黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化检测

目的研究黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化状态,探讨其作为肝细胞肝癌(HCC)肿瘤标志物的可行性。方法利用重亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析HCC细胞株HepG2和健康对照者来源白细胞基因组中MAGE-A3基因5′端CpG岛异常甲基化状态,寻找HCC细胞MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点。结果 HepG2细胞和健康对照者来源白细胞基因组MAGE-A3 5′端CpG岛存在不同的甲基化状态,前者存在特异性去甲基化位点。结论 MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点的检测可用于HCC的早期诊断。     

8精氨酸加压素_(4-9)肽对衰老脑突触体氨基酸掺入的影响

本文采用分离实触体体外摄取的方法研究8精氨酸加压素_(4-9)(AVP_(4-9))肽片段对青年(3月龄)和衰老(27月龄)大鼠脑的突触体氨基酸掺入和蛋白质合成的影响。结果显示,衰老时海马、额叶和颞叶皮质突触体的~3H—亮氨酸摄取明显减少(P<0.01),AVP_(4-9)肽能够促进上述脑区的突触体的亮氨酸摄取能力,以海马的突触体对AVP_(4-9)肽的反应最强,AVP_(4-9)肽对老年鼠各脑区的促进作用较青年鼠减弱,提示AVP_(4-9)肽对老年性神经精神疾病记忆损害的潜在治疗作用可能与其提高突触体的活性及增加蛋白质合成能力有关。     

TrkAsiRNA表达载体构建及对TrkA基因表达的抑制

目的　构建具有特异阻断TrkA基因功能的siRNA表达系统 ,为前列腺癌基因治疗提供新的方法。方法　根据Genbank提供的TrkA基因mRNA序列 ,应用设计软件设计特异性的短链寡核苷酸 ,化学合成后经退火形成双链DNA片段 ,克隆到pSlincerTM2 1 U6载体中 ,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切和序列测定对重组体进行鉴定 ,最后将构建的表达载体转染前列腺癌细胞株 ,观察对TrkA基因表达的影响。结果　酶切和序列测定表明 ,成功构建了siRNA表达载体 ,能够抑制细胞内TrkA基因表达。结论　本研究构建的siRNA表达载体 ,具有阻断TrkA基因的表达的功能 ,为前列腺癌基因治疗提供新的有效的方法。     

人乳头瘤病毒基因分型方法的建立和应用

目的 建立一种简便快捷、灵敏度高、经济实用的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的低密度基因芯片技术,并对该方法进行评价.方法 用低密度基因芯片技术对355例疑似HPV感染女患者检测HPV并分型;用杂交捕获Ⅱ代(HCⅡ)法进行评价.并用该法对珠江三角洲地区的730例标本进行HPV分型检测.结果 355例疑似样本中,低密度基因芯片技术和HCⅡ法分别检出211例(59.4%)和222例(62.5%)阳性标本,符合率达94.1%(334/355).低密度基因芯片技术共检测出15种常见高危型和5种低危型,其中16、52、58、56型检出率较高.结论 低密度基因芯片技术能具体分型和检测混合感染,HPV检测与细胞学检测结合.对宫颈癌筛查有重要意义.     

消化道症状儿童白细胞介素-1基因簇多态性与幽门螺杆菌感染的研究

目的 分析探讨儿童白细胞介素-1(IL-1)基因簇多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染间的相关性.方法 随机选取128例消化道疾病患儿的胃黏膜标本.IL-1B-31,IL-18-511 SNP位点多态性使用实时定量聚合酶链(real-time PCR) 双色荧光探针法检测,IL-IRN的可变重复序列使用传统PCR方法检测.Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用Real-time PCR检测,用PCR扩增另-高毒力基因cagA羧基端EPIYA基因序列所在区,然后测序确定其亚型.结果 所研究的患儿中IL-1B-31T与IL-1B-511C完全连锁.未检测到H.pylori及其高毒力亚型感染与IL-1-511/-31SNP及IL-1RN基因多态性之间的相关性.结论 IL-1基因簇多态性不是广州地区儿童H.pylori感染的独立影响因素,它可能与其他因素共同影响着儿童H.pylori的感染.     

原癌基因HCCR mRNA、FBI-1 mRNA在肝癌相关患者血液中的表达及意义

【目的】探讨原癌基因HCCRmRNA、FBI－1mRNA在肝癌相关患者血液中的表达及其与临床指标的关系。【方法】采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术,检测41例肝细胞癌、3例肝硬化患者术前血液标本及10例健康者血液标本中HCCRmRNA、FBI—1mRNA含量,分析其与临床指标的关系。【结果】肝细胞癌患者血液中HCCRmRNA、FBI－1mRNA水平高于肝硬化患者,健康者血液中未发现两基因的mRNA表达。同时发现,血液中FBI－1mRNA与甲胎蛋白（AFP）水平显著相关（P〈0．01）,FBI－1mRNA与HCCRmRNA的表达水平显著相关（P〈0．01）。【结论】肝细胞癌、肝硬化患者血液中HCCRmRNA、FBI－1mRNA表达异常增高,FBI－1mRNA表达与AFP水平显著相关。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

神经生长因子在老年痴呆动物模型中的作用

将老年大白鼠(24个月)左侧海马繖部分切断,建立基底前脑胆碱能损害的老年痴呆动物模型。予侧脑室注射神经生长因子(NGF),分别在用药后15天和30天测隔区和海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性。以正常鼠组和细胞色素C注射组作为对照。损害后隔区和同侧海马ChAT活性显著减少;NGF15天治疗组,隔区和损害对侧海马酶活性显著增加,是正常组的130％;30天治疗组,同侧海马酶活性比细胞色素C组增加48％。结果表时,NGF对老年鼠基底前脑胆碱能系统损害的治疗是有效的。本文还讨论了NGF在损害后急、慢性期的作用机制。