索拉非尼对耐药肝癌细胞株BEL-7402／FU逆转作用的研究

目的:研究索拉非尼对肝癌耐药细胞系BEL-7402/FU多药耐药性的逆转作用及可能机制.方法:采用流式细胞术检测罗丹明123(Rho123)的表达,免疫组化法观察细胞膜上P-gp的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因mdr1 mRNA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P-gp表达水平的变化.结果:经4 μmol/L索拉非尼处理后,增加了BEL-7402/FU对Rho123的蓄积并减缓其外排作用,使细胞表面P-gp的表达明显下降,mdr1 mRNA较用药前下降了35.4%,并可明显抑制mdr1基因蛋白产物P-gp的表达水平,比BEL-7402/FU细胞减少14.3%.结论:索拉非尼可以抑制mdr1基因蛋白产物P-gp的表达,增加细胞内化疗药物的浓度,从而逆转了肝癌细胞的多药耐药性.     

血卟啉衍生物对人食管癌细胞体外光动力疗法效应影响的实验研究

目的：探讨血卟啉衍生物（hematoporphyrin derivative，HPD）孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）效应的影响。方法：以不同浓度HPD孵育Eca-109细胞，并给予不同孵育时间（2、4、12、24h），在30J／cm^2（光源采用DIOMED630PDT系统）饱和光能量密度下行PDT，24h后通过MTT法检测细胞生存率。结果：除孵育时间为2h外，其余3个孵育时间（4、12、24h）不同孵育浓度间的细胞生存率差异有统计学意义（P〈0．05）。对于同一孵育浓度下不同孵育时间的细胞生存率，当孵育浓度〉0．75μg／mL时，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：特定光源和饱和光能量密度下，HPD的孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞依外PDT教应影响显著．     

人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人树突状细胞（hDCs）信号传导通路抑制因子1（SOCS1）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体。方法根据人树突状细胞SOCS1基因（NM-0037）,筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）（含U6启动子和EGFP）连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及Westernblot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。     

PTEN 与 p53在鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨PTEN基因缺失和p53基因突变在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法：本实验以50例鼻咽癌标本作为病例组,以50例正常子鼻咽部组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测二组中PTEN和p53的表达,分析其不同临床病理特征中的意义及对预后的判断价值。结果：病例组PTEN阴性24例,对照组阴性0例,两组比较差异有显著的统计学意义（P＜0．01）,Ⅲ期和Ⅳ期以及有淋巴结转移的患者PTEN 阴性比例明显高于PTEN 阳性患者,差异有有显著的统计学意义（ P＜0．01）,病例组PTEN阳性38例,对照组阳性22例,两组比较差异有显著的统计学意义（P＜0．01）,有淋巴结转移的患者p53阳性比例明显高于p53阴性患者,差异有有显著的统计学意义（ P＜0．01）。结论：PTEN基因缺失和p53基因突变与鼻咽癌发生和发展密切相关。     

广东地区汉族人MBL基因启动子区SNP的研究

目的 研究广东汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子单核苷酸多态性(SNP)。方法 抽提人外周血白细胞基因组DNA，建立SSP-PCR及分子灯塔实时荧光PCR技术，检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G／C，称H／L等位基因)、-220(G／C，X／Y等位基因)和 4(C/T，P／Q等位基因)，分析其单倍型及基因型频率。结果 从167人中检出等位基因型LYP／LYP10例(5．9％)、HYP／LYQ7例(4．2％)、LYP／LYQ94例(56．3％)、LXP／LXP6例(3．6％)、LYQ／LYQ4例(2．4％)、LXP／LYQ29例(17．4％)、HYP／LYP3例(1．8％)、HYP／LXP2例(1．2％)、HYP／HYP12例(7．2％)。结论 广东地区汉族人群MBL基因启动子区SNP等位基因型以LYP／LYQ和LXP／LYQ为主。     

光卟啉对Eca-109细胞的体外光动力效应

目的探讨光卟啉不同孵育浓度和不同孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外光动力治疗(pho-todynamic therapy,PDT)效应的影响。方法以不同浓度光卟啉孵育Eca-109细胞,并给予不同孵育时间(4,6,12,24h)(光源采用DIOMED630PDT系统)后于饱和光能量密度20J/cm2下行PDT,24h后通过MTT法检测细胞生存率。结果光卟啉4种不同孵育时间和不同孵育浓度间生存率差异均有显著性(均P<0.01)。同一孵育时间下不同浓度间的生存率差异均有显著性(均P<0.01),而同一浓度下不同孵育时间之间的生存率,则除了浓度为0μg/ml和0.1μg/ml外差异均有显著性(均P<0.05)。结论特定光源下,光卟啉的孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外PDT效应影响显著。     

胃粘膜HBV感染及其对消化性溃疡愈合的影响

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)胃粘膜感染及其对消化性溃疡(PU)愈合的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR) 技术检测62 例PU病人胃粘膜组织的HBVDNA及幽门螺杆菌(HP) ,用雷尼替丁、果胶铋、四环素、甲硝唑四联药物治疗4 周。结果:PU 病人胃粘膜HBVDNA 检出17 例(27.41 %) ,HP 检出35 例(56 .45 %) 。HBV感染组PU 治愈率47 .06 %(8/17) ,无HBV感染组PU治愈率82.22% (37/45),两组疗效比较(χ2 检验)P< 0.05。结论:HBV可侵犯胃粘膜,对PU 的愈合有影响     

人食管癌荷瘤裸鼠光动力效应机制的初步研究

目的 探讨光动力治疗(photodynamictherapy,PDT)对人食管癌细胞Eca-109荷瘤裸鼠的作用机制.方法 通过皮下接种Eca-109细胞建立人食管鳞癌荷瘤裸鼠模型,并将其随机分为血卟啉衍生物(Hematoporphyrin derivative,HpD)光动力治疗组(给予HpD及光照),单纯照光组(仅给予光照),单纯光敏剂组(仅给予HpD)及空白对照组.腹腔注射HpD24h后前两组行光照(光能量密度为120J/cm~2),3d后处死所有裸鼠并检测瘤组织丙二醛(MDA)含量,免疫组化检测caspase-3并HE染色观察.结果 HpD-PDT组与空白对照组.单纯照光组,单纯光敏剂组的MDA含量相比均显著增高(P<0.01),而后3组之问MDA含量均无明显差异(P>0.05).HpD-PDT组与空白对照组闻caspase-3蛋白阳性率无明显差异(P>0.05).光镜下,HE染色仅HpD-PDT组可见大片均质红染的坏死物.结论 HpD-PDT对人食管癌荷瘤裸鼠的作用机制主要是通过光照产生单态氧直接损伤肿瘤细胞并在过氧化反应中产生MDA.其凋亡途径中caspase-3可能未激活,即其凋亡途径可能是不依赖caspase-3通路的.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of photodynamic therapy (PDT) in nude mice bearing human esophageal cancer cell line Eca-109 xenografts. Methods A nude mouse model bearing human esophageal carcinoma was established by subcutaneous transplantation of Eca-109 cells. The mice were then randomized into 4 groups, namely hematoporphyrin derivative (HpD)-PDT group (given HpD and laser irradiation), exclusive laser irradiation group, exclusive HpD group and blank control group. In HpD-PDT group, the mice were exposed to irradiation at the light energy density of 120 J/cm~2 delivered via a DIOMED 630 PDT system 24 h after intraperitoneal HpD injection, and the mice in exclusive laser irradiation group received only laser irradiation. Three days later, all the nude mice were sacrificed for determination of malondialdehyde (MDA) production, immunohistochemistry for caspase-3 protein and HE staining of the tumor tissue. Results The MDA level was significantly higher in HpD-PDT group than in the other 3 groups (P<0.01), and comparable between the latter 3 groups. Expression of caspase-3 protein was similar between HpD-PDT group and the blank control group (P>0.05). Under light microscope, HE staining visualized massive tissue necrosis in HpD-PDT group with homogeneous red staining. Conclusion In human esophageal carcinoma xenografts in nude mice, HpD-PDT generates singlet oxygen to result in direct tumor cell damage and cause MDA production. Caspase-3 may not be activated in the apoptotic pathway, suggesting that this pathway may not be caspase-3-dependent.     

人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及Westernblot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。