P-选择素缺失对小鼠生理特征的影响

目的 探讨P-选择素基因（P-selectin）缺失对小鼠生理特征的影响。方法 P-选择素敲除（PKO）小鼠和C57小鼠饲养于SPF级环境中,通过基因鉴定确定其为纯和PKO小鼠。观察PKO小鼠的活动状态、繁育状况,检测血常规,确定P-选择素敲除后对小鼠一般情况的影响。分别于6周和18周处死小鼠,通过伊红&苏木素（HE）染色,观察P-选择素敲除后对小鼠各个脏器组织结构的影响。结果 PKO小鼠与正常C57小鼠的繁育状况相似,血常规无异常,HE染色发现PKO小鼠肝、脾、肺、肾组织结构均较正常。结论 P-选择素的缺失不会对小鼠生殖繁育、血液造成影响,对重要的组织脏器也未见明显影响,为以后进一步研究P-选择素在疾病中的作用提供了动物模型研究理论基础。     

川芎、瓜蒌仁、桑叶提取物对肝微粒体脂质过氧化模型的影响

目的：观察川芎、瓜蒌仁、桑叶的抗氧化作用，分析其剂量效应关系。 方法：实验于2005—05／06在解放军第四军医大学毒理学教研室完成。①选用二级雄性成年SD大鼠50只。动物禁食24h，处死后取出肝脏，制成匀浆。采用钙盐沉淀法制备鼠肝微粒体。②过氧基异丙苯激发的肝微粒体脂质过氧化模型：反应体系中的缓冲液为Tris／HCl（0．1mol／L,pH=7．4）与0．15mol／L KCl按1：2的体积比配制。将制备的微粒体按照lmL／g肝湿重的比例用预冷的0．15mol／L KCl缓冲液悬浮。在模型反应体系中含缓冲液1．00mL，1mmol／L过氧基异丙苯0．15mL，微粒体悬液0．1mL和中药提取物0．15mL（川芎、瓜蒌仁、桑叶购于西安万寿路中药材市场。采用煎煮法制备3种中药水提物。粗粉加入8倍质量的水煎煮1．5h后，过滤，沉淀物再经5倍质量水煎煮1h，得水提液。得到的水提液趁热过滤，过滤液继续加热，蒸发掉水分，得到的水提膏经80℃烘干，备用，检测水分〈5％。干燥器内保存）。37℃水浴15min，终止反应后离心，取上清，用硫代巴比妥酸法显色并测出吸光度，同时用不同浓度的丙二醛标准品作标准曲线，拟合标准直线方程，由此计算各组的丙二醛浓度。③维生素C／Fe^2＋激发的肝微粒体脂质过氧化模型：将上述的反应体系改为缓冲液0．8mL，50μmol／LFeSO4 0．15mL及5mmol／L维生素C0．15mL、微粒体悬液0．1mL和中药提取物0．2mL。④四氯化碳／辅酶Ⅱ激发的肝微粒体脂质过氧化模型：将上述的反应体系改为含贮备液（由0．15mol／LKCl 45mL，0．10mol／L Tris／HCl（pH7．4）30mL，H204．5mL，G-6-P127mg，5g／LG-6-P Deh30μL，辅酶Ⅱ15mg，乙酰胺500mg混合配制）2．20mL，四氯化碳／二甲基亚砜（按体积比l：4配制）0．50mL，微粒体悬液0．30mL，中药提取物0．50mL。⑤每个模型每种药物设1个阳性对照组（n=3，只造模，未加入中药），5个质量浓度（50，25，12．5，6．25，3．125g／L），每个质量浓度设3个平行样，一个阴性对照管。以每个平行样与相应的阴性对照管吸光度（A值）之差作为该药物浓度下的A值的绝对值。根据A值求得不同剂量药物干预下丙二醛浓度和各药物在各质量浓度下对丙二醛生成量的抑制率。⑥计量资料差异比较采用单因素方差分析。 结果：①过氧基异丙苯激发的脂质过氧化模型中，川芎和瓜蒌仁作用下丙二醛生成量得到了明显的抑制（P〈0．01），而桑叶作用下生成量只在药物高质量浓度（50，25g／L）下受到抑制。抑制率均随药物质量浓度的降低而降低（除了川芎的最低质量浓度）。②维生素C／Fe^2＋激发的脂质过氧化模型中，川芎、瓜蒌仁、桑叶作用下．丙二醛生成量得到了明显的抑制（P〈0．01），抑制率与药物质量浓度关系不明显，且药物在该模型中的抑制率远较同种药物在另外模型中的抑制率高。瓜蒌仁作用下随着药物质量浓度降低，抑制率呈先升后降的趋势，在质量浓度为12．5g/L时抑制率最大。桑叶作用下抑制率不随药物浓度增减而发生显著变化，均维持在较高水平（0．9324&;#177;0．014）。③四氯化碳／辅酶Ⅱ激发的脂质过氧化模型中，川芎、瓜蒌仁、桑叶作用下丙二醛生成量得到了明显的抑制（P〈0．01）。川芎和瓜蒌仁作用下随着药物质量浓度的降低，抑制率也显著下降。桑叶各质量浓度下均有较高的抑制率，并且除最高质量浓度外，呈线性相关。 结论：川芎、瓜蒌仁、桑叶在实验浓度下大多具有较好的抗氧化作用，仅桑叶在对过氧基异丙苯模型的作用稍弱。其中川芎、瓜蒌仁和桑叶在过氧基异丙苯模型和四氯化碳／辅酶Ⅱ模型中丙二醛生成量均与药物浓度有显著的量效关系，桑叶在较低浓度下又可激发活性氧的生成。在维生素C／Fe^2＋模型中，3种药物的量效关系不明显。3种药物在3．125-50g／L质量浓度内，对维生素C／Fe^2＋模型的抗氧化作用强于对另外2个模型。     

UFLC-MS/MS法测定中毒患者血清中秋水仙碱

目的:利用快速高效液相色谱-质谱联用仪(UFLC-MS/MS)建立血清中秋水仙碱的快速定性定量分析方法,为临床中毒患者的快速诊治提供依据。方法:选用Shim-pack XR-ODS色谱柱,以乙腈10 mmol/L乙酸铵为流动相,采用梯度洗脱进行分离,流速:0.3 ml/min;柱温:40℃;进样量:10μl。样品用乙腈进行蛋白沉淀后进样,多重反应监测(MRM)方式检测。结果:秋水仙碱的线性范围为0.1 ng/ml～1000 ng/ml,定量下限和最低检测限分别为0.5 ng/ml和0.05 ng/ml。日内精密度(RSD)为3.3%,日间精密度(RSD)为3.8%。结论:本法快速、灵敏,重复性好,适用于秋水仙碱中毒患者血液标本的快速定性定量检测。     

注射器负压抽吸法在小儿静脉留置针穿刺成功率中的探讨

目的 探讨不同方法在小儿静脉留置针中的穿刺成功率,减少患儿因反复穿刺造成的痛苦,减轻家长因担心穿刺困难而产生的焦虑情绪,提高治疗和抢救效率.方法 将200例患儿随机分为两组,其中观察组采用注射器负压抽吸法进行静脉留置针穿刺,对照组采用传统的静脉留置针穿刺方法,比较两组穿刺成功率.结果 采用注射器负压抽吸法的观察组与行常规法的对照组相比,穿刺成功率明显提高.观察组一次穿刺成功率为88％,对照组为75％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 观察组的注射器负压抽吸法提高了穿刺成功率,有效地保护了患儿的血管.     

红景天与葛根水提取物对微粒体LPO模型的影响

目的:探讨红景天与葛根水提物的抗氧化作用及其剂量反应关系. 方法:煎煮法制备红景天和葛根水提物. 钙沉淀法提取雄性SD大鼠肝微粒体. 采用三种激发剂Vc/Fe2 ,CHP和 NADPH-ADP/Fe2 建立微粒体脂质过氧化(LPO)模型,加入不同浓度的红景天、葛根的水提物,观察两种中药的抗氧化作用. 在Vc/Fe2 ,CHP模型中通过比色法测定对丙二醛的抑制作用,NADPH-ADP/Fe2 模型通过氧电极法测定对耗氧量的抑制作用. 结果:在Vc/Fe2 模型中,两者在浓度为6.25 mg/mL时有最大抑制率. 在CHP模型中,葛根水提物在3.13～25 mg/mL范围内其MDA含量低于对照组(P《0.05). 在NADPH-ADP/Fe2 模型中,红景天、葛根水提物的抑制率分别达到43.07%和75.09%. 结论:两种中药的水提取物都具有较强的抗氧化作用,并存在一定的剂量效应关系. 其中葛根水提物对酶参与性反应的抑制作用强于红景天水提物,而在非酶参与性反应中,红景天水提物的作用更强. 研究结果为两种中药在自由基损伤保护作用的机制提供了实验依据.     

红景天提取物对微粒体LPO模型的影响

背景与目的： 探讨红景天醇提物和水提物的抗氧化作用及其剂量反应关系。 材料与方法： 回流法和煎煮法分别制备红景天醇提物和水提物。钙沉淀法提取雄性SD大鼠肝微粒体。采用四种激发剂Vc/Fe2＋、过氧基异丙苯(Cumine hydroperoxide,CHP)、 CCl4/辅酶Ⅱ(Nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, NADP)和还原型辅酶Ⅱ(Reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate,NADPH)-腺苷二磷酸(Adenosine diphosphate,ADP)／Fe2＋建立微粒体脂质过氧化(Lipid peroxidation,LPO)模型,加入浓度为 25 mg/ml、12.5 mg/ml、6.25 mg/ml、3.13 mg/ml、1.56 mg/ml的红景天醇提物和水提物,观察在4 种模型系统中抗氧化作用。在VC/Fe2＋、CHP、 CCl4/NADP模型中通过比色法测定对丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的抑制作用,NADPH-ADP／Fe2＋模型通过氧电极法测定对耗氧量的抑制作用。 结果： 红景天水提物在浓度为6.25～25.00 mg/ml范围内,其CHP模型中的MDA含量显著低于阳性模型对照组。在 Vc/Fe2＋、CHP和CCl4/NADP 模型中,红景天醇提物和水提物各浓度组MDA含量均非常显著低于对照组,并且在一定终反应浓度内有剂量-反应关系。在NADPH-ADP／Fe2＋模型中,最高浓度的醇提物和水提物的抑制率分别达到76％和43％。 结论： 红景天的两种提取物都具有较强的抗氧化作用,并存在一定的剂量效应关系。其中红景天醇提物对酶参与性反应的作用强于水提物。该研究初步探讨了红景天抗氧化作用的机制,其结果为红景天在自由基损伤中的保护作用提供了实验依据。     

LC-M/SMS法测定人血清中西布曲明的浓度及其临床应用

目的:利用高效液相色谱-质谱联用仪(LC-MS/MS)建立血清中西布曲明的快速定性定量分析方法,为临床中毒患者的快速诊治提供依据。方法:选用Sh im-pack XR-ODS色谱柱,以乙腈-10 mmol.L-1醋酸铵为流动相,采用等度洗脱进行分离,流速:0.3 m l.m in-1;柱温:40℃;进样量:10μl。样品用乙腈进行蛋白沉淀后进样,选用3200型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。结果:西布曲明的线性范围为0.1 ng.m l-1~1000 ng.m l-1,定量下限和最低检测限分别为0.5 ng.m l-1和0.05 ng.m l-1。日内精密度RSD为3.6%,日间精密度RSD为4.0%。结论:本研究所建立的方法快速、灵敏,重复性好,适用于西布曲明中毒患者血液标本的快速定性定量检测。     

D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型肝mtDNA的改变

目的:研究D-半乳糖所致小鼠亚急性衰老模型动物肝线粒体DNA(mtDNA)的缺失改变,从分子水平观察此种动物造模后的改变,论证其可行性. 方法:每日以50 g/L D-半乳糖颈背部皮下注射,连续造模45 d,诱导亚急性衰老动物模型,应用PCR法检测实验动物mtDNA固定片段的缺失情况. 结果: D-半乳糖所致衰老模型组小鼠MDA水平显著高于对照组和青年组(P＜0.05). 模型组小鼠肝脏mtDNA发生固定片段缺失改变,β-半乳糖苷酶染色呈阳性改变,而对照组和青年组小鼠没有发生改变. 结论: D-半乳糖所致亚急性衰老模型小鼠不仅在形态学而且在mtDNA分子水平上与正常衰老小鼠基本一致.     

川芎、瓜蒌仁、桑叶提取物对肝微粒体脂质过氧化模型的影响

目的:观察川芎、瓜蒌仁、桑叶的抗氧化作用,分析其剂量效应关系。方法:实验于2005-05/06在解放军第四军医大学毒理学教研室完成。①选用二级雄性成年SD大鼠50只。动物禁食24h,处死后取出肝脏,制成匀浆。采用钙盐沉淀法制备鼠肝微粒体。②过氧基异丙苯激发的肝微粒体脂质过氧化模型:反应体系中的缓冲液为Tris/HCl(0.1mol/L,pH=7.4)与0.15mol/LKCl按1∶2的体积比配制。将制备的微粒体按照1mL/g肝湿重的比例用预冷的0.15mol/LKCl缓冲液悬浮。在模型反应体系中含缓冲液1.00mL,1mmol/L过氧基异丙苯0.15mL,微粒体悬液0.1mL和中药提取物0.15mL(川芎、瓜蒌仁、桑叶购于西安万寿路中药材市场。采用煎煮法制备3种中药水提物。粗粉加入8倍质量的水煎煮1.5h后,过滤,沉淀物再经5倍质量水煎煮1h,得水提液。得到的水提液趁热过滤,过滤液继续加热,蒸发掉水分,得到的水提膏经80℃烘干,备用,检测水分<5%。干燥器内保存)。37℃水浴15min,终止反应后离心,取上清,用硫代巴比妥酸法显色并测出吸光度,同时用不同浓度的丙二醛标准品作标准曲线,拟合标准直线方程,由此计算各组的丙二醛浓度。③维生素C/Fe2 激发的肝微粒体脂质过氧化模型:将上述的反应体系改为缓冲液0.8mL,50μmol/LFeSO40.15mL及5mmol/L维生素C0.15mL、微粒体悬液0.1mL和中药提取物0.2mL。④四氯化碳/辅酶Ⅱ激发的肝微粒体脂质过氧化模型:将上述的反应体系改为含贮备液(由0.15mol/LKCl45mL,0.10mol/LTris/HCl(pH7.4)30mL,H2O4.5mL,G-6-P127mg,5g/LG-6-PDeh30μL,辅酶Ⅱ15mg,乙酰胺500mg混合配制)2.20mL,四氯化碳/二甲基亚砜(按体积比1∶4配制)0.50mL,微粒体悬液0.30mL,中药提取物0.50mL。⑤每个模型每种药物设1个阳性对照组(n=3,只造模,未加入中药),5个质量浓度(50,25,12.5,6.25,3.125g/L),每个质量浓度设3个平行样,一个阴性对照管。以每个平行样与相应的阴性对照管吸光度(A值)之差作为该药物浓度下的A值的绝对值。根据A值求得不同剂量药物干预下丙二醛浓度和各药物在各质量浓度下对丙二醛生成量的抑制率。⑥计量资料差异比较采用单因素方差分析。结果:①过氧基异丙苯激发的脂质过氧化模型中,川芎和瓜蒌仁作用下丙二醛生成量得到了明显的抑制(P<0.01),而桑叶作用下生成量只在药物高质量浓度(50,25g/L)下受到抑制。抑制率均随药物质量浓度的降低而降低(除了川芎的最低质量浓度)。②维生素C/Fe2 激发的脂质过氧化模型中,川芎、瓜蒌仁、桑叶作用下丙二醛生成量得到了明显的抑制(P<0.01),抑制率与药物质量浓度关系不明显,且药物在该模型中的抑制率远较同种药物在另外模型中的抑制率高。瓜蒌仁作用下随着药物质量浓度降低,抑制率呈先升后降的趋势,在质量浓度为12.5g/L时抑制率最大。桑叶作用下抑制率不随药物浓度增减而发生显著变化,均维持在较高水平(0.9324±0.014)。③四氯化碳/辅酶Ⅱ激发的脂质过氧化模型中,川芎、瓜蒌仁、桑叶作用下丙二醛生成量得到了明显的抑制(P<0.01)。川芎和瓜蒌仁作用下随着药物质量浓度的降低,抑制率也显著下降。桑叶各质量浓度下均有较高的抑制率,并且除最高质量浓度外,呈线性相关。结论:川芎、瓜蒌仁、桑叶在实验浓度下大多具有较好的抗氧化作用,仅桑叶在对过氧基异丙苯模型的作用稍弱。其中川芎、瓜蒌仁和桑叶在过氧基异丙苯模型和四氯化碳/辅酶Ⅱ模型中丙二醛生成量均与药物浓度有显著的量效关系,桑叶在较低浓度下又可激发活性氧的生成。在维生素C/Fe2 模型中,3种药物的量效关系不明显。3种药物在3.125～50g/L质量浓度内,对维生素C/Fe2 模型的抗氧化作用强于对另外2个模型。