改进洗血仪程序用于制备冰冻红细胞

目的研究洗血仪用于红细胞甘油化的可行性。方法将洗血仪用于制备冰冻红细胞的甘油化操作,探索其甘油保存液悬挂高度、连通管口径对甘油滴注速度的影响及振荡频率与手工法甘油化一致的条件,并观察冰冻红细胞质检指标及临床输用效果。结果溶血率、回收率、游离Hb、甘油残余量等指标均达到手工法甘油化的质检标准,临床应用效果满意。结论洗血仪新增程序完全可以替代手工法甘油化。     

Sephadex—G50微柱凝胶血型试剂的研制和应用

目的 研制卡式微柱凝胶血型试剂并应用于血型血清学试验。方法 以Sephadex-G50超细凝胶为分子筛载体，制备成中性微柱凝胶试剂卡、特异性凝胶试剂卡及coomb’s凝胶试剂卡并用于血型鉴定、配血试验、抗体筛选和鉴定，对1000名献血者ABO及Rh（D）血型进行鉴定，其中A型272例、B型279例、B3亚型1例、0型437例、AB型11例；Rh（D）阴性2例，Rh（D）阳性998例；对100例输血前检查标本进行配血试验；以Coomb＇s凝胶试剂卡对抗-D、-C、-c、-E、-e、-Jk^a、-Jk^b、-Fy^a、-Di^a等9个抗体分别与谱红细胞反应做特异性抗体鉴定试验：同时以瑞士进口的DiaMed同类产品及常规的血型血清学试管法同步比较。结果 研制的卡式微柱凝胶血型试剂与瑞士进口的DiaMed同类产品比较，检验结果、敏感性、特异性无明显差别。结论 研制的卡式微柱凝胶试剂适用于血型鉴定、配血试验、抗体筛选和鉴定等血型血清学检查，该试剂制备具有成本低、工艺简单的优点，具有较好的推广应用和开发价值。     

广东地区CD36Ⅱ型缺失献血者CD36基因突变类型及其对CD36单核细胞表达的影响分析

目的了解广东地区CD36Ⅱ型缺失人群CD36基因突变类型及其对CD36单核细胞表达量的影响。方法选择本中心2012年6月—2016年6月的广东地区献血者2 300名,采用流式细胞术筛查出CD36Ⅱ型缺失表达者,并借助DNA测序仪对CD36编码序列做测序分析以弄清该人群CD36基因突变类型;运用Graph Pad Prism v5. 0统计分析CD36基因突变对CD36Ⅱ型缺失者单核细胞表达的影响。结果本组广东地区献血者CD36Ⅱ型缺失者比例为0. 96%(22/2 300),CD36Ⅱ型缺失者的CD36编码基因的突变率为27. 27%(6/22),突变基因类型分别为A1163T、1228—1239del ATTGTGCCTATT、198—205del GATCTTTG、C1156T、C268T和C380T。22名CD36Ⅱ型缺失者单核细胞的CD36表达量(平均荧光强度,MFI):6名存在单链基因突变的CD36Ⅱ型缺失者[Mt(+/-)组]与16名无基因突变的CD36Ⅱ型缺失者[Mt(-/-)组]及8名正常CD36表达献血者(WT组)分别为58. 10±7. 57 vs 139. 90±16. 33 vs 141. 80±15. 59(P0. 01)。结论广东地区CD36Ⅱ型缺失献血者中仅部分人存在CD36编码基因的单链基因突变,但突变可影响CD36在其单核细胞的表达量。     

孕妇CD36抗原表达筛查及基因测序分析

目的了解孕妇CD36抗原的表达及其基因型。方法对在本中心做抗体筛查及血小板抗体检测的200名孕妇,采用流式细胞术检测其血小板及单核细胞上的CD36表达,并对其中血小板或单核细胞上CD36抗原缺失者做基因测序分析。结果本组孕妇CD36缺失表达率为1.5%(3/200),3例CD36缺失均为Ⅱ型缺失(只有血小板上CD36缺失),未见CD36Ⅰ型缺失(血小板和单核细胞上CD36都缺失)。3例CD36缺失表达者基因测序分析:2例发生CD36基因突变,其突变位点分别是Exon12 A1163T和Exon5 329-330del AC,为常见的基因突变类型;1例为正常CD36基因型。结论孕妇CD36表达缺失率与中国普通人群相似,缺失者CD36基因发生了基因突变。     

抗-CD36单克隆抗体对人CD34~+造血干(祖)细胞增殖和分化的影响

目的探讨抗-CD36单克隆抗体对人CD34~+造血干(祖)细胞体外增殖和分化的影响。方法选择无各种产科并发症的健康足月产妇3名,取脐带血20 mL/(人)份,以Ficoll细胞分离液(1.077 g/mL)密度梯度800 g离心30 min后,流式细胞仪分选CD34~+造血干(祖)细胞,培养2—3代,四唑盐(MTT)比色法检测抗-CD36单克隆抗体对CD34~+细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,Annexin V/PI双染法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期。观察抗-CD36单克隆抗体对CD34~+造血干(祖)细胞凋亡和细胞周期的影响、对造血干(祖)细胞红系分化能力以及对红系集落形成单位(CFU-E)和红系爆式集落形成单位(BFU-E)生成的影响。结果流式细胞仪分选出经Ficoll分离脐带血获得的单个核细胞中约0.44%CD34~+造血干(祖)细胞。2、8、32、64、128μg/mL抗-CD36单克隆抗体分别与CD34~+造血干(祖)细胞体外共培养:单纯CD34~+造血干(祖)细胞培养(正常)组、抗-CD36单克隆抗体2及32μg/mL组,IgG(对照)组的OD值分别为1.05±0.12 vs 0.9±0.15 vs 0.81±0.11 vs 1.06±0.18(P0.01)。Annexin V流式检测凋亡率(%):正常组、对照组与2μg/mL抗-CD36单克隆抗体组分别为10.13SymbolqB@1.42 vs 10.51SymbolqB@1.75 vs 24.57SymbolqB@2.75(P0.05)。G_1/S值:正常组、对照组与2μL/mL抗-CD36单克隆抗体组分别为3.95±0.25 vs 4.36±0.55 vs 7.35±0.65(P0.05)。CD34~+造血干(祖)细胞定向分化红系(CFU-E/BFU-E克隆形成数):正常组、对照组与抗-CD36单克隆抗体组分别为169±12、172±12和85±6(P0.05)。结论抗-CD36单克隆抗体诱导人CD34~+造血干(祖)细胞凋亡,细胞增殖减少和红系CFU-E/BFU-E克隆能力降低。     

多凝集红细胞1例

正常人红细胞上均含有T抗原,但一般情况被唾液酸包裹而不显示T抗原活性,在某些特殊情况下,如细菌感染、遗传因素或化学试剂诱导下[1,2],唾液酸酶催化裂解红细胞膜糖蛋白和糖脂上的唾液酸残基,主要是存在于A、B血型糖蛋白上的不稳定碱性四糖,导致T抗原部分或全部激活,从而产生T活化的多凝集红细胞,此类红细胞可与多数或所有ABO相容的含抗-TIgM的正常人血清凝集,但脐带血清或小于6个月的婴儿血清因无抗-TIgM而不与之反应。1病例简介2004年12月22日本中心收到某医院送来一疑难配血标本。患儿4月龄,ABO血型A型,RhD阳性,肠梗阻术后要求…     

广州地区汉族群体15个短串联重复序列基因座遗传多态性分析

目的:调查广州地区汉族人群15个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座遗传多态性分布。方法:应用荧光标记多重PCR方法和毛细管电泳技术,检测156名汉族无关个体的15个STR基因座基因型。结果:15个STR基因座的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,15个STR遗传标记均具有高度多态性,杂合度均超过0.64,15个基因座的个体识别力在0.816～0.966之间,非父排除率在0.343～0.725之间,匹配概率在0.038～0.184之间。15个基因座的累积个体识别能力为0.999 999以上,累积非父排除率为0.999 75,累积匹配概率为8.84×10-18。结论:该15个STR基因座具有高度多态性,可用于移植术后供者植入状态的监测。     

1627例新生儿红细胞抗体筛查和鉴定试验的分析

目的红细胞血型抗体（即不规则抗体）筛查和鉴定试验在新生儿溶血病中的意义。方法采用微柱凝胶技术对1627例新生儿进行ABO、Rh血型定型、直接抗人球白试验、游离抗体测定、放散试验,红细胞血型抗体筛查试验,检测出6例有ABO以外的抗体,进一步用盐水、聚凝胺法、抗球蛋白试验进行抗体鉴定。结果6例红细胞血型抗体筛查阳性,进一步抗体鉴定,检测出抗-D4例,抗-E1例,抗-c1例。结论根据红细胞血型抗体的特性,可为患儿选择无相应抗原的血液进行换血和治疗。     

血小板特异性抗体及HLA抗体引起血小板输注无效的研究

目的分析血小板输注无效（PTR）患者血小板同种抗体,并对其HPA及HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型,探讨血小板输注无效与血小板同种抗原／HLA—Ⅰ类抗原相关性。方法应用ELISA方法对17例血小板输注无效患者血清中的血小板抗体进行检测;运用PCR—SSP方法,采用HPA分型试剂盒检测血小板同种抗原7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15,以及HLA分型试剂盒对HLA—A／B抗原进行基因分型。结果6名患者单独表达HLA抗体,4名患者表达血小板特异性糖蛋白抗体,3例HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同表达．其中以GPⅡb／Ⅲa为主。对17例患者HPA系统和HLA-Ⅰ类抗原基因分型,发现HPA-3系统中a的基因频率高达0．676,b为0．324;HLA—A＊02、HLA—A＊24、HLA—A＊11和HLA—B＊60、HLA—B＊13、HLA—B＊46多见。结论HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体表达引起血小板输注无效,了解胛R与HPA／HLA—Ⅰ类抗原的相关性对指导临床血小板配合性输注具有重要意义。     

冰冻红细胞标准制备程序的确立及评价

目的：确立冰冻红细胞标准制备方法。方法：通过比较手工法及洗血仪制备程序及冰冻红细胞质检结果，探索出最适制备方法。结果：洗血仪制备产品的上清游离Hb、甘油残余量、红细胞回收率等指标优于手工法，临床应用效果满意。结论：洗血仪程序可作为冰冻红细胞标准制备程序。