山姜素通过促进IL-6启动子CpG岛区域胞嘧啶甲基化并抑制表达

目的 通过检测山姜素对鼠巨噬细胞(RAW246.7)IL-6启动子部位CpG岛二核苷酸甲基化修饰状态及IL-6合成的影响,揭示诱导甲基化修饰是山姜素调控炎症分子表达的重要机制。方法 RAW246.7按照不同干预分为对照组、山姜素组(终质量浓度分别为100、200、500μg/ml以及1 mg/ml)、山姜素+GW9662组以及山姜素+DNMT3A(DNA甲基转移酶3A)SiRNA组,孵育96 h后经亚硫酸氢钠处理。亚硫酸氢盐测序PCR分析IL-6启动子序列碱基信息,甲基化PCR分析以上序列中CpG二核苷酸甲基化修饰状态,Western blot法检测RAW246.7核内PPAR以及DNMT3A含量,ELISA法检测IL-6表达水平。结果经Cpgplot数据库确认鼠巨噬细胞IL-6转录起始点上游300～1 300 bp部位存在典型CpG岛,山姜素可呈剂量依赖性促进该岛内CpG二核苷酸甲基化修饰。山姜素可促进核内DNMT3A合成,GW9662可阻断促进作用,而干扰DNMT3A不影响PPAR表达;另外,GW9662以及DNMT3A干扰均可完全逆转山姜素对甲基化修饰的促进;但GW9662更明显恢复了IL-6的合成。结论山姜素可通过PPAR/DNMT3A通路促进RAW246.7IL-6启动子CpG岛内CpG二核苷酸甲基化修饰,从而抑制IL-6表达。     

间歇性低氧致树突状细胞迁徙能力改变及其通路机制探讨

目的：通过模拟人阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）间歇性低氧（IH）环境,观察其对人外周血来源树突状细胞（DCs）迁徙能力的影响,并通过干预RelB、p38的表达探讨IH致DCs迁徙能力改变的可能通路机制。方法培养前将DCs分为RelB、p38干扰及非干扰质粒组。利用间歇低氧舱设置低氧环境,其中,给氧浓度为0．5％、1．5％、5．0％、10．0％,低氧／再氧合时间比为1∶1、1∶3、1∶5、1∶9,常氧对照组予以持续21．0％氧浓度供应。体外培养结束后蛋白质印迹法检测RelB、p38的表达,侵袭小室检测DCs的迁徙能力。结果相对于常氧,体外IH下DCs整体迁徙能力下降,且DCs迁徙能力与IH环境下平均氧分压水平呈正相关（r＝0．867,P＜0．05）,IH可促进DCs胞内RelB、p38表达,而干预二者表达均未逆转IH下迁徙能力的改变。结论体外IH可导致DCs迁徙能力下降,且可能与RelB、p38激活无关。     

静脉药瘾者继发败血症致脑出血1例

败血症和脑出血都是临床常见病,但两者同时存在的病例却较罕见[1-9],现将本院收治静脉药瘾者继发败血症致脑出血1例报道如下:1临床资料患者,曾某,男,37岁。因"反复发热7d,意识欠清2d"于2011年9月20日入本院感染科。患者于2011年9月13日无明显诱因出现发热,体温达39.7℃,伴有乏力感,不伴头     

情景模拟结合混合式教学法在诊断学教学中对提高医学生问诊能力的效果分析

目的探讨情景模拟结合混合式教学法在诊断学教学中对提高医学生问诊能力的作用。方法按随机数字表法选取 2018年 3—6月湖南医药学院 2015级本科临床医学专业两个教学班 232名学生为研究对象,将其分为实验组(112人,实施情景模拟结合混合式教学法)和对照组(120人,采用传统教学法),教学结束后,比较两组学生诊断学问诊考核成绩,并通过问卷调查、教学满意度和学生访谈进行教学效果的评价。结果实验组诊断学问诊考核成绩(31.59±4.52)分明显高于对照组(27.08±5.03)分(t＝7.163,P＜0.01),并且,实验组在问卷调查、教学满意度和学生访谈等方面对诊断学问诊教学效果的评价优于对照组(P＜0.01)。结论情景模拟结合混合式教学法可显著提高医学生问诊能力,值得在教学中推广使用。     

基于TBL的探究式翻转课堂教学模式在诊断学教学中的应用

目的 探讨基于团队学习（team-based learning,TBL）的探究式翻转课堂教学模式在诊断学教学中的应用效果。方法 选取笔者学校2015级临床医学专业8个行政班248名学生为研究对象,采用数字表法将其随机分为实验组（127人）和对照组（121人）,实验组实施TBL结合探究式翻转课堂教学模式,对照组应用传统教学模式,学期末比较两组学生诊断学期末理论考试和实践操作考核成绩,并通过问卷调查及师生访谈等方式了解学生对新型教学模式的效果评价。结果 实验组学生诊断学期末理论考试及实践操作考核成绩均显著高于对照组（P<0.01）,并且对诊断学教学效果的评价明显优于对照组（P<0.01）,同时,师生访谈显示新型教学模式能提高学生学习积极性和综合能力。结论 基于TBL的探究式翻转课堂教学模式能明显提升诊断学教学效果,可在临床医学专业课程中进行推广。     

MeCP2促进山姜素对鼠巨噬细胞炎性因子表达的抑制及其分子机制

通过分析甲基CpG结合蛋白2(methyl CpG binding protein 2, MeCP2)对山姜素作用下鼠巨噬细胞(RAW246.7)合成IL-6和TNF-α的影响及作用机制,揭示山姜素与MeCP2联合应用对于炎症性疾病的干预潜力。用重组质粒pEGFP-C1-MeCP2以及空白质粒pGL-basic分别转染RAW246.7,后将细胞随机分为对照组、山姜素组(终浓度1 mg/mL)以及山姜素+GW9662(0.1 mmol/L)组。孵育72 h后,ELISA检测培养液中IL-6和TNF-α表达水平,Western blotting分别检测细胞核内过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor, PPAR)、MeCP2以及胞质中NLRP3、pro-Caspase-1和各聚集状态凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)含量,并采用免疫荧光染色法检测ASC斑点形成情况。结果显示,与空白质粒转染比较,重组质粒转染RAW246.7在山姜素作用下合成IL-6和TNF-α的水平更低;而在对照组以及GW9662组,转染重组质粒对炎性因子合成无明显影响。山姜素对MeCP2表达无促进作用,且重组质粒转染对PPAR表达亦无影响。另外,山姜素可明显抑制RAW246.7胞质NLRP3合成,但对pro-Caspase-1含量以及ASC聚集状态无显著影响;而过表达MeCP2可遏制pro-Caspase-1合成并促进ASC解聚。由此,MeCP2可通过抑制炎症小体通路以促进山姜素对鼠巨噬细胞炎性因子合成的抑制,提示山姜素与MeCP2联合有望成为炎症性疾病防治的新策略。     

p300诱导的乙酰化修饰参与脂多糖诱导的炎症介质合成

目的 探讨辅助激活因子p300诱导的乙酰化修饰介入脂多糖（LPS）诱导的炎症介质合成过程及其作用机制。方法 Agilent Sureprint G3 Mouse Gene Expression V2 微阵列芯片以及蛋白免疫印迹（WB）技术联合于小鼠巨噬细胞（RAW246.7）中筛选表达水平与LPS刺激强度相关的分子；凝胶电泳迁移实验（EMSA）以及染色质免疫共沉淀（chip-qpcr）方法验证相关分子与炎症基因IL-6以及TNF-α启动子部位的结合现象；相关分子过表达或干扰质粒转染RAW246.7后，WB法检测转染质粒的作用效果，ELISA方法检测IL-6以及TNF-α合成水平，染色质免疫沉淀-测序技术（chip-seq）分析炎症基因启动子部位相关分子的结合以及H3K27的乙酰化修饰水平。结果 微阵列芯片以及WB技术共同证实p300的表达与LPS刺激强度存在较好关联。免疫共沉淀证实了p300与c-myb存在结合现象。EMSA证实c-myb可与炎症基因启动子序列结合，而p300不能直接结合；chipqPCR表明当c-myb被干扰时，p300不能与炎症基因启动子序列结合。WB检测显示过表达或干扰质粒均能够干预相关分子的表达，且p65、p300以及c-myb 3者在表达上无相互影响。ELISA联合chip-seq显示与对照组比较，p300过表达以及LPS刺激均可导致炎症基因启动子部位结合的p300和H3K27乙酰化修饰水平增加，从而促进p65与启动子的结合和炎症基因转录（P<0.05）；而c-myb表达被干扰时，p300过表达以及LPS刺激诱导的p300与p65在启动子的结合、H3K27乙酰化修饰和炎症介质合成均被遏制（P<0.05）。在p65干扰相关组别中，p65与启动子的结合以及炎症基因转录均被抑制（P<0.05），但未对p300的结合以及H3K27乙酰化水平造成影响。结论 LPS刺激可诱导p300合成，后者在c-myb介导下结合于炎症基因启动子区域，并通过乙酰化H3K27易化启动子与p65结合，从而促进炎症基因表达。