HBV转基因小鼠在乙型肝炎研究中的应用

转基因动物技术是本世纪８０年代初发展起来的一项生物技术。随着转基因技术的不断改进，至今已研制出百余种人类疾病转基因动物模型，并被广泛用于生物医学各领域，尤其在传染病、遗传病和肿瘤等方面。这些动物模型为人类疑难疾病研究提供有效手段。乙型病毒性肝炎（以下...     

Fah~(-/-)小鼠对NTBC的药物依赖性观察

目的观察Fah-/-小鼠对NTBC的药物依赖性,更详尽的掌握该模型的生物学特征,使该模型得以更有效的利用。方法 Fah-/-小鼠NTBC停药后,观察小鼠体重变化、生存状态、生存时间,定期取样记录血清学和肝脏病理学变化。结果 NTBC停药后,Fah-/-小鼠体重进行性下降,活力降低,5~7周死亡,期间伴随着ALT、AST等血清指标的升高及肝细胞严重变性及大量坏死。结论 Fah-/-小鼠需终身服用NTBC,依赖性强,停药会出现严重肝损伤,表明该模型是研究酪氨酸血症Ⅰ型和其他肝损伤的理想模型。     

利用人脐带血干细胞制备人鼠肝组织嵌合体模型

目的利用人脐带血干细胞研究制备HBV感染人鼠嵌合小鼠模型。方法将人脐血干细胞,经尾静脉分两次注射到裸鼠体内。分别于第7,14,21天取肝组织,进行AFP免疫组织化学检测,分析人肝细胞在裸鼠体内嵌合生长情况,并进行乙肝病毒感染实验,定量检测感染后小鼠血清中AFP、ALB。结果实验组小鼠在第7、14、21天肝脏内AFP持续阳性表达,AFP表达于细胞质内。HBV感染后小鼠肝脏HBsAg组化显示密集成片的阳性细胞。实验组和对照组表达差异显著(P<0.05)。结论将人脐血干细胞移植裸鼠肝脏内可以存活并分化成人肝细胞形成嵌合鼠,并能被HBV感染。     

HBV转基因小鼠免疫耐受状态的研究

研究ＨＢＶ转基因小鼠免疫耐受状态机制。以正常ＩＣＲ小鼠为对照 ,检测转基因小鼠脾树突状细胞 (ＤＣ)表面Ｉａ(ＭＣＨ Ⅱ )和ＣＤ80 (Ｂ7)表达水平及其免疫功能 ;脾及外周血Ｔ淋巴细胞表面ＣＤ8和ＣＤ2 8及肝细胞膜上ＭＨＣ Ｉ和腹腔巨噬细胞ＭＨＣ Ⅱ抗原表达情况。结果发现 ,ＨＢＶ转基因小鼠ＤＣ表面ＭＨＣ Ⅱ及ＣＤ80表达水平 ( 13.34± 1.11及 12 .2 4± 1.31)明显低于对照组 ( 2 0 .4 7± 1.78及 15.83± 1.52 ,Ｐ <0 .0 5) ;其ＤＣ体外诱发Ｔ淋巴细胞增殖能力 ( 640 9.67ｃｐｍ± 4 4 5.71ｃｐｍ)明显低于对照组 ( 13870 .67ｃｐｍ…     

复制型HBV转基因小鼠的建立与应用

尽管有了有效的疫苗,但乙肝病毒(HBV)感染依然是全球性公共卫生问题,在我国形势尤为严峻。由于HBV的自然宿主仅限于人和黑猩猩,现有的模型都有不同的缺陷,因此关于其生物学及治疗方法研究的诸多问题依然没有解决。复制型HBV转基因小鼠模型的建立,极大地提高了我们对HBV生活史、免疫生物学和肝脏病变的免疫发病机制的认识。本文简要介绍国际上由Francis V.Chisari实验室和国内由本实验室建立的复制型HBV转基因小鼠,以及利用该模型开展抗病毒药物和乙肝发病机制的研究工作。     

YMDD突变株HBV转基因小鼠的制备及检测

目的建立YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠,为乙肝防治研究提供转基因动物模型。方法采用受精卵显微注射法,将带有YMDD突变的对拉米夫定有耐药性的1.3拷贝HBV基因注入FVB/N单细胞受精卵的原核内,制备YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠。采用PCR检测外源基因的整合和传代情况,采用ELISA和免疫组化等方法检测HBsAg在肝、肾中的复制和表达情况。结果注射受精卵3401枚,产269只F0代仔鼠,PCR阳性33只,外源基因的整合率12.3%。9只转基因鼠血清HBVDNA弱阳性,拷贝数低于103拷贝/ml;免疫组化结果显示肝组织和肾组织均有HBsAg表达,且肾组织中的表达强于肝组织。经传代产下47只F1代转基因鼠,目的基因PCR阳性率为27.6%,且肝组织和肾组织中HBsAg均有表达,分布特性与F0代一致。结论成功制备出体内有复制表达而且可以传代YMDD耐药突变株HBV的转基因小鼠。     

慢病毒载体介导的肝细胞基因转移

慢病毒（lentivirus）具有可以感染低分裂细胞的独特优势，且基因转移效率高，操作相对简便，在多种疾病的基因治疗、转基因动物的制备等方面成为引人瞩目的病毒载体。本文就慢病毒载体（lentiviral vector，LV）的特点、构建、应用，尤其是慢病毒载体对于肝细胞的基因转移进行综述。     

洋地黄与钙剂并用治疗新生儿心力衰竭伴低钙血症一例

病历摘要患儿,男,20天。因呛咳,吐奶,轻度烦躁,呼吸促一周入院。第二胎足月顺产,出生体重3000克。一分钟阿氏评分7分;五分钟评分9分。混合喂养。入院体检:呼吸60次,心率156次,神清,唇周轻度发绀,双肺呼吸音略粗,胸骨左缘2～5肋间可闻Ⅲ极收缩期吹风样杂音,尤以4肋间为明显,杂音可放射至腋中线。肝剑下1cm,肋下0.5cm,脾未及,血钙9mg/dl,胸片提示肺炎,心影无增大。住院后氨苄青霉素静注2次/日,输父血30ml和一般支持治疗。住院第五天,病情突然转重,呼吸104～114次,心率202～204次,颜面轻度浮肿,面色口唇紫绀,烦躁,低声呻吟,呼吸急促,三凹征明显,心音低钝,肝剑下2cm,肋下2.5cm。即静注西地兰0.04mg及安定2mg,数分钟后安睡。约20分钟测呼吸78～84次,心率180～184次。面色唇周转     

乙型肝炎病毒转基因小鼠树突状细胞提呈功能的初步研究

目的;探讨HBV转基因小鼠树突状细胞（DC）功能与其免疫耐受状态的相羞生。方法：按改良Steinman方法,对正常非转基因小鼠和HBV转基因小鼠脾脏树突状细胞进行分离,DC经HBeAg预刺激后,再用此DC与ConA共刺激淋巴细胞增殖反应。结果：HBV转基因小鼠的DC细胞数为10^2／孔、10^3／孔、10^4／孔,分别刺激各组小鼠淋巴细胞时,HBV转基因小鼠及非转基因小鼠的淋巴细胞^3H-TdR掺入量均显著低于对照组。结论：提示HBV转基因小鼠的DC提呈功能低下。     

D-氨基半乳糖与脂多糖对小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

摘要：目的观察部分肝切除联合D-氨基半乳糖（D-GaIN）、脂多糖对肝损伤后再生修复的影响。方法40只BALB/c雄性小鼠随
机均分为2组。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组：腹腔注射D-GaIN（500 mg/kg）, 1 h后注射脂多糖（50 μg/kg）;肝脏部分切除
组：生理盐水代替D-GaIN和脂多糖,同样方法注射;两组小鼠在第2次腹腔注射24 h后行肝脏1/3 切除。观察两组小鼠术后肝
脏体质量比值、肝再生率、肝细胞损伤、增殖与肝卵圆干细胞增生。结果肝脏部分切除组术后第9天肝大体结构基本恢复正常,
肝再生率为（22.26±105.93）%,而D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组第14天肝质量较术前仍偏小,肝再生率为(9.49±32.55)%,P<
0.001。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组术后肝窦和中央静脉充血,库普弗细胞增多;肝脏部分切除组术后第7天有明显肝细胞
增殖,D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝细胞增殖甚少。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝脏术后第3 天开始出现肝卵圆干细
胞增生,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤。结论D-GaIN联合脂多糖可部分抑制肝部分切除后小鼠成熟肝细胞增殖,
D-GaIN/脂多糖/肝部分切除可诱导肝卵圆干细胞增生。