SETD4对脂多糖诱导的AML12细胞IL-6转录的调控作用

目的　探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。 方法　构建SETD4表达质粒和IL-6 启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6 启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。 结果　双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL-6 promoter的构建成功。pcDNA3.0/HA-SETD4与pGL3.0/IL-6 promoter共转染AML12细胞,LPS刺激后SETD4对IL-6 启动子荧光素酶活性没有影响;上调SETD4表达后,可以促进LPS诱导的IL-6 mRNA转录。 结论　成功构建SETD4真核表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒;SETD4对LPS诱导的AML12细胞IL-6的转录发挥正调控作用。     

新疆地区肺结核病人甲、乙、丙3型病毒性肝炎分布特征分析

目的了解肺结核病患者甲、乙、丙3型病毒性肝炎的分布特征,为在肺结核病人中开展甲、乙、丙3型病毒性肝炎知识宣传教育和干预工作提供参考依据。方法收集新疆部分地区肺结核患者的一般资料,采集血清,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测甲肝抗体IgM(抗HAV-IgM)、丙肝抗体IgG(抗HCV-IgG)以及乙肝(HBV)抗原抗体系统3项血清学指标即乙肝标志物(HBV-M):乙肝表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)和核心抗体(抗-HBc),并对其进行分析。结果采集肺结核病患者有效血清标本共1 355份,各指标阳性率分别为抗-HAV5.46%、抗-HCV3.47%、HBsAg6.64%、HBV感染率55.06%。北疆各指标抗HAV-IgM(5.99%)、抗HCV-IgG(5.58%)、HBsAg(10.74%)、HBV感染(63.02%)的阳性率均高于南疆[抗HAV-IgM(5.17%)、抗HCV-IgG(2.30%)、HBsAg(4.36%)、HBV感染(50.63%)],除抗HAV-IgM外,差异均有统计学意义。男性各指标抗HAV-IgM(6.87%)、抗HCV-IgG(4.71%)、HBsAg(7.25%)、HBV感染(56.36%)阳性率均高于女性(抗HAV-IgM(3.51%)、抗HCV-IgG(1.76%)、HBsAg(5.80%)、HBV感染(53.25%)),除HBsAg和HBV感染外,抗HAV-IgM和抗HCV-IgG阳性率差异有统计学意义。≥65岁组与<65岁组相比,抗HAV-IgM阳性率差异有统计学意义(χ2=6.64,P<0.05);HBsAg和HBV的阳性率均以65～75岁组最高(8.43、64.04%);抗HCV-IgG阳性率以25～35岁组最高(6.69%),各年龄组差异有统计学意义(χ2=12.524,P=0.028)。除抗HCV-IgG外,不同民族间抗HAV-IgM、HBsAg和HBV的阳性率差异有统计学意义(P<0.05);抗HAV-IgM阳性率其他民族最高(13.92%);HBsAg和HBV的阳性率汉族最高(12.5%、77.98%);抗HCV-IgG阳性率哈萨克族最高(6.90%)。结论肺结核病人甲、丙型病毒性肝炎检出率均较一般人群高,汉族和维吾尔族乙型病毒性肝炎检出率均高于相应的一般人群。甲、乙、丙3型病毒性肝炎检出率男性均高于女性,北疆高于南疆。≥65岁组的肺结核病人比<65岁组更容易罹患甲肝和乙肝;丙肝在25～35岁组高发。除丙肝之外,肺结核病人罹患甲肝和乙肝和民族有关。     

Rab7蛋白参与了BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的过程

 目的:探讨Rab GTP酶是否参与了对细菌脂蛋白(BLP)耐受的骨髓诱导分化巨噬细胞(BMDMs)杀菌能力增强的过程。方法:首先利用real-time PCR比较BLP耐受巨噬细胞和非耐受细胞中Rab5a、Rab5b、Rab7、Rab9、Rab9b、Rab11a、Rab11b、Rab12、Rab32和Rab34的表达变化,筛选出水平升高的Rab7分子;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达是否在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后继续升高;接下来用RNAi技术下调BLP耐受巨噬细胞Rab7表达,观察细胞对细菌的吞噬能力及杀灭能力的影响。结果:在检测的10个Rab GTP酶中, Rab7在BLP耐受BMDMs的mRNA水平升高,是非耐受细胞的1.4倍;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后,随着时间延长均明显升高;下调Rab7表达不影响BLP耐受巨噬细胞对细菌的吞噬能力,但是显著降低其对细菌的杀灭能力。结论:BLP耐受通过上调巨噬细胞Rab7的表达,在增强巨噬细胞对细菌的杀灭过程中发挥重要作用。     

SETD4蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒系统的表达

目的　通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4（SET domain-containing 4）蛋白,并纯化SETD4蛋白,为深入探讨SETD4的功能奠定基础。 方法　提取小鼠正常肝组织的RNA,通过RT-PCR扩增SETD4基因,并克隆至pFastBac-HTB构建重组载体,再转座获得重组杆粒;通过脂质体介导将重组杆粒转染SF9细胞产生重组病毒,扩增病毒感染细胞并获得重组蛋白;利用Ni2+亲和柱来纯化蛋白,并通过Western Blot及考马斯亮蓝染色鉴定SETD4蛋白。 结果　经双酶切鉴定及测序证实SETD4基因插入了供体质粒;经PCR鉴定证实SETD4基因插入了穿梭载体;经考马斯亮蓝染色证实纯化得到重组蛋白,用His-Tag抗体和SETD4特异性抗体在50 kD处可检测到目的条带。 结论　成功利用昆虫杆状病毒表达系统够表达了SETD4,并纯化了SETD4。     

血小板抗体与不良妊娠及妊娠次数的关联性分析

目的分析266例孕妇外周血血小板抗体检测结果,探讨血小板抗体与不良妊娠及妊娠次数的关系。方法选取陕西省人民医院266例孕妇,进行血小板抗体检测,根据有无不良妊娠分为2组,比较其血小板抗体阳性率;同时,根据妊娠次数分为A组(1次)、B组(2次)、C组(≥3次),比较其血小板抗体阳性率。结果有不良妊娠组与无不良妊娠组血小板抗体阳性率(31.81%vs 14.86%)比较差异有统计学意义(P<0.05),妊娠次数不同的3组间血小板抗体阳性率(A组:9.09%;B组:21.62%;C组:23.65%)比较差异有统计学意义(P<0.05),组间的趋势χ2检验统计学分析显示,妊娠次数和血小板抗体有线性趋势(P<0.05)。结论血小板抗体与不良妊娠有关,有不良妊娠组血小板抗体阳性率高于无不良妊娠组;血小板抗体与妊娠次数有线性趋势,妊娠次数越多,抗体阳性率越高。将血小板抗体检测作为妊娠期常规检测项目,有利于临床对不良妊娠孕妇的早发现,以及对胎儿/新生儿同族免疫性血小板减少性紫癜等疾病的早预防、早发现、早干预。     

SETD4基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的　构建并鉴定SETD4基因敲除小鼠,为研究SETD4的生物学功能提供动物模型。 方法　将引进的SETD4flox/+小鼠与EIIa-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为SETD4+/-.EIIa-Cre的小鼠;再与C57BL/6小鼠杂交去除Cre酶,获得杂合子SETD4+/-小鼠;该小鼠自交获得纯合子SETD4-/-小鼠。通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型;RT-PCR、荧光定量PCR方法鉴定纯合子的SETD4基因敲除小鼠SETD4 mRNA表达情况;HE染色观察小鼠肝、肺组织的形态学变化。 结果　PCR结果表明子代小鼠的基因型符合SETD4-/-;纯合子基因敲除小鼠SETD4 mRNA水平显著低于野生型小鼠;SETD4基因敲除小鼠肝、肺组织的形态学特征与野生型小鼠相比无明显差异。 结论　本研究基于Cre/loxp系统,成功构建并鉴定了SETD4基因敲除小鼠。