一例多种羧化酶缺乏症的HLCS基因变异分析

目的对1例临床诊断为多种羧化酶缺乏症(multiple carboxylase deficiency,MCD)的患儿及其父母进行相关致病基因的变异分析,为临床诊断及遗传咨询提供依据。方法应用PCR技术和DNA测序技术对患儿的MCD致病基因BT和HLCS编码区进行变异检测,并对患儿父母进行相应基因变异分析。在80名正常人中对未报道过的基因变异进行PCR-限制性片段长度多态性分析。结果患儿的BT基因编码区未发现碱基改变,HLCS基因存在c.286delG(p.Val96Leufs*162)和c.1648G>A(p.Val550Met)复合杂合变异,其中c.286delG(p.Val96Leufs*162)经PCR-限制性片段长度多态性分析验证为新变异。结论HLCS基因c.286delG(p.Val96Leufs*162)和c.1648G>A(p.Val550Met)变异可能为患儿的致病原因,致病基因的检出为临床诊断及遗传咨询提供了依据,同时丰富了HLCS基因变异谱。     

一个眼牙指发育不良家系的基因突变分析

目的 旨在报道一个罕见的中国汉族眼牙指发育不良家系,并对该家系进行基因突变分析.方法 采用PCR及测序方法检测该家系先证者GJA1基因编码区及其侧翼序列的突变,然后在家系成员中验证,并通过Weblogo软件对可疑变异位点进行保守性分析;同时利用PCR、电泳及测序分析方法,检测HOXD13基因突变,排除患者由HOXD13基因突变致病的可能.结果 该家系内患者均携带GJA1基因的杂合突变c.605 C>T,正常个体均无此突变;该突变导致Cx43蛋白第202位氨基酸由精氨酸变成组氨酸(p.R202H);HOXD13基因未见异常.结论GJA1基因c.605 C>T(p.R202H)突变是该中国汉族眼牙指发育不良家系的致病突变,该突变为中国人群中首次报道.     

A型激酶锚定蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中的作用

  目的 探讨A型激酶锚定蛋白（AKAPs）在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中的作用。方法 收集生发泡期小鼠卵母细胞,显微注射Ht31或Ht31-P,观察卵母细胞减数分裂恢复情况。结果 在蛋白激酶A持续激活的情况下,Ht31注射组能促进小鼠卵母细胞减数分裂重新启动,解除蛋白激酶A引起的生发泡期阻滞,而Ht31-P对照组不能。结论 AKAPs介导的蛋白激酶A正确锚定对小鼠卵母细胞第一次减数分裂阻滞至关重要。     

细胞周期相关蛋白DCT1染色体及细胞定位与其组织表达的研究

 目的对候选抑癌基因DOC-1R((Deleted in oral cancer-1 related,CDK2AP2)相关基因DCT1(DOC-1Rterminal1)进行染色体定位分析并观察其细胞内定位,检测该基因在人类组织中的表达。方法通过辐射杂交细胞系对其进行染色体定位分析,同时构建EGFP-DCT1质粒并转染HeLa细胞,荧光显微镜观察DCT1蛋白在细胞内的定位。此外,应用荧光定量PCR的方法检测该基因在16个正常人类组织中的表达。结果DCT1基因定位于5q31,其编码产物在HeLa细胞中定位于核膜,该基因在正常人类的16个组织中均有表达,其中在脾中表达水平较高。结论DCT1可能为细胞周期调控相关基因,在人类组织中普遍表达。     

皮毛加工工人呼吸系统损害的调查

对某皮毛加工厂作业生产环境进行粉尘浓度及真菌学调查。对１４２名皮毛加工工人及３３２名不接触尘毒对照工人进行呼吸系统症状询问调查及肺功能检测,并对部分皮毛加工工人呼吸系统症状明显者进行了胸部Ｘ线检查。结果表明,皮毛加工各工序真菌浓度与对照环境比较明显增高,务浓度波动在６２９－３６８１ｃｆｕ／ｍ＾３之间。     

柞蚕丝生产环境所致职业性呼吸系统损害的研究

目的 探讨柞蚕丝生产环境对工人呼吸系统的损害。方法 对绢绸厂作业生产环境进行了真菌学调查,并对197名相等柞蚕丝加工工人及40名不接触尘毒的对照工人进行呼吸系统症状的询问调查,胸部X线检查及抗芽枝霉和抗交链孢霉抗体的测定。结果 柞蚕丝加工工人各工序真菌数量较对照现场明显增高,其优势菌种为芽枝霉及交链孢霉;柞蚕丝加工工人呼吸系统症状阳性率明显高于对照组,并有4例X线胸片出现片状炎性影,15人经常出现发热症状。柞蚕丝加工工人血清中抗芽枝霉和抗交链孢霉抗体均显著高于对照组。结论 芽枝霉和交链孢霉可能是柞蚕发生产环境引起过敏性呼吸系统疾病的致病因子。     

DOC-1R基因表达载体的构建及其重组蛋白的表达纯化

目的 构建DOC-1R(deleted in oral cancer-1 related)的原核表达载体并且纯化其重组蛋白,用于进一步研究DOC-1R蛋白的结构与功能.方法 采用基因重组技术构建原核表达载体pGEX-DOC-1R,经DNA测序鉴定后,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达并纯化融合蛋白.结果 以菌落PCR及限制性内切酶酶切鉴定得到候选阳性克隆,测序结果表明所得到的克隆序列及开放阅读框架完全正确,IPTG诱导后SDS-PAGE电泳分析表明在40 kD处出现特征蛋白表达带,经磁珠亲合层析后Western印迹检测证实得到较高纯度的GST-p14DOC-1R融合蛋白.结论 成功构建了pGEX-DOC-1R的原核表达载体,表达并纯化出GST-p14DOC-1R融合蛋白,为DOC-1R抗体制备及研究DOC-1R蛋白结合蛋白及其在细胞周期调控中的生物学功能奠定了基础.     

遗传性弥漫性胃癌相关基因表达及突变分析

目的研究遗传性弥漫性胃癌相关基因表达及突变,探讨遗传性弥漫性胃癌家系发病的分子遗传学机制。方法免疫组织化学S-P法检测该家系先证者胃癌组织中E-cadherin、β-catenin、SMAD4、TP53和ANXA10蛋白的表达情况,PCR扩增结合DNA测序筛查E-cadherin、SMAD4、P53和ANXA10基因的所有编码序列以及外显子-内含子交界处序列的种系突变情况。结果与先证者癌旁组织相比,癌组织中E-cadherin、SMAD4、TP53和ANXA10蛋白表达缺失,β-catenin表达降低。检测到SMAD4基因一个新的多态性位点即第1内含子24位碱基出现杂合性AG的改变,E-cadherin基因和ANXA10基因只检测到一些已知多态,未发现种系突变,P53基因未发现任何突变。结论 E-cadherin、β-catenin、SMAD4和ANXA10蛋白异常表达,提示它们可能参与遗传性弥漫性胃癌家系的发病机制,但排除了E-cadherin、SMAD4和ANXA10基因外显子突变导致该病发病的可能性。     

黄麻加工工人粉尘接触水平与肺功能损害关系

目的　分析黄麻加工工人粉尘接触水平与肺功能损害的关系。方法　对某麻纺织厂 4 88名接触黄麻粉尘工人和 332名对照工人的肺功能进行测定与分析。结果　接触黄麻粉尘工人的肺功能各项指标的实测值占预计值的百分比随着累计接尘量的增加而显著地下降 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;肺功能各指标的异常率随累计接尘量的增加显著地上升 (P <0 0 5或P <0 0 1)。接触黄麻粉尘工人的肺功能的损害程度随着累计接尘量的增加有加重的趋势。依据接触水平 -反应关系 ,用寿命表法建立了肺功能累计异常率与累计接尘量之间的直线回归方程。结论　黄麻粉尘接触水平与肺功能损害呈明显的接触水平 -反应关系。我国黄麻粉尘卫生标准 4mg/m3 是基本适宜的     

DOC-1R缺失型原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化

目的构建DOC-1R(deleted in oral cancer-I related)缺失型原核表达载体并纯化其重组蛋白,用于进一步研究DOC-1R互作蛋白及DOC-1R与其相互作用区域。方法经基因重组技术构建分别缺失DOC-1R N端1/3序列及其C端1/3序列的原核表达载体,经测序鉴定、转化至E.coli BL21菌株后,诱导表达两种缺失型GSTDOC-1R重组蛋白,并获得纯化的重组蛋白。结果两载体克隆序列及开放阅读框架均正确,经IPTG诱导在35kD处获得重组蛋白,纯化后得到大量GST-DOC-1R缺失型重组蛋白。结论成功构建了两种pGEX-DOC-1R缺失型原核表达载体,表达并纯化出GST-DOC-1R delN42、GST-DOC-1R delC42融合蛋白。