金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准，但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测，本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔，制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验，检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20 ng·mL^-1，在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%，采用本法检测质量浓度分别为100 ng·mL^-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI)，均呈现阴性反应，说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测，发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。     

围绝经期女性外周血OSTF1、OPG/RANKL 对骨质疏松症的预测价值

目的 探讨围绝经期女性外周血破骨细胞刺激因子1(OSTF1)、护骨素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)对骨质疏松症的预测价值。方法 选择2021年3月至2023年1月河北省妇幼保健中心收治的165例围绝经期骨质疏松症患者为疾病组,并纳入同期120例围绝经期骨密度正常的健康志愿者为对照组。采用Pearson相关分析外周血OSTF1、OPG/RANKL与骨密度的相关性,并收集基线资料,采用单因素分析和多因素Logistic回归分析骨质疏松症发生的影响因素,并使用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血OSTF1、OPG/RANKL对骨质疏松症的预测价值。结果 疾病组患者血清OSTF1、RANKL水平明显高于对照组,血清OPG水平、OPG/RANKL明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。疾病组患者整体骨密度、腰椎骨密度和T值明显低于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,OSTF1、OPG/RANKL、OPG、整体骨密度、腰椎骨密度、T值和RANKL是骨质疏松症发生的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示：血...     

《局方》酸枣仁药证发微

目的:探讨《局方》酸枣仁药证方法治疗心悸怔忡。方法:根据对《局方》酸枣仁药证的总结发现其证治以心悸怔忡为主。结论:以药证对应为原则,临证论治心律失常之心悸怔忡者取得了一定疗效。     

重组金黄色葡萄球菌肠毒素 C2 的表达及生物学活性分析

目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析.方法 通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达.利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较.结果 表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列.含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白.SDS-PAGE显示,经Ni2 亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯.MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性.结论 成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础.     

脑室镜下手术治疗早产儿重度梗阻性脑积水

目的 探讨脑室镜下三脑室造瘘术治疗早产儿重度梗阻性脑积水的疗效和安全性.方法 对CT、MRI或颅脑B超证实为重度梗阻性脑积水的11例早产儿,采用经侧脑室、室间孔、三脑室置入神经内镜,于三脑室底与脚间池造一瘘孔.比较手术前后脑室系统B超测量左右侧脑室的改变以及MRI和CT的影像学改变;追踪观察手术并发症、手术效果和安全性,采用贝利婴幼儿量表和Peabody运动功能量表评估患儿神经系统状况.结果 术后随访0.5 ～6.0年,11例中9例远期效果良好,1例脑室仍轻度增大但维持稳定,1例无变化,1例脑室进行性增大改行脑室腹腔分流术.头颅B超测量左右侧脑室宽度术前为(9.60±3.52) mm和(8.63 ±3.10)mm,术后下降为(5.50 ±2.20)mm和(4.90 ±2.70)mm.本组11例患儿侧脑室旁水肿均消失,其中随访时间＞12个月9例,梗阻性脑积水临床症状均缓解.结论 脑室镜下手术可显著改善重度梗阻性脑积水的近远期不良预后,是一种安全、有效、并发症少的微创手术.     

白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的作用及机制研究

【目的】观察白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的干预作用,并从"滑膜—软骨"轴角度探讨骨关节炎(OA)的发病机制。【方法】取新生SD大鼠膝关节滑膜,经消化酶消化后获得原代滑膜细胞,取第1代(P1)细胞进行实验。实验设空白组、模型组、西药组、白脉组。模型组加入脂多糖(LPS)进行诱导,西药组与白脉组在模型组LPS诱导的基础上分别加入扶他林软膏、白脉软膏含药血浆干预。LPS诱导24 h后观察滑膜细胞形态变化,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测滑膜细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。此后,各组皆与正常软骨细胞进行共培养。共培养24 h后观察软骨细胞形态,实时定量PCR(qPCR)检测软骨细胞基质金属蛋白酶3(MMP3)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶4(ADAMTS4)、TNF-α、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)mRNA表达情况,Westernblot法检测Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)表达情况。【结果】LPS诱导后滑膜细胞形态由原来的多角形变成长梭形。ELISA结果显示,模型组滑膜细胞上清中IL-1β、TNF-α含量较空白组升高(P 0.05),而白脉组IL-1β、TNF-α含量较模型组下降。软骨细胞与退变滑膜细胞培养24 h后由原来的多角形变为长梭形。qPCR结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP3、ADAMTS4、TNF-αmRNA表达升高(P 0.05),Sox9mRNA表达降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP3、TNF-α、ADAMTS4 mRNA表达明显降低(P 0.05),Sox9 mRNA表达水平升高(P 0.05)。Western blot结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达升高(P 0.05),COL2A1表达明显降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达降低(P 0.05),COL2A1表达升高(P 0.05)。【结论】退变滑膜细胞可导致软骨细胞退变并促进骨关节炎发展,白脉软膏对此病理过程有明显的抑制作用。     

金葡菌肠毒素C2的克隆表达及其生物学活性

目的克隆金葡菌肠毒素C₂全长基因，构建SEC₂的表达载体，实现其可溶性表达，并对纯化的rSEC₂蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)从金葡菌FRI1230菌株基因中得到肠毒素SEC₂的基因，将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1，转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC₂对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响，对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC₂基因序列并得到高效表达的融合蛋白，MTT法结果表明，重组SEC₂表现出良好的促淋巴细胞增殖活性，且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC₂基因，表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC₂蛋白，为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素C2中缺口的形成及影响因素的研究

目的:探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)断裂的因素.方法:将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响.结果:重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间.重组SEC2在37℃下、24 h内会完全产生断裂,在碱性条件下则加速其断裂的形成;H2O2会导致重组SEC2产生非特异性降解.当溶液中有β-巯基乙醇(2%)、苯甲基磺酰胺(5～10 mmol/L)、咪唑(1 mol/L)或大肠杆菌粗提物时,重组SEC2的断裂可被有效抑制.结论:肠毒素C2容易在特定位点发生断裂,可能与蛋白质本身结构有关.     

小儿支原体肺炎血Th17/Treg细胞失衡与心肌损害发生的相关性

目的 探讨小儿支原体肺炎血Th17/调节性T细胞(Treg)失衡与心肌损害发生的相关性。方法 选择2020年3月—2022年3月于邢台市人民医院就诊的支原体肺炎患儿137例作为观察对象,通过肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,影像学检查及心电图表现等判定心肌损害,并根据是否发生心肌损害将患儿分为心肌损害组和无心肌损害组。另选择同期健康体检儿童96例作为对照组。采用流式细胞仪测定Th17细胞和Treg细胞占CD4+T细胞比例;采用全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和CK-MB水平。比较各组Th17细胞占CD4⁺T细胞比例、Treg细胞占CD4⁺T细胞比例、Th17/Treg和心肌酶水平变化。采用Pearson相关性分析Th17/Treg与心肌酶相关性。结果 137例支原体肺炎患儿中,发生心肌损害72例(52.55%)。心肌损害组血清LDH、CK和CK-MB水平高于无心肌损害组和对照组,且无心肌损害组血清LDH、CK和CK-MB水平高于对照组(P<0.05)。心肌损害组Th17细胞占CD4⁺T细胞...