核糖体小亚基蛋白S7对结肠癌细胞HCT116迁移的作用初探

目的：探讨核糖体小亚基蛋白S7（RPS7）对结肠癌细胞 HCT116迁移的作用及机制。方法以3种基因型人结肠癌 HCT116细胞株（p53野生型,p53‐／‐,p21‐／‐）为研究对象,利用pCDNA3．1‐s7质粒对rps7基因进行过表达,rps7小分子干扰RNA对rps7基因进行沉默,实时定量PCR检测转染前后细胞rps7 mRNA的表达变化,Transwell细胞迁移实验观察细胞迁移能力的改变。结果3种不同的 HCT116细胞株转染了pCDNA 3．1‐s7质粒后,rps7基因的表达均明显上调,且迁移能力均受到显著促进,增幅大小依次为 HCT116（p53‐／‐）＞ HCT116（WT）＞ HCT116（p21‐／‐）;而转染了rps7 siRNA后,rps7基因的表达均明显下调,且迁移能力均受到显著抑制,减幅大小依次为HCT116（p53‐／‐）＞ HCT116（p21‐／‐）＞ HCT116（WT）。结论 RPS7对结肠癌细胞HCT116迁移运动的促进作用显著,且该作用与细胞内的P53水平有关,提示RPS7可能通过P53通路或者其他机制在结肠癌细胞H C T 116的迁移中发挥重要作用。     

人脑神经干细胞体外培养中增殖、自我更新及多向分化潜能的观察

背景神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径,也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型,神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础. 目的分离培养和鉴定人脑神经干细胞. 设计和方法采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞,并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定. 地点和材料实验在福建医科大学分子医学研究中心实施.实验材料为自然流产的孕龄 6～ 8周的人胚胎脑组织. 主要观察指标人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能. 结果人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖,经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞. 结论从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞,是研究神经干细胞诱导分化的良好模型.     

不同配方的神经营养因子对神经干细胞存活和增殖能力的影响

目的：探讨由营养因子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及N2添加剂所组成的配方中最适合神经干细胞存活和增殖的组合。方法：分离培养大鼠脑神经干细胞，免疫荧光细胞染色加以鉴定，采用不同组合配方的培养液培养细胞，通过计数神经干细胞球数，判定其对神经干细胞存活和增殖的影响。结果：在bFGF，EGF和N2组成的8种不同配方培养液中，bFGF组是神经干细胞存活和增殖的最适配方，是8周中与对照组比较所有P&;lt;0.05的惟一配方；EGF具有促进神经干细胞分化的作用，而促增殖能力不如bFGF；相比之下，N2对神经干细胞增殖的影响最弱。结论：bFGF对神经干细胞增殖及较长期存活具有重要的作用，其作用较EGF和N2强，EGF还具有促神经干细胞分化的作用。     

人脑神经干细胞体外培养中增殖、自我更新及多向分化潜能的观察

背景：神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径，也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型，神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础。目的：分离培养和鉴定人脑神经干细胞。设计和方法：采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞，并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。地点和材料：实验在福建医科大学分子医学研究中心实施。实验材料为自然流产的孕龄6—8周的人胚胎脑组织。主要观察指标：人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能。结果：人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征，并可在体外大量增殖，经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论：从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞，是研究神经干细胞诱导分化的良好模型。     

细胞移植术对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺的影响

目的 探讨细胞移植过程中麻醉以及细胞植入等操作对中枢神经递质谷氨酸和多巴胺的影响. 方法 体外培养的新生大鼠大脑神经干细胞定位植人正常成年大鼠大脑纹状体.采用脑微透析术结合高效液相色谱(HPLC)动态检测探针置人、麻醉剂氯胺酮和戊巴比妥钠以及移植细胞等操作对谷氨酸和多巴胺水平的影响. 结果 探针置人大鼠纹状体后15 min.纹状体内谷氨酸和多巴胺的水平均明显高于基础值,5～6h后方恢复至基础水平.戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉后15 min均可使大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平呈一过性升高.细胞植入本身对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平无明显影响. 结论 常规剂量的戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉均可使脑内谷氨酸和多巴胺水平短暂升高.进行脑微透析术检测谷氨酸和多巴胺应在探针置入至少6h后进行.     

神经节苷脂在神经系统发育过程中的作用

1935年，Klenk首先在大脑灰质的Ganglionzellen细胞中发现了一种新物质，命名为ganglioside-神经节苷脂，其种类繁多，至今已分离鉴定出70余种。神经节苷脂是一组含有唾液酸的鞘糖脂，分子由疏水的神经酰胺和亲水的含唾液酸的寡糖链组成，广泛分布于脊椎动物各组织的细胞膜上，其中以神经系统含量最为丰富。通常根据唾液酸数目不同分为GM(单唾液酸神经节苷脂)、GD(二唾液酸神经节苷脂)和GT(三唾液酸神经节苷脂)等。又根据糖基数目不同将GM分为GMl(含4个糖基)、     

Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组（P〈0．05）。在各级星形细胞瘤中,Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ～Ⅲ级显著高于Ⅳ级（P〈0．05）,Hes5的表达在2组间差别无统计学意义（P〉0．05）。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好（k=0．503）,与Hes5的表达一致性差（k=0．216）。结论Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。     

人notch1—shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建人notch1—shRNA慢病毒表达载体,为Notch信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人notch1基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pENTR／U6质粒,通过与pLenti6／BLOCK—iT—DEST载体的LR重组,构建notch1—shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导人293FT细胞,包装成慢病毒。用该慢病毒感染人神经母细胞瘤系SH—SY5Y细胞,RT-PCR和Westernblot法检测细胞notch1基因的表达。结果目的序列成功连接于载体并包装成较高滴度的慢病毒,细胞mRNA和蛋白质的检测均表明构建的notch1—shRNA慢病毒表达载体LR-ND-A能显著抑制SH-SY5Y细胞notch1基因的表达。结论成功构建人notch1—shRNA慢病毒表达载体。     

臂丛损伤神经干细胞脊髓前角移植后分化情况及对运动神经元的保护作用

目的观察臂丛根性撕脱伤后将脊髓源性神经干细胞(neuralstemcell,NSC)移植于脊髓前角后的存活、分化情况及对脊髓前角受损运动神经元的保护作用。方法取新生鼠脊髓,分离获得脊髓源性神经干细胞,体外培养、扩增、鉴定、5溴2-脱氧尿苷(BrdU)标记。取SD大鼠60只,随机分成实验组、对照组和单纯组。从后路制备C5~C7臂丛神经根性撕脱伤动物模型。实验组移植神经干细胞于C6脊髓前角,对照组移植灭活神经干细胞,单纯组不作移植。术后1、2、4、8、12周取脊髓标本进行组织学与免疫组化染色观察。结果神经干细胞移植入脊髓后能存活、分化;臂丛根性撕脱伤后脊髓前角运动神经元数目明显减少;实验组神经干细胞移植后2、4、8、12周各个时间点运动神经元的存活率均高于对照组和单纯组。结论臂丛根性撕脱伤脊髓前角神经干细胞移植后能存活并分化为神经元及星型胶质细胞,脊髓源性神经干细胞移植能明显减少前角运动神经元的继发性死亡,对脊髓前角受损运动神经元有保护作用。     

双向电泳和质谱分析在神经科学研究中的应用

人类基因组计划已经完成，这一伟大的成就标志着生命科学研究进入一个新时代——后基因组时代，其中包括蛋白质组(即蛋白质组学)的研究。双向电泳和质谱技术是蛋白质组学的核心技术，将这两种技术应用于神经科学研究，能够进一步了解神经系统复杂结构及其发育规律，揭示神经系统疾病发生机理，并为其诊断和新药研制提供有益的依据。