伤寒沙门氏菌耐药性与外膜蛋白关系的研究

对临床分离的２６株伤寒沙门氏菌进行了外膜蛋白，质粒，药物敏感试验及氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）活性测定。结果显示：２６株菌中有８株耐氯霉素，其中７株对氯霉素等４种抗生素高度耐药（ＭＩＣ＞２００μｇ／ｍｌ），均含９８．６Ｍｄ大质粒，１株对氯霉素敏感而耐氨苄青霉素的菌株亦含该质粒。８株菌除１株外其氯霉素乙酰转移酶活性均为阳性。外膜蛋白指纹图谱示伤寒沙门氏菌均含５２、３８、３７、３６ＫＤ主蛋白，其中有３株耐药菌３７ＫＤ蛋白含量减少或缺失，实验表明伤寒沙门氏菌耐药性与质粒相关，ＣＡＴ由质粒调控，个别菌株存在非酶性耐药，可能与外膜蛋白的减少或缺失有关。     

肿瘤微卫生不稳定性的研究进展

1993年首次在遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC)和散发性结肠癌中发现微卫星不稳定性(MSI)现象后,MSI成为研究热点,得到了广泛而深入的研究.MSI的发现及研究进展,在肿瘤生物学和肿瘤临床诊疗上开辟了新的一页.本综述对MSI的一些基本概念、检测方法、其肿瘤生物学及临床意义作一概述.     

BRD7基因转染对鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨鼻咽癌负相关基因BRD7对鼻咽癌细胞系HNE1生长的影响。方法：构建BRD7基因真核表达载体pcDNA3.1( )/BRD7重组体,采用脂质体介导转染技术,将BRD7真核表达重组粒和空载体质粒分别导入鼻咽癌细胞系HNE1,Southern杂交和RT－PCR分别检测外源性DNA的整合和BRD7基因的表达,并借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、流式细胞计数和裸鼠接种方法对转染细胞的生物学行为进行了检测。结果：转染BRD7基因的HNE1生长倍增时间为53h,较HNE1（23．9h)和空载体转染HNE1（24．1h）明显延长,流式细胞仪表明,BRD7表达升高延缓细胞由G0－G1期进入S期,BRD7转染HNE1在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降（P＜0．01）,裸鼠接种试验显示BRD7基因转染细胞HNE1生长速度受到抑制。结论：BRD7基因重表达有助于HNE1的恶性表型的逆转;BRD7是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因良好的候选者。     

鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA文库的构建及鼻咽癌表达上调基因的筛选

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方常见的上皮源性恶性肿瘤,流行病学研究调查,鼻咽癌的发生与EB病毒感染、某些环境理化因素及遗传因素有关,但其分子机理仍不十分清楚.鼻咽癌的发生可能涉及到多个瘤基因的激活和抑瘤基因的失活,但目前国际上仍未获得鼻咽癌特异相关基因.为了进一步筛选与克隆鼻咽癌特异相关基因,我们构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA文库,以供进一步深入研究.     

精细定位和克隆9p21-22区域内鼻咽癌候选抑瘤基因

目的：进一步精细限定鼻咽癌９p２１－２２区域等位基因杂合性丢失的频率和范围,筛选 和克隆其共同缺失区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用１１个定位于９p２１－２ ２区域的高密度微卫星位点,检测２５例低分化鼻咽癌患者的杂合笥技失,确定其共同缺失区;用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ筛出在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１和鼻咽癌活检组织中表达下调的、定位于共同缺失区内的３’末端ＥＳＴs（Ｅｘｐｒｉｓｓ Ｓｅｑｕｅｎｃ     

F-Box蛋白家族新成员FBXO30基因的融合表达

采用非定向克隆技术将FBXO3 0 (F boxonlyprotein 3 0 )基因编码区cDNA序列克隆到哺乳类融合表达载体pEGFP C2中 ,通过脂质体转染 ,将pEGFP C2 /FBX0 3 0导入NIH 3T3细胞株 ,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。采用定向克隆技术将FBXO3 0基因编码区cDNA序列克隆到表达载体pGEX 4T 2中 ,转化大肠杆菌。结果显示FBXO3 0蛋白主要存在于胞浆中。十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹均检测到一条约 6 5 5kD左右的新增蛋白泳带。此外 ,还用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱获得了纯化的该融合表达产物。FBXO3 0蛋白为胞浆蛋白 ,以可溶性的形式存在 ,它能在原核表达体系中稳定表达 ,这对制备其特异性抗体和从蛋白水平研究其功能均具有十分重要的意义     

F—Box蛋白家族新成员FBX030基因的融合表达

采用非定向克隆技术将FBOX30（F－box only protein 30)基因编码区cDNA序列克隆到哺乳类融合表达载体pEGFP-C2中,通过脂质体转染,将pEGFP-C2/FBX030导入NIH 3T3细胞株,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。采用定向克隆技术将FBXO30基因编码区cDNA序列克隆到表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌,结果显示FBXO30蛋白主要存在于胞浆中,十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹均检测到一条约65．5kD左右的新增蛋白泳带,此外,还用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱获得了纯化的该融合表达产物,FBXO30蛋白为胞浆蛋白,以可溶性的形式存在,它能在原核表达体系中稳定表达,这对制备其特异性抗体和从蛋白水平研究其功能均具有十分重要的意义。     

Molecular cloning and characterization of NAG-7: a novel gene downregulated i n human nasopharyngeal carcinoma

目的　分离位于染色体 3p2 4 2 6区域中鼻咽癌新的抑瘤基因。方法　在染色体 3p2 4 2 6鼻咽癌杂合性丢失 (lossofheterogosity ,LOH)高频区 ,用RT PCR及Northern杂交检测了2 0个表达序列标记 (expressedsequencetag ,EST)在鼻咽癌细胞株HNE 1和原代培养的正常鼻咽上皮细胞中的表达水平 ,并对其中一个在鼻咽癌细胞株HNE 1中表达下调的EST在 19例鼻咽癌活检组织中的表达进行了检测。用cDNA文库筛选方法获得其全长cDNA序列 ,对该序列进行了初步分析。结果　获得一个位于染色体 3p2 5 3的新基因 ,命名为NAG 7基因。该基因在 2 6 3% (5 19)的鼻咽癌活检组织中表达下调。它全长 16 6 7bp ,其开放阅读框 (openreadingframe ,ORF)编码一个含 94个氨基酸的碱性蛋白质 ,分子量为 110 2 3 87道尔顿 ,预测为一跨膜蛋白质。它含有一蛋白激酶C磷酸化位点和肉豆蔻基位点。迄今为止 ,NAG 7基因序列在基因库中未见任何同源性基因。结论　NAG 7基因是一个在鼻咽癌中表达下调的新基因 ,它的改变可能参与了鼻咽癌的发生发展     

鼻咽癌细胞中表达上调的新基因 NAG23 (FBXO 30) 的克隆与分析

目的：分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581（6q25.3-27）附近与鼻咽癌相关的新基因。方法：运用差异RT－PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签（expressed sequence tage,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA ,对该序列进行初步分析。结果：获得了一个位于6q25．3－27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23（FBXO30）(GenBank收录编号：AF248640）。该基因在68．9％的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F－box基序。结论：NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F－box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。