TNF-α对培养乳鼠心肌细胞的作用

目的:探讨不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对培养的乳鼠心肌细胞活力、蛋白合成、分泌AngⅡ及AT1受体表达的影响。方法: 体外培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为对照组和不同浓度TNF-α（20、40、60、80、100 μg/L）干预组,用BCA法测定心肌细胞蛋白合成总量,MTT比色法和LDH检测反映心肌细胞的活力,ELISA法检测心肌细胞培养液中AngⅡ的含量,免疫细胞化学染色法检测心肌细胞膜AT1受体表达的变化。结果: TNF-α浓度依赖性地增强乳鼠心肌细胞活力、增加蛋白合成,20、40、60、80 μg/L TNF-α组细胞活力较对照组分别增加1.21（P<0.05)、1.42、1.51和1.73倍（均P<0.01),蛋白合成分别增加27.8%（P<0.05）、38.9%、46%和66.7%（均P<0.01）,而LDH含量差异无显著性。100 μg/L TNF-α组与对照组比较,心肌细胞活力降低18.5%（P<0.01）、蛋白合成降低18.3%（P<0.01）及心肌LDH生成增加1.48倍（P<0.01)。TNF-α浓度依赖性地增加乳鼠心肌细胞AngⅡ分泌,与对照组比较分别增加0.5、1.1、1.6、3和3.6倍（均P<0.01）。TNF-α还具有诱导AT1受体的表达的作用。结论: TNF-α可促进心肌细胞内源性AngⅡ产生,引起心肌细胞活力、蛋白合成改变,AT1受体表达上调,可能介导了心肌肥大、心肌受损等心肌改建的病理生理过程。     

神经细胞黏附分子通过非Wnt依赖的β-catenin途径促进小鼠黑色素瘤细胞增殖

 目的：研究神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule, NCAM）对小鼠黑色素瘤B16-F0细胞增殖的影响及其分子机制。方法：采用RNA干扰在B16-F0细胞中基因沉默NCAM,通过MTT和软琼脂克隆形成实验考察细胞增殖能力的变化;通过小鼠皮下肿瘤移植实验考察体内黑色素瘤生长的变化;使用免疫印迹筛选出受NCAM影响的信号分子,在此基础上使用RNA干扰和高表达实验确定介导NCAM调控增殖的主要信号分子。结果：NCAM基因沉默后B16-F0细胞的增殖能力和克隆形成能力明显降低,细胞在小鼠皮下形成的黑色素瘤的生长也明显受到抑制。其中,β-catenin介导了NCAM对于B16-F0细胞增殖的调控,但NCAM对于β-catenin的调控不依赖于经典的Wnt通路。结论：NCAM通过Wnt非依赖性的β-catenin通路促进小鼠黑色素瘤细胞的增殖。     

用垂直转头密度梯度离心法研究硒对鼠肝核糖体合成的影响

目的 :测定多聚核糖体含量及多聚程度的分布对研究生物组织的生理生化现象和代谢过程有重要意义。方法 :我们把断奶一周的ＳＤ系大鼠 (体重 60～ 70ｇ)随机分为低硒组 ,加硒Ⅰ组和Ⅱ组 ,喂养 8周 ,禁食 1 2ｈ ,断头取出肝脏 ,离心得去线粒体上清液 ,再加入ＤＯＣ(脱氧胆酸钠 ) ,用差速和不连续梯度离心法分离得总核糖体和多聚核糖体。将制备的多聚核糖体铺放在 1 5%～ 55%的Ｓ形蔗糖密度梯度液顶部 ,采用ＲＰＶ50Ｔ垂直转头 ,1 0℃ ,40 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 9ｍｉｎ(日立ＳＣＰ 85Ｈ超速离心机 )。ＤＧＦ Ｕ型密度梯度仪上取法收集 ,同时检测…     

脱氢表雄酮对内皮细胞NO,ET-1生成及ICAM-1表达的影响

目的:观察脱氢表雄酮对内皮细胞NO合成、ET-1分泌及细胞表面ICAM-1表达的影响.方法:培养的人脐静脉内皮细胞系ECV304经不同浓度和不同作用时间DHEA处理后,采用硝酸还原酶及放免法分别测定培养液中NO及ET-1水平,用SABC免疫组化法观察细胞表面ICAM-1的表达.结果:与对照组相比,随着DHEA浓度的增加,培养液中NO的含量从(387±12)降至(242±11)μmol/L(P<0.05),而ET-1的浓度却从(397±13)增至(626±29)ng/L(P<0.05).随着时间的延长,各对照组培养液中NO含量均无明显变化(P>0.05),而DHEA组NO生成量却逐渐降低(P<0.05),呈时间依赖.培养液中ET-1浓度无论是对照组还是DHEA组均随时间的延长而升高(P<0.05),但DHEA组升高的更为明显.无论是增加浓度还是延长时间,DHEA均不影响细胞表面ICAM-1的表达.结论:DHEA可通过调节内皮细胞NO及ET-1生成量对血管功能进行调控.     

双脉冲低频刺激诱导成年大鼠海马CA1区NMDA受体依赖性长时程压抑

目的：研究诱导成年大鼠海马CA1区长时程压抑（long-term depression,LTD）的有效刺激参数及其受体机制.方法：成年雄性SD大鼠断头取脑制作海马脑薄片,采用细胞外场电位记录技术,用不同刺激参数刺激海马CA1区Schaffer传入纤维,记录海马CA1区LTD,寻找有效探讨诱导成年大鼠海马CA1区LTD的刺激参数及其受体机制.结果：双脉冲间隔（paired-pulse interval,PPI）为200 ms,频率1 Hz,900对双脉冲为1组,共2组,组间隔10 min的双脉冲低频刺激（paired-pulse low frequency stimulation,PP-LFS）能够有效诱导海马CA1区LTD,60 min和120 min测定其细胞外场兴奋性突触后电位（fEPSP）斜率,结果分别为前对照的（72.33±3.19）％和（69.11±2.80）％;与PP-LFS相同、仅仅刺激强度增加1倍的高强度的双脉冲低频刺激（high-intensity paired-pulse low frequency stimulation,HI-PP-LFS）也能有效诱导海马CA1区LTD,60 min和120m in测定其细胞外场兴奋性突角后电位（fEPSP）斜率,结果分别为前对照的（50.75±2.10）％和（50.90±5.52）％;NMDA受体拮抗剂APV能有效阻断PP-LFS和HI-PP-LFS诱导的LTD.结论：PP-LFS可有效诱导成年大鼠海马CAI区LTD,HI-PP-LFS可诱导产生更大幅度的LTD,且这种LTD是NMDAR依赖性的.     

TNF-α对培养乳鼠心肌成纤维细胞的作用

目的:探讨不同浓度TNF-α对培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌AngⅡ、胶原及AT1受体表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸测定法观察成纤维细胞培养上清胶原含量,酶免法检测心肌成纤维细胞培养液AngⅡ含量,免疫细胞化学法观察心肌成纤维细胞膜AT1受体的表达变化。结果:TNF-α呈浓度依赖性的促进培养的乳鼠心肌成纤维细胞分泌AngⅡ和胶原,促进心肌成纤维细胞增殖及AT1受体的表达。结论:TNF-α促进心肌成纤维细胞分泌AngⅡ介导了心肌纤维化而参与心肌改建。