物(AFP、CA724、CEA)、不良反应和生存情况。结果 A组和B组治疗后CD3~+、CD4~+明显高于治疗前,B组治疗后CD3~+、CD4~+明显高于A组,A组和B组治疗后CD4~+/CD25~+、AFP、CA724和CEA明显低于治疗前,B组治疗后CD4~+/CD25~+、AFP、CA724和CEA明显低于A组,差异均有统计学意义(P 0.05);B组3年生存率明显高于A组,差异有统计学意义(P 0.05);A组和B组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P 0.05)。结论微创手术联合术后腹腔热灌注化疗,可增强进展期AEGJ患者细胞免疫能力,改善AFP、CA724和CEA水平,提高生存率,且安全性好。     

龙葵碱诱导胰腺癌细胞Panc-1凋亡的实验研究

目的 探讨龙葵碱对胰腺癌细胞Panc-1的凋亡诱导作用.方法 采用经典方法培养胰腺癌细胞系Panc-1成功后,取对数生长期的细胞用于实验研究,用不同浓度(分别为20、30、40和50 μg/mL)的龙葵碱进行干预,采用倒置显微镜观察龙葵碱作用后Panc-1细胞的形态学改变;CCK-8比色法检测龙葵碱对Panc-1细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 龙葵碱显著抑制人胰腺癌细胞Panc-1生长,并具有浓度和时间依赖性.倒置显微镜观察发现,随着龙葵碱浓度增加和作用时间延长,Panc-1细胞表现出典型的凋亡形态改变;CCK-8比色法发现,随着龙葵碱浓度增加和作用时间延长,对Panc-1细胞的增殖抑制作用逐渐增强;流式细胞术检测发现,Panc-1细胞的凋亡率随着龙葵碱浓度增加而逐渐增加.结论 ①龙葵碱能够抑制胰腺癌细胞Panc-1的增殖,且此抑制作用具有时间和浓度依赖性.②龙葵碱具有诱导胰腺癌细胞Panc-1凋亡的作用,并具有浓度依赖性.     

严重烧伤大鼠血清对脂肪间质干细胞生物学特性的影响

目的 探讨严重烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响.方法 取雄性SD大鼠双侧腹股沟脂肪组织,采用胶原酶消化法、分离纯化大鼠ADSCs,取第3代细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标志物,行成脂成骨诱导分化鉴定;ADSCs传代后按随机数字表法分为10％胎牛血清组(正常培养组)、10％正常大鼠血清组,10％烧伤大鼠血清组,采用噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞的生长曲线.通过流式细胞仪检测各组细胞的生长周期、Real-time PCR法检测各组细胞血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡相关因子Caspase-3的表达情况.结果 分离培养的ADSCs传至第3代时形态规则,经流式细胞仪检测,所培养的ADSCs均表达CD29、CD90、CD105,阳性率分别为88.6％、99.7％、92.8％,而CD31、CD34、CD45阳性率分别为4.4％、4.7％、3.3％;经诱导培养后可向成骨成脂分化.MTT法检测结果显示:10％烧伤大鼠血清组细胞增殖较快,各时间点吸光度值(A值)明显高于10％胎牛血清组及10％正常大鼠血清组.流式细胞仪检测结果显示:培养1周后10％烧伤大鼠血清组、10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组ADSCs G1期细胞比例分别为:(72.20±5.13)％、(83.50±4.74)％、(90.20±6.37)％;S期细胞比例分别为:(21.40±2.84)％、(12.50±1.96)％和(8.60±1.31)％,10％烧伤大鼠血清组ADSCs G1期细胞比例显著低于10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组(t=2.39、4.86;P ＜0.05);10％烧伤大鼠血清组ADSCs S期细胞比例显著高于10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组(=5.54,7.93;P＜0.01).Real-Time PCR检测结果显示:10％烧伤大鼠血清组VEGF的表达明显上调,Caspase-3表达显著下调与10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 10％烧伤大鼠血清可明显促进ADSCs的增殖、抑制细胞凋亡发生、促进ADSCs的分泌功能,严重烧伤后可望移植ADSCs用?     

张力性创口的临床修复方法和新策略

张力性创口在临床上有较高发生率 ,其治疗具有一定难度.张力性创口是指创口两侧皮肤在直接缝合时受到向两侧张开的应力较高的一类创口 ,多由皮肤软组织缺损较大等因素造成.张力性创口处理不及时或不恰当会带来各种并发症.在临床上 ,处理张力性创口的方法 多种多样 ,各有优缺点.创口因其位置、范围、功能活动、附近正常组织情况决定了其处理的难易程度.为了能够更准确、更合理地应对张力性创口的治疗 ,本文就张力性创口的修复策略进行综述如下.     

降钙素原、超敏C-反应蛋白等早期诊断肿瘤晚期感染发热、肿瘤热临床价值研究

目的 探讨血清降钙素原(PCT)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、中性粒细胞计数(NEUT)及白细胞计数(WBC)等指标对早期诊断肿瘤热与肿瘤晚期患者感染发热的临床价值.方法 选取自2016年7月至2018年7月邯郸市中心医院收治的108例肿瘤患者为研究对象.66例肿瘤晚期感染性发热患者为肿瘤感染发热组,42例肿瘤热患者为肿瘤热组,所有患者均于发热第1天留取静脉血进行PCT、hs-CRP、NEUT及WBC检测,鉴别患者感染病原菌并分析主要病原菌耐药性.结果 肿瘤热组患者的PCT水平显著低于肿瘤感染发热组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者的WBC、NEUT％、hs-CRP比较,差异无统计学意义(P>0.05).受试者工作特征曲线显示,PCT诊断肿瘤晚期感染发热的曲线下面积为0.891,最佳临界值取0.83μg/L时敏感性和特异度分别为88.7％、90.2％.肿瘤晚期感染发热患者中,血液感染者血清PCT水平最高,其次为肺部感染者,泌尿系感染和腹腔感染者血清PCT水平较低.肿瘤晚期感染发热病原菌主要为革兰阳性菌,以肠球菌属、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌为主,其中,肠球菌属对替加环素敏感率达100％.结论 血清PCT鉴别、诊断肿瘤晚期患者感染发热、肿瘤热具有较高的临床价值,可作为一项指标鉴别不同类型肿瘤发热患者.     

脂氧素A4对急性坏死性胰腺炎诱发全身炎症反应综合征的调节

自Rinderknecht[1]报告白细胞过度激活是导致急性坏死性胰腺炎(ANP)病死的主要因素以来,全身炎症反应综合征(SIRS)在ANP发病机制中的作用受到重视.有人通过抑制SIRS来治疗ANP,短时血液滤过即为一例.脂氧素(LX)是近年来发现的一种内源性抗炎介质,产生于炎症后期,能促进炎症反应的及时消退,被誉为炎症反应的“刹车信号(braking signals)”或“停止信号(stop signals)”[2].我们曾进行的体外实验证实脂氧素A4能抑制中性粒细胞的激活以及促炎细胞因子的释放[3].本研究旨在观察脂氧素A4在体内对ANP-SIRS的抑制效果.