牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MCP-1的影响

目的: 探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)脂多糖对小鼠成骨细胞表达单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)mRNA和蛋白的影响,以及是否有p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路和核因子κB（Nuclear Factor-κB, NF-κB）信号通路的参与。方法: 以不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞24 h;以20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于细胞不同时间（0~48 h）后,采用实时反转录PCR和酶联免疫吸附测定检测MCP-1mRNA和蛋白的表达。采用p38MAPK抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂BAY11-7082分别预处理细胞1 h,检测其对P.endodontalis脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后MCP-1mRNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果: 不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖（0~50 mg/L）刺激MC3T3-E1细胞后,MCP-1的mRNA表达和蛋白分泌呈剂量依赖性;观察时间内（0~48 h）,20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于MC3T3-E1细胞后,MCP-1 mRNA的表达和蛋白分泌呈时间依赖性;10 mol/L的SB203580和BAY11-7082分别预处理细胞1 h,可以降低P.endodontalis脂多糖诱导MCP-1 mRNA的表达,且SB203580的抑制作用强于BAY11-7082。结论: P.endodontalis脂多糖可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路诱导成骨细胞表达MCP-1mRNA和蛋白。     

TNF-α在慢性根尖周炎骨破坏中的机制探讨

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是否诱导成骨细胞产生肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及TNF-α是否通过核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路上调巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)的产生.方法:以不同浓度P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞和以10 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0～24 h)后,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TNF-α mRNA的表达;以不同浓度TNF-α(0～ 10 ng/L)刺激MC3T3-E1细胞后,采用RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测M-CSF mRNA和蛋白的表达;再以ELISA方法检测BAY 11-7082对TNF-α刺激MC3T3-E1细胞后M-CSF蛋白表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:不同质量浓度的P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞后,TNF-α mRNA的表达具有剂量依赖性;10 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-E1细胞6h时,TNF-α mRNA的表达量最大.随着作用时间的延长,TNF-α mRNA的表达量逐渐下降;不同质量浓度TNF-α(0～10 ng/L)刺激MC3T3-E1细胞后,M-CSF mRNA和蛋白的表达具有剂量依赖性,蛋白表达量从(37±2) ng/L(空白对照组)增加到(301±8) ng/L(10 ng/L组);10 mol/L BAY 11-7082预处理1h可以降低TNF-α诱导成骨细胞M-CSF蛋白的表达水平,蛋白表达量从(253±14) ng/L(TNF-α组)下降到(154±2)ng/L(BAY+TNF-α组),而单独使用BAY 11-7082组与空白对照组相比差异无显著性.结论:P.e-LPS诱导成骨细胞产生TNF-α,而TNF-α上调M-CSF可能通过NF-κB信号通路,这意味着TNF-α可能在P.e-LPS致慢性根尖周炎骨破坏中对成骨细胞发挥自分泌作用.     

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根管冲洗对根管的消毒和清理起着重要作用,冲洗液可以通过冲洗碎屑、溶解组织和消毒根管系统而提高机械预备的效力。次氯酸钠（NaClO）是目前世界范围内临床上使用最广泛的根管冲洗液之一。本文就NaClO的作用及相应机制、提高使用效率的方法、不良反应、与其他冲洗液联合应用等方面做一综述。     

白藜芦醇通过上调SOCS-3蛋白抑制脂多糖诱导的成骨细胞表达MIP-2

目的: 探讨白藜芦醇是否依赖细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3）蛋白发挥对牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,P.e）脂多糖( lipopolysaccharides, LPS)诱导成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白2(macrophage inflammatory protein-2,MIP-2) mRNA的抑制作用。方法: 以不同浓度的白藜芦醇（0、5、10和20 μmol/L）诱导MC3T3-El细胞和以20 μmol/L 白藜芦醇作用于细胞不同时间（0、10、30、60、120和180 min）后,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SOCS-3蛋白的表达。SOCS-3的siRNA（si-SOCS-3）和对照siRNA（si-control）转染成骨细胞后,以实时反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western 印迹法检测SOCS-3沉默效率;在有或无白藜芦醇预处理转染细胞1 h后,用20 μg/mL P.e-LPS刺激MC3T3-E1细胞24 h,实时RT-PCR检测MIP-2 mRNA的变化。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果: 不同浓度白藜芦醇诱导MC3T3-El表达SOCS-3蛋白具有剂量依赖性;在所观察的180 min内,20 μmol/L 白藜芦醇作用成骨细胞60 min时,SOCS-3蛋白表达量最大。si-SOCS-3对SOCS-3 mRNA的沉默效率是63.7%,转染si-SOCS-3后,增加LPS诱导成骨细胞产生MIP-2 mRNA,并且削弱白藜芦醇对MIP-2 mRNA表达的抑制作用。结论: 白藜芦醇通过上调SOCS-3蛋白,抑制P.e-LPS诱导成骨细胞表达的MIP-2 mRNA。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶1、2表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞ERK1/2和p38表达的影响。方法:用10μg/mL的P.e-LPS分别作用于成骨细胞0、5、15、30、60、180 min,应用蛋白质印迹技术检测成骨细胞内磷酸化ERK1/2和p38表达水平的变化。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:10μg/mL的P.e-LPS刺激后,成骨细胞内p38迅速被活化,5～30 min为激活高峰(P<0.01),60 min后基本恢复至正常水平;ERK1/2磷酸化水平在P.e-LPS刺激5 min后明显增加,15 min后磷酸化水平最高(P<0.01),30 min后磷酸化水平下降。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的p38和ERK1/2蛋白表达增强,Pe-LPS可能通过p38和ERK1/2对成骨细胞发挥作用。     

白藜芦醇通过SOCS-1蛋白抑制牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导的氧化应激反应

目的 探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对小鼠成骨细胞MC3T3-E1氧化应激（oxidative stress,OS）损伤的保护作用及作用机制。方法 RES及LPS刺激细胞后,荧光显微镜及流式细胞术检测细胞内活性氧水平;Western 免疫印迹法检测细胞内细胞因子信号转导抑制因子（suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1）蛋白表达水平。建立SOCS-1瞬时转染细胞系,利用荧光显微镜及流式细胞术分别观察转染后的细胞内活性氧水平。采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析。结果 LPS组与空白组相比,细胞内氧化应激程度显著提高,LPS+RES组氧化应激程度显著低于LPS组（P<0.05）。10 mg/L P.e-LPS刺激30 min后,细胞内SOCS-1开始升高。SOCS-1转染后,LPS+RES组细胞内氧化应激程度显著高于未转染细胞内氧化应激水平（P<0.05）。结论 白藜芦醇通过调节SOCS-1蛋白,减轻LPS引起的小鼠成骨细胞氧化应激水平,从而发挥保护作用。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达IL-34mRNA的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)mRNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与.方法:以不同浓度P.e-LPS(0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0～24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 mRNA的表达.以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对Re-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 mRNA表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:不同浓度P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 mRNA的表达具有剂量依赖性.20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 mRNA的表达量最大;48 h时,IL-34 mRNA的表达量有所下降.10 mol/LBAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 mRNA的表达水平.50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 mRNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 mRNA的表达.结论:Re-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 mRNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路.     

白藜芦醇对牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导成骨细胞产生MIP-2的影响

目的 研究牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,P.e）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）影响成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白2（macrophage inflammatory protein-2,MIP-2）mRNA和蛋白分泌的作用,以及白藜芦醇对P.e-LPS诱导分泌MIP-2产生的抑制作用。方法 以不同剂量的P.e-LPS (0~50 mg/L)作用于MC3T3-El细胞,并以20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞不同时间(0~48 h),采用实时反转录PCR(real-time RT-PCR)和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MIP-2 mRNA和蛋白的表达;采用ELISA方法检测白藜芦醇对20 mg/L P.e-LPS 刺激MC3T3-El细胞24 h后MIP-2 蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果 当不同剂量P.e-LPS (0~50 mg/L) 刺激MC3T3-El细胞时,MIP-2 mRNA 的表达和蛋白的分泌随剂量的提高而升高;其中,蛋白表达从（41.86±2.49）ng/L升高到（3126.74±158.30）ng/L,差异显著（P<0.05）。在观察时间内（0~48 h）,20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后,MIP-2 mRNA 的表达和蛋白的分泌随时间的延长而增高,48 h时蛋白表达量最高,为（2102.55±123.27）ng/L（P<0.01）。10 mol/L 白藜芦醇预处理细胞1 h,可抑制P.e-LPS诱导的MIP-2 蛋白的表达,蛋白水平从（1805.33±67.54）ng/L降低到（813.82±47.21）ng/L,差异显著（P<0.01）。结论 P.e-LPS 可诱导成骨细胞表达和分泌MIP-2,白藜芦醇对P.e-LPS诱导的MIP-2蛋白分泌发挥抑制作用。     

Wnt5a在慢性根尖周炎病损中的表达及临床意义

目的检测慢性根尖周炎根尖病损区Wnt5a的水平与细胞定位,探讨Wnt5a与炎症细胞浸润程度的关系,以及Wnt5a在慢性根尖周炎发展中的作用及意义。方法选取10例慢性根尖周炎牙作为实验组,根据根尖区组织的H-E染色,依炎症细胞浸润程度将病例组分为轻中度组、重度组。5例因正畸需要而拔除的健康牙作为对照组。采用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测样本Wnt5a的表达;免疫组织化学法检测样本中Wnt5a蛋白的表达,应用图像分析软件检测Wnt5a蛋白表达水平,分析Wnt5a表达高低与炎症程度的关系。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果Wnt5a在实验组与对照组均有表达,实验组中Wnt5a mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,重度炎症组Wnt5a的表达水平显著高于对照组(P<0.01);轻中度组Wnt5a的表达水平显著高于对照组(P<0.05);重度炎症组中Wnt5a的表达水平显著高于轻中度炎症组(P<0.05)。结论Wnt5a与慢性根尖周炎的炎症程度相关,可能参与了病变的始动过程,推测Wnt5a在慢性根尖周炎的发生、发展中起着一定作用。