医院感染金黄色葡萄球菌的耐药性与临床分布

目的调查该院2009~2013年间金黄色葡萄球菌(SA)的耐药性与临床分布,为临床用药提供指导。方法对SA的耐药性和标本来源进行回顾性调查分析,使用ATB细菌鉴定仪及配套细菌鉴定条进行菌株鉴定,采用K-B法执行药敏试验。结果共分离到562株SA,主要来自分泌物、痰液和脓液,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)218株,占总数的38.79%。SA对青霉素的耐药率最高,其次是红霉素和克林霉素。所有菌株均对万古霉素、阿米卡星、呋喃妥因和利奈唑胺敏感。MRSA对青霉素、红霉素、复方磺胺甲噁唑、克林霉素、庆大霉素、头孢西丁、四环素和利福平的耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),二者的耐药性差异具有统计学意义(P0.05)。结论该院SA和MRSA分离率有逐年下降的趋势,但耐药状况仍然严重,万古霉素依然是临床治疗的首选药物。因此,加强SA耐药性监测,避免抗菌药物的滥用,是预防SA感染的有效措施。     

牛蛙血细胞核酸和脊髓运动神经细胞的显色观察

目的建立牛蛙血细胞核酸及脊髓运动神经细胞显色方法,更好地服务教学和临床。方法制备临时装片,用福尔根反应和甲基绿-派洛宁对细胞内的核酸进行显色,用甲苯胺蓝染液对脊髓运动神经细胞进行染色。结果福尔根反应后,细胞核呈紫红色,细胞质呈绿色。该反应的最适条件为室温水解2 min,60℃水解8 min,再室温水解2 min,复染40 s。甲基绿-派洛宁染色后,细胞核呈蓝色,细胞质呈粉红色。甲苯胺蓝染色后,脊髓运动神经细胞被染成深蓝色。结论福尔根反应中亮绿复染的最适时间为40 s。甲基绿-派洛宁能够对细胞内的DNA和RNA同时进行定位、定性分析。该研究方法对实验教学、科学研究和临床实践具有一定的理论和实际意义。     

孕晚期妇女生殖道感染病原菌分布及耐药性分析

目的：了解孕晚期妇女生殖道感染病原菌的分布及耐药性,为临床预防和治疗围生期母婴相关的细菌感染提供依据。方法回顾性分析我院产科2011年—2013年住院孕晚期妇女生殖道病原菌的微生物学资料。结果9373例孕妇中共分离到1442株病原菌,检出率为15.4%,其中真菌1156株,占80.1%,以白假丝酵母为优势菌,占真菌的59.6%;革兰阴性菌188株,占13.0%,以大肠埃希菌为主;革兰阳性菌98株,占6.8%。真菌对伊曲康唑的耐药性最强,其次是氟康唑,革兰阴性菌和革兰阳性菌对抗菌药物的耐药率因菌种不同而有所差异。结论孕晚期妇女生殖道感染病原菌以真菌为主,且对伊曲康唑的耐药率最高,临床治疗时应根据病原菌种类和耐药性结果合理使用抗菌药物。     

1株引起食物中毒事件的肠炎沙门菌定量蛋白质组学分析

目的 基于蛋白质组学,深入揭示1株引起食物中毒事件的肠炎沙门菌21A的分子特征,从而更好地防控食源性疾病的发生。方法 利用定量蛋白质组学技术对肠炎沙门菌株21A进行分析,使用Tims TOF Pro仪器在数据非依赖采集模式下采集质谱数据,利用MSstats软件完成肽段与蛋白的定量以及差异蛋白统计,并对差异表达蛋白的生物学功能进行GO、KOG功能富集、KEGG通路富集分析与CAZY注释、互作分析。结果 菌株21A中共鉴定出3183种蛋白质,其中差异蛋白300种。GO分析表明,差异蛋白主要与催化、结合、细胞内过程和代谢有关;KOG和KEGG分析显示,差异蛋白主要富集在6种代谢通路中;CAZY分析发现,37.96%的蛋白质为糖苷水解酶。结论 本研究揭示了肠炎沙门菌株21A的蛋白质组学特征,该菌株在入侵和感染过程中采用多种生存策略,包括增强毒力因子表达,增加脂质降解和诱导铁获取等。对代谢相关蛋白质的深入分析,有助于深入了解该菌的传播与感染机制,更好地防控食源性疾病的发生。     

新冠病毒Nsp1蛋白结构与功能的生物信息学分析及原核表达

目的 Nsp1是新冠病毒的主要毒力因子,介导了病毒在宿主细胞中的免疫逃逸,扩大了病毒感染范围。本研究对Nsp1进行系统生信分析及原核表达,有助于全面理解该蛋白在新冠病毒侵染宿主细胞中的分子机理。方法 采用Pfam、TMHMM、ProtScale、ExPASy和SignalP 4.0等工具对Nsp1的翻译后修饰、理化性质、跨膜螺旋、相互作用网络、同源性及进化特点等进行系统分析;利用分子克隆技术构建重组表达载体pET-22b-Nsp1并进行原核表达。结果 Nsp1由180个氨基酸组成,分子量19.78 kDa,等电点为5.36,不稳定指数28.83,在哺乳动物中的半衰期约30 h,在大肠杆菌内超过10 h,有12个可能的磷酸化位点和3个O-糖基化位点,无信号肽和跨膜螺旋,亲水性较强;二级结构分析显示,Nsp1中无规则卷曲占比最高(45.00%),其次是α螺旋(25.56%)和延伸链(20.56%),β-转角占比最低(8.89%);序列对比和进化分析显示,与SARS-CoV-2 Nsp1序列一致性最高的是蝙蝠非典型冠状病毒WIV1(85.0%);原核表达发现Nsp1主要在沉淀中表达,经质谱鉴定目的蛋白就是Nsp1。结论 本研究为新冠病毒Nsp1的表达、纯化及功能分析提供了重要借鉴,有助于进一步揭示Nsp1的生物学功能及开展相关抑制剂和抗病毒药物的研发。     

人外周血淋巴细胞染色体标本的制备研究

<正>1960年,Moorhead等建立了一套比较完整的外周血体外培养和染色体制备方法,该技术能够清晰的显示染色体数目和结构上的变化,对于常见遗传性疾病的快速诊断,提高人口素质具有十分重要的作用,对我国优生优育工作意义重大[1]。但该技术对细胞的培养时间较长,使得实验易受温度、pH、溶血和凝血等因素影响而导致失败[2]。为了临床上能高效、快速、准确地诊断遗传性疾病,有学者已经报道了该技术的一些心得     

新冠病毒受体蛋白ACE2结构与功能的生信分析及原核表达

目的：构建ACE2原核表达载体并对其进行结构与功能的生物信息学分析，探究其介导SARS-CoV-2入侵人体的分子机制。方法：采用Protparam、ProtScale、NetPhos3.1、SignaIP 4.1、YinOYang 1.2 Server、NetNGlyc 1.0 Server、SOPMA、SWISS-MODEL、Blast、Clustal X2和MEGA7.0等对ACE2的生物学特性、同源性及进化性进行系统分析。采用分子克隆技术构建pET-22b-ACE2，在大肠杆菌中进行表达。结果：ACE2全长805个残基，呈酸性，分子量为92.5 kD,pI=5.36，共含77个潜在的磷酸化位点和14个糖基化位点，是一种亲水性较强的跨膜蛋白。ACE2主要散布于内质网膜、高尔基体和胞质膜，二级结构组成以α-螺旋为主。原核表达结果显示，细菌裂解后，沉淀中ACE2表达多于上清与全菌，为疫苗研发提供了理论依据。多序列比对和进化分析显示，倭黑猩猩与智人亲缘关系最近。结论：本研究为ACE2蛋白的纯化及研究奠定了基础，有助于阐明ACE2介导SARS-CoV-2入侵人体的分子机制，对SARS-Co...