TRAF6通过内源性凋亡通路促进卡介苗诱导的巨噬细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对卡介苗（BCG）诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞,在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组：对照组（未感染,C）、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组;感染复数试验处理组分为5组：对照组（未感染,C）、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后,通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达,并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组：阴性对照组（NC）、BCG单独感染组（BCG）、TRAF6小干扰RNA单独处理组（siRNA）和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组（siRNA+BCG）。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2,BAX的表达。使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达。结果与健康人群相比,活动性结核患者外周血中TRAF6高表达（P<0.001）。BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达,且当感染时间为18 h（P=0.03,P=0.04）,感染复数为15时二者表达量最高（P<0.001,P<0.001）。敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量（P=0.05）。与BCG单独处理组相比,敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率（P<0.001）,并显著下调Caspase 3（P=0.002）和PARP的表达（P<0.001）。同时,BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升（P<0.001）,而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位（P<0.001）。敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达（P=0.005）的同时上调Bcl-2的表达（P=0.04）。结论 TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶对结核肉芽肿形成及免疫调控作用的研究进展

<正>结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的具有高致病性及死亡率的人畜共患传染病^[1]。作为一种胞内致病菌,Mtb通过气溶胶等途径感染肺部,随后被驻留在肺泡中的巨噬细胞识别、吞噬并发生复杂的相互作用^[2]。一方面,当Mtb感染巨噬细胞时,     

一种潜在结核病特异性诊断分子标志物Circ-IRAKM的筛选鉴定

目的 分析Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中的表达及其与结核病患者临床特征的相关性，评价其作为活动型结核病分子诊断标志物的预测价值。方法 通过公共数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)筛选在结核病患者外周血差异表达的Circ-RNA,qRT-PCR技术验证Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血的相对表达，采用SPSS 23.0及ROC曲线等分析Circ-IRAKM作为诊断活动型结核病的价值，GO/KEGG数据库预测候选靶点生物学功能。结果 Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中升高有统计学意义(t=9.096,P<0.001);Circ-IRAKM在结核病患者外周血的AUC为0.966,特异性为0.995,灵敏度为0.937;且其表达与外周血巨噬细胞相对值/绝对值呈正相关；数据库预测其可能通过NF-κB信号通路参与病原-宿主博弈过程。结论 Circ-IRAKM可作为结核病患者诊断及预后的候选特异性生物分子标志物。