正常和腺样囊性癌涎腺中赖氨酸18位点乙酰化组蛋白H3表达的研究

目的探讨赖氨酸18位点（lysine 18 site,lys18）乙酰化组蛋白H3（acetyl-histone H3）在涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）和正常涎腺中表达的意义。方法免疫组织化学Envision二步法检测60例ACC和49例正常涎腺中lys18乙酰化组蛋白H3的表达,分析其与ACC发生部位、组织学分级、临床分期、神经侵犯等肿瘤临床病理特征的关系。结果正常涎腺中导管细胞、腺泡细胞以及ACC肿瘤细胞中均有lys18乙酰化组蛋白H3阳性表达,表达位于细胞核。但lys18乙酰化组蛋白H3在ACC中的表达显著低于正常涎腺（χ2=46.745,P=0.000 1）,且其表达与ACC的临床病理特征没有相关性（P〉0.05）。结论组蛋白H3 lys18低乙酰化可能与ACC的肿瘤发生有关。     

DNMT1干扰对唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M E-cadherin表达的影响

目的：建立DNA甲基转移酶1（DNMT1）表达稳定抑制的唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M,探讨DNMT1表达抑制对ACC-M细胞E-cadherin表达的影响。方法：设计靶向干扰DNMT1的shRNA序列,构建携带该序列的慢病毒载体并转导ACC-M细胞,对筛选出的抗性克隆采用RT-PCR、荧光定量PCR、免疫印迹方法分别检测DNMT1mRNA、蛋白质水平,筛选获得DNMT1表达稳定抑制的ACC-M细胞,并通过甲基化特异性PCR检测E-cadherin基因启动子的甲基化状态,荧光定量PCR检测E-cadherin的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果：筛选获得DNMT1稳定表达抑制的ACC-M细胞,其mRNA、蛋白相对表达水平（0.156±0.008,0.163±0.013）显著低于空白对照组和空载对照组。进一步检测发现,E-cadherin基因启动子甲基化水平明显降低,E-cadherinmRNA表达水平显著增高,P〈0.05。结论：shRNA慢病毒载体介导的RNA干扰能够有效、稳定地抑制ACC-M细胞DNMT1的表达,并降低ACC-M细胞E-cadherin基因启动子的甲基化水平,从而使E-cadherin基因表达增强。     

曲古抑菌素A对腺样囊性癌细胞ACC-2增殖及p16INK4a启动子区甲基化、mRNA表达的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）对人唾液腺腺样囊性癌细胞ACC-2增殖的影响，并分析其对p16m基因启动子区甲基化及mRNA表达的影响。方法：50—800nmol/L范围内不同浓度的TSA作用于体外培养的ACC-2细胞．采用MTT法检测细胞生长抑制率，观察细胞形态变化。应用甲基化特异性PCR（methyla tionspecific PCR，MSP）、反转录PCR（reverse transcrilotionPCR，RT—PCR）和实时定量PCR（real—timePCR）分析不同时间（2、4、8、16、24h）100nmol／L TSA处理前、后ACC-2细胞中p16^INK4a基因启动子区甲基化及p16^INK4a mRNA表达的变化。采用SAS6．12软件包对数据进行t检验。结果：TSA在50nmol／L浓度即能有效抑制ACC-2细胞的增殖（P〈0．05），并使细胞形态发生明显改变，抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。100nmol／L TSA处理ACC-2细胞2—16h后，p16^INK4a基因启动子区甲基化消失；处理2之4h后，p16^INK4a mRNA表达显著增高。结论：TSA可能通过改变组蛋白乙酰化的水平影响p16^INK4a基因启动子区甲基化的水平，使p16^INK4a基因表达升高，影响细胞周期，从而有效抑制ACC-2细胞的生长。     

唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达

目的：探讨唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系。方法：甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC—M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH—1、MyoD1基因的甲基化：RT—PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测。结果：3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化：ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC—M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC—M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达。结论：ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MvoD1基因失活的主要机制．CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关．     

组蛋白乙酰化与头颈部恶性肿瘤

本文简介了组蛋白乙酰化和去乙酰化的机制,并就组蛋白乙酰化对头颈部恶性肿瘤细胞中与不同信号转导通路有关的基因、蛋白表达的影响,以及头颈部恶性肿瘤的乙酰化状况和组蛋白去乙酰化酶抑制剂对头颈部恶性肿瘤细胞的生长抑制作用作一综述.     

过量氟对大鼠切牙牙本质涎蛋白mRNA表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)mRNA表达的影响。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组常规饲料喂养,自由饮用蒸馏水;实验组常规饲料喂养,自由饮用氟离子浓度为100 mg/L的氟化水,建立大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,提取大鼠切牙组织总RNA,逆转录为cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术观察过量氟对大鼠切牙中DSP mRNA表达的影响。结果实时荧光定量聚合酶链反应结果显示DSP mRNA在实验组表达水平明显高于对照组表达水平(t=2.132,P<0.01)。结论过量氟可能通过增强DSP mRNA的表达,影响牙本质的发育矿化。