高糖、胰岛素影响肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达的研究

目的:探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达的影响,进一步研究GluT4在糖尿病肾病发病中的作用。方法:将培养的鼠1097系膜细胞分为8组:正常对照组,生理浓度胰岛素组(10-9M),低浓度胰岛素组(10-8M),高浓度胰岛素组(10-6M),高糖组(30mM),甘露醇组,高糖加高浓度胰岛素组,高糖加生理浓度胰岛素组。采用RT-PCR法检测GluT4 mRNA含量。结果:①正常系膜细胞可检测到GluT4mRNA。②高糖组GluT4 mRNA表达为对照组的58.7%(p<0.05);10-8M胰岛素组、10-6M胰岛素组分别为对照组的230.2%和297.2%(P<0.01);高糖加10-6M胰岛素组,高糖加10-9M胰岛素组分别为高糖组的170.6%和140.3%(p<0.05)。结论:①正常系膜细胞有GluT4 mRNA表达。②高糖可抑制GluT4 mRNA表达,胰岛素有一定拮抗作用,且呈剂量依赖性。③GluT4是糖尿病肾病发生发展中的重要因子。     

P21在肾小球系膜细胞的表达变化及意义

目的:探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21表达的影响及其与系膜细胞肥大的关系。方法:将培养的大鼠1097系膜细胞株分为8组:正常对照组,高糖组,甘露醇组,不同浓度胰岛素组,高糖加不同浓度胰岛素组。用RT-PCR法检测各组系膜细胞P21mRNA表达。流式细胞仪定量检测各组系膜细胞前向角度散射光(FSC)大小。结果:正常对照组系膜细胞中P21mRNA有一定表达。高糖组P21mRNA表达明显增加为正常对照组的3.89倍(P<0.01);FSC为正常对照组的1.42倍(P<0.01)。不同浓度胰岛素组系膜细胞P21mRNA表达及FSC大小随胰岛素浓度增加而增加,但无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)P21mRNA在正常肾小球系膜细胞有一定表达。(2)高糖刺激可使系膜细胞P21mRNA表达上调,且与渗透压无明显关系。(3)P21mRNA表达上调可导致系膜细胞肥大,在糖尿病肾病发病机制中起重要作用。     

泉州地区466名儿童血清锌、铜、铁含量分析

泉州地区466名健康儿童血清锌含量13.56±6.60μmol/L,血清铜17.8±8.12μmol/L,铜/锌比值为1.31,339名儿童血清铁含量19.48±9.27μmol/L。饮用不同水源儿童血清锌、铜、铁含量无显著差异。     

Ang-2和TM-1与糖尿病鼠肾新生血管生成关系的初步研究

目的：探讨糖尿病肾脏促血管生成素-2（angiopoietin-2,Ang-2）和血栓调节蛋白（thrombomodulin-1,TM-1）表达变化及其与新生血管生成的关系。方法：用雄性SD大鼠建立STZ诱导的糖尿病肾病模型,设正常对照和模型组,分别于2、4、8、12、16、20、24周清洁取肾,采用免疫组织化学染色,定量分析肾脏Ang-2和血栓调节蛋白TM-1表达变化,用逆转录聚合酶链式反应技术（RT-PCR）检测肾脏Ang-2 mRNA的表达。结果：糖尿病组仅于16周和20周时探及肾组织Ang-2 mRNA表达;免疫组化显示糖尿病肾脏12周时皮质区肾小管周围出现Ang-2着染微血管,16周表达最强;整个实验期间对照组未探及Ang-2 mRNA和蛋白表达;TM-1突出表达于肾小球,糖尿病组2~20周肾小球TM-1着染显著高于对照组（P〈0.001）,峰期在4~16周,24周时低于对照组,但无统计学意义（P〉0.05）,TM-1表达变化与肾重/体重、肾小球面积和体积呈正相关。结论：糖尿病肾脏中后期皮质区肾小管管周围存在Ang-2着染的新生微血管,Ang-2和TM-1的异常表达与肾脏新生血管生成有关。     

血管生成素1和血栓调节蛋白1在STZ鼠肾脏中的表达及其意义

目的：探讨血管生成素1（angiopoietin-1,Ang-1）和血栓调节蛋白1（thrombomodulin-1,TM-1）在糖尿病鼠肾脏中的表达变化及其与肾脏微血管病变的关系. 方法：STZ诱导的糖尿病大鼠肾病模型,设正常对照和模型组,于2、4、8、12、16、20、24周,采用免疫组化观察肾脏Ang-1和TM-1表达变化以及RT-PCR观察肾脏Ang-1mRNA表达,并行相关性分析. 结果：糖尿病组4和8周时肾脏Ang-1mRNA表达显著上调, 24周时明显低于对照组;糖尿病组4～24周免疫组化显示肾小球Ang-1着染均显著高于对照组,峰值在4～8周,12周后逐渐下调;糖尿病组2～20周肾小球TM-1明显增强;Ang-1和TM-1呈正相关. 结论：糖尿病肾脏存在Ang-1和TM-1的异常改变,表现为早中期表达上调,后期表达下调,并且这种改变可能与糖尿病肾脏新生血管的生成有关.     

血管生成素及其受体、血管内皮生长因子与糖尿病肾脏微血管病变的关系

目的 探讨血管生成素(Ang)及其受体(Tie-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾脏中的表达变化规律，研究其与肾脏微血管结构变化的关系。 方法 将雄性成年SD大鼠分成糖尿病组和对照组，糖尿病组采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造模。采用RT-PCR以及免疫组化技术，连续多时点观察肾脏Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF以及血栓调节蛋白(TM-1) mRNA和蛋白表达变化规律，并分析其相关性。 结果 (1)糖尿病组Ang-1 mRNA于第4、8周时显著上调(吸光度A，83.58±10.23、88.59±6.97)， 第24周时低于对照组 (47.13±8.02比64.53±8.77，P < 0.05)。免疫组化显示Ang-1突出表达于肾小球，糖尿病组第4周后肾小球阳性染色明显强于对照组(A对数值，4周1.64±0.12比1.08±0.16，24周1.24±0.11比1.11±0.17)。(2) 糖尿病组Tie-2 mRNA在4~16周显著高于对照组(A，4周87.31±11.69比63.62±5.61，16周81.75±8.58比60.15±2.66)。免疫组化显示Tie-2突出表达于肾小球，糖尿病组各时点均显著高于对照组，高峰在4~8周。(3)糖尿病组仅在第16和20周时检测到明显的Ang-2 mRNA表达。免疫组化显示12周后仅在皮质区肾小管周围有Ang-2染色的微血管，而在第16周时最明显。(4) 糖尿病组2~20周时肾小球TM-1染色显著高于对照组(A对数值，2周0.99±0.15比0.68±0.17，20周1.03±0.17比0.74±0.13)， 第24周时低于对照组，但差异无统计学意义。(5)糖尿病组VEGF mRNA和蛋白表达均较对照组明显升高。(6) 糖尿病组Ang-1、Tie-2、VEGF和TM-1相互间均呈正相关，它们与尿蛋白、肾重/体重、肾小球体积、肾小球面积也均呈正相关。结论 (1)糖尿病肾脏存在VEGF、Ang及Tie-2表达的改变，早期Ang-1、Tie-2表达上调， 后期下调并伴Ang-2表达上调。(2)Ang、Tie及VEGF的改变与糖尿病肾脏新生血管生成有关，其Ang-1下调和VEGF、Ang-2上调起重要作用。(3)糖尿病肾脏中后期皮质区肾小管周围已有Ang-2染色的新生微血管生成。     

切应力在糖尿病肾病发病机制中的作用研究

糖尿病肾病是糖尿病的慢性并发症之一,其发病机制尚不清。切应力是液体沿管腔长轴方向对管壁施加的作用力。切应力作用于肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞,调节一系列细胞因子的表达和信号通路的传导,参与糖尿病肾病的发生发展。     

TGF-β/CTGF在肾脏纤维化机制中的作用及中药治疗影响

肾脏纤维化是各种原因肾脏疾病进展到慢性肾衰竭的共同途径和主要病理基础,包括肾小球硬化、肾小管萎缩和毁损、细胞外基质(ECM)异常增多和过度沉积的病理过程.转化生长因子-β(TGF-β)和结缔组织生长因子(CTGF)在肾脏纤维化的发生、发展中起作用.肾脏纤维化的治疗或逆转是目前研究的热点和难点,而中医中药在此方面研究很活跃并取得一定的成效,单味中药或应用复方制剂对肾脏纤维化进程的影响更是有很好前景的研究方向.     

切应力作用下肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物(tPA和uPA)表达的变化及意义

检测切应力作用下肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物tPA和uPA mRNA表达的变化,探讨糖尿病肾病早期小管间质细胞外基质重塑的可能机制.用5 dyn/cm2和10 dyn/cm2的切应力处理肾近端小管上皮细胞(NRK-52E),作用时间分别为1、3和6 h,用RT-PCR法检测tPA及uPA mRNA的表达.结果表明:切应力呈大小和时间依赖性下调肾小管上皮细胞tPA及uPA mRNA的表达.在糖尿病肾病早期,高滤过引起的切应力增加可抑制肾近端小管上皮细胞tPA和uPA mRNA表达,导致肾小管间质纤维蛋白溶解活性降低,参与小管间质细胞外基质的重塑.     

高糖刺激肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4及p21的表达及其意义

目的探讨早期糖尿病肾病(DN)肾小球系膜细胞(GMC)中葡萄糖转运蛋白(GLUT)4、p21mRNA表达变化及其与GMC肥大的关系。方法大鼠1097系膜细胞株分为高糖组、甘露醇组、不同浓度胰岛素组、高糖加不同浓度胰岛素组、正常对照组。用RT-PCR法检测各组GLUT4mRNA、p21mRNA的表达。流式细胞仪测各组GMC体积大小。结果正常对照组GMC有一定GLUT4mRNA、p21mRNA表达。高糖组GLUT4mRNA表达明显下降,p21mRNA表达明显增加。胰岛素刺激GMCGLUT4mRNA表达存在浓度依赖关系。p21mRNA表达越高,细胞前向角度散射光(FSC)越强,GMC体积越大。结论高糖刺激导致GMC肥大,GMC的p21mRNA表达上调和GLUT4mRNA表达下调与DN早期GMC肥大-肾小球肥大有关。