训练免疫:一种新发现的免疫模式

目前普遍认可的只有适应性免疫才能建立免疫记忆的观点正在受到挑战。越来越多的研究表明,先天免疫细胞如单核细胞、巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞在外源感染刺激下能够产生一种新的带有非特异性记忆的免疫反应,以应对二次同源或异源感染,这一过程被称为训练免疫。其特点是宿主对再次感染的高反应性、非特异性免疫"记忆";此外,该过程不依赖经典的T、 B细胞适应性免疫,而是由表观遗传修饰和免疫代谢驱动。训练免疫的提出是对免疫学原理的一次扩展,为免疫学机制的研究提供了新的方向。     

TRAF6通过内源性凋亡通路促进卡介苗诱导的巨噬细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对卡介苗（BCG）诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞,在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组：对照组（未感染,C）、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组;感染复数试验处理组分为5组：对照组（未感染,C）、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后,通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达,并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组：阴性对照组（NC）、BCG单独感染组（BCG）、TRAF6小干扰RNA单独处理组（siRNA）和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组（siRNA+BCG）。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2,BAX的表达。使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达。结果与健康人群相比,活动性结核患者外周血中TRAF6高表达（P<0.001）。BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达,且当感染时间为18 h（P=0.03,P=0.04）,感染复数为15时二者表达量最高（P<0.001,P<0.001）。敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量（P=0.05）。与BCG单独处理组相比,敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率（P<0.001）,并显著下调Caspase 3（P=0.002）和PARP的表达（P<0.001）。同时,BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升（P<0.001）,而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位（P<0.001）。敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达（P=0.005）的同时上调Bcl-2的表达（P=0.04）。结论 TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶对结核肉芽肿形成及免疫调控作用的研究进展

<正>结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的具有高致病性及死亡率的人畜共患传染病^[1]。作为一种胞内致病菌,Mtb通过气溶胶等途径感染肺部,随后被驻留在肺泡中的巨噬细胞识别、吞噬并发生复杂的相互作用^[2]。一方面,当Mtb感染巨噬细胞时,     

BCG初免—单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强免疫策略的免疫效应研究

目的 为了评价BCG初免-单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强的免疫策略诱导小鼠产生的免疫效应.方法 在前期工作的基础上,制备并纯化获得了高滴度的重组腺病毒Ad5-CEAB,然后以小鼠为动物模型,采用BCG初免-Ad5-CEAB加强的异源初免-加强的免疫策略对动物进行免疫,通过测定小鼠淋巴细胞抗原刺激液中IL-12和IFN-γ的含量,测定小鼠血清IgG抗体含量以及小鼠肺盥洗液中sIgA的浓度来评价BCG初免-单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强免疫策略的免疫效应.结果 BCG初免-Ad5-CEAB加强免疫后,经抗原刺激后的小鼠淋巴细胞会分泌高水平的IL-12和IFN-y,这两种细胞因子的浓度均显著高于对照组.BCG初免-Ad5-CEAB加强后,还可以有效的刺激小鼠分泌IgG抗体,血清IgG抗体浓度显著高于对照组.另外,小鼠肺盥洗液中sIgA的浓度也显著高于对照组.结论 采用BCG初免-单次Ad5-CEAB加强的异源初免-加强的免疫策略能够有效的刺激小鼠产生较强的免疫应答反应.     

30株牛源分枝杆菌分离株基因分型鉴定

目的 采用基因分型方法对30株分离自西北三省的牛源分枝杆菌分离株进行鉴定.方法 从西北三省的规模化奶牛场采集结核菌素(PPD)阳性奶牛的咽拭子和鼻拭子,经分离培养后,采用16S rRNA、MPT64以及多位点PCR进行菌株分型鉴定,利用数目可变串联重复序列分析(variable-number of tandem rep...     

结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达

目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,并利用293T细胞对其表达进行检测.方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal ribo some entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48 h后提取细胞总蛋白,表达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析.结果 限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和阅读框架正确.将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测证实两种抗原可在同一载体中各自独立表达.结论 成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础.     

一种潜在结核病特异性诊断分子标志物Circ-IRAKM的筛选鉴定

目的 分析Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中的表达及其与结核病患者临床特征的相关性，评价其作为活动型结核病分子诊断标志物的预测价值。方法 通过公共数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)筛选在结核病患者外周血差异表达的Circ-RNA,qRT-PCR技术验证Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血的相对表达，采用SPSS 23.0及ROC曲线等分析Circ-IRAKM作为诊断活动型结核病的价值，GO/KEGG数据库预测候选靶点生物学功能。结果 Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中升高有统计学意义(t=9.096,P<0.001);Circ-IRAKM在结核病患者外周血的AUC为0.966,特异性为0.995,灵敏度为0.937;且其表达与外周血巨噬细胞相对值/绝对值呈正相关；数据库预测其可能通过NF-κB信号通路参与病原-宿主博弈过程。结论 Circ-IRAKM可作为结核病患者诊断及预后的候选特异性生物分子标志物。