人胎脑神经生长因子4基因与质粒载体重组体的体外构建

BACKGROUND： Neurotrophin-4 （NT-4） can promote neuronal growth, development, differentiation, maturation, and survival. NT-4 can also improve recovery and regeneration of injured neurons, but cannot pass through the blood-brain barrier, which limits its activity in the central nervous system. Delivering NT-4 into the central nervous system v/a cells or vectors may have therapeutic benefit. OBJECTIVE： To construct a recombinant vector with a human embryonic brain-derived NT-4 gene and pEGFP-NI. DESIGN, TIME AND SETTING： Neural genetic engineering experiment. The study was performed at the Neuroscience Institute of Kunming Medical College between October 2007 and March 2008. MATERIALS： The pEGFP-N1 plasmid vector was provided by Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences; embryonic brain tissues were provided by the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College. TRIzol RNA extraction Kit was purchased from Sigma （USA）, One Step RNA PCR Kit （AMV） etc. were from Takara （Dalian, China）. METHODS： Total RNA was extracted from human embryonic brain tissues using Trizol. The agarose gel electrophoresis showed two bands： 18 S and 28 S, which were essential subunits of total RNA. The human NT-4 DNA was obtained via RT-PCR and inserted into the pEGFP-N1 vector using ligation and transformation reaction. MAIN OUTCOME MEASURES： The sequencing results of the DNA in the recombinant of NT-4- pEGFP-NI. RESULTS： The NT-4-pEGFP-N1 vector was sequence-verified and showed the expected molecular weight. CONCLUSION： The recombinant of NT-4-pEGFP-N1 was constructed successfully in vitro.     

安阳地区不同食管鳞癌标本HPV感染率的比较研究

目的 对安阳地区的食管鳞癌新鲜手术标本和石蜡标本进行HPV检测,比较两种不同标本来源食管鳞癌HPV感染检测结果,统计学分析二者之间的差异,并同其他区域检测结果进行比较,分析不同标本对检测结果的影响.方法 对安阳的23例新鲜手术标本及23例石蜡标本分别进行核酸提取;分别用通用引物PCR鉴定,并用人乳头瘤病毒核酸扩增分型检测试剂盒对样品进行分型检测;比较两种标本来源检测结果并进行统计分析;比较分析检测结果与其他地区检测结果的差异.结果 经检测新鲜标本HPV感染率为82.6％,其中HPV16型感染率34.8％,HPV18型感染率34.8％.石蜡包埋组织标本HPV感染率78.2％,其中HPV16型感染率30.4％,HPV18型感染率17.4％.结论 首次证明两种来源标本对HPV检测结果无显著性影响,均可作为检测HPV的样本,为HPV科研检测提供更广的标本来源.     

临床常用中药制剂对OVCAR3细胞的药效学比较

目的比较临床常用中药制剂对OVCAR3细胞OVCAR3的药效学。方法以采用实时无标记细胞分析(RTCA)检测榄香烯注射液、参芪扶正注射液、艾迪注射液、复方苦参注射液、消癌平注射液、康艾注射液、康莱特注射液对OVCAR3细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,JC-1检测上述药物对肿瘤细胞线粒体膜电位的影响,CCK8法检测它们对正常细胞系MRC-5的毒性作用。结果榄香烯注射液、消癌平注射液、复方苦参注射液、艾迪注射液抑制OVCAR3细胞增殖的IC₅₀值分别为(44.98±0.13)μg/mL、(258.78±6.53)mg/mL、(121.73±1.23)mg/mL、(51.73±0.51)mg/mL,中、高剂量榄香烯注射液有明显抑制OVCAR3细胞迁移的作用;除康莱特注射液外,其他药物都有一定程度抑制OVCAR3细胞侵袭的作用。榄香烯注射液、消癌平注射液在IC₅₀剂量下作用24 h后,可检测到线粒体膜电位的改变。榄香烯注射液、艾迪注射液IC_50(MRC?5)/IC_50(OVCAR3)均大于1。结论以OVCAR3细胞为对象时,榄香烯注射液抗肿瘤作用最好,其次是艾迪注射液。     

成年脑内神经干细胞的研究进展

以前 ,人们普遍认为中枢神经系统的神经元发生在出生前或出生后不久即停止。然而 ,近 30年来 ,许多研究报道成年后仍有新的神经元继续加入哺乳动物的脑部 ,这些生成神经元的前体细胞 ,一般位于脑室侧壁。它们从这些增殖性区域向离它们最近的靶组织迁移并进行分化 [1 ]。在体外 ,这些神经干细胞能被生长因子或细胞素诱导增殖 ,并在不同环境因子的作用下具有不同的分化。近年来 ,有关生长因子和细胞素对神经干细胞的诱导及多能神经干细胞的移植研究等已成为人们关注的焦点。本文对神经干细胞的研究进展作一简要综述并对相关问题进行初步探讨。…     

胚胎大鼠神经干细胞体外黑质细胞定向诱导的实验研究(摘要)

目的探寻体外定向诱导胚胎大鼠神经干细胞向黑质细胞分化的新方法.方法用成年大鼠黑质匀浆液(HSN)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及HSN+bFGF对取自胎龄期12～16d(E12-16)胚胎大鼠脑室下区培养的神经干细胞(经Nestin抗体免疫组化及透射电镜证实)进行体外诱导培养48?h后,以酪氨酸羟化酶(TH)单抗免疫组化检测其是否向黑质细胞分化(设空白对照组);并用荧光分光光度法测定HSN+bFGF诱导后0,24,48h神经干细胞培养液中多巴胺含量,数据分析采用配对t检验分析(自身对照).结果(1)HSN+bFGF诱导组,TH单抗免疫组化出现阳性细胞;(2)HSN+bFGF诱导后,0,24,48h多巴胺含量对比分析;48h与24h(P<0.01),48h与0h(P<0.05)相比,多巴胺含量增加,而24h与0h(P>0.05)相比则无增加趋势.结论(1)用成年大鼠黑质匀浆液+bFGF能定向诱导神经干细胞向黑质细胞分化;诱导而成的黑质细胞已具有多巴胺分泌功能,诱导后24～48h为多巴胺分泌的一个峰值;(2)透射电镜显示神经干细胞超微结构是除免疫组化外鉴定神经干细胞的另一种方法.     

帕金森病冻结步态与躯体形式障碍临床分析

目的探讨帕金森病(parkingson’s disease,PD)患者冻结步态与躯体转化形式障碍是否相关及是否有相互促进作用,以期对帕金森病患者的冻结步态体征尽早地进行干预治疗.方法选取(1.云南省第三人民医院门诊及住院的、明确诊断为帕金森病,同时伴有冻结步态及躯体转化形式障碍的患者20例,给予抗抑郁药艾司西酞普兰(10~20 mg/d)加心理暗示治疗(森田疗法),同时给服抗帕金森病药(多巴丝肼及普拉克索等)共6周,继而采用改良Hoehn-Yahr分级量表评价治疗前后帕金森病症状及冻结步态体征有无变化.结果 20例患者中抗帕金森病治疗联合抗躯体转化形式障碍治疗后,18例患者由改良Hoehn-Yahr分级评估4级转为2.5-3级,有1例患者因不能耐受药物副作用而停止治疗,1例患者药物依从性不好,放弃治疗.结论帕金森病患者冻结步态与躯体形式障碍相关,与焦虑抑郁障碍相关,躯体形式障碍加重帕金森病患者的冻结步态,规范化治疗躯体形式障碍可以改善帕金森病冻结步态症状.抗帕金森病治疗应重视情绪障碍治疗,该治疗能提高帕金森病患者的生活质量.     

长期900MHz射频电磁辐射对NIH/3T3细胞凋亡与周期的影响

目的探讨长期900 MHz电磁辐射对NIH/3T3细胞凋亡与周期的影响,以为进一步深入研究电磁辐射的细胞生物学效应提供一定理论依据。方法将NIH/3T3细胞分为对照组和辐射组,对照组NIH/3T3细胞为正常条件培养,电磁辐射组用SAR值为4.0 W/kg的900 MHz电磁辐射辐照,辐照时间为2 h/d。分别取正常培养和电磁辐射辐照的4 d、7 d、10 d和12 d的对照组和辐射组NIH/3T3细胞,用流式细胞法进行细胞凋亡和细胞周期检测和分析。结果长期900 MHz电磁辐射引起NIH/3T3细胞出现显著的早期和晚期凋亡。细胞辐照12 d时产生S期阻滞。结论在12 d的辐照周期里,900 MHz电磁辐射持续地诱导NIH/3T3细胞凋亡,在辐照超过10 d后开始对细胞周期产生一定影响。     

原肌球蛋白4通过慢病毒重组体技术应用于脊髓损伤后的作用及 机制研究：随机对照实验方案

BACKGROUND: Tropomyosin 4 level has been found to be an increase in the spinal cord based on the 2-DE/MALDI-TOF/MS method. However, there is little report about the relationship between tropomyosin 4 and pathogenesis and progress of spinal cord injuries. METHODS/DESIGN:Randomized controlled trial: rat models of complete spinal cord transection were made and expression levels of tropomyosin 4 at 3-28 days after modeling were determined by two-dimensional electrophoresis, animo acid serie analysis, quantitative PCR and western blot. Experiment for exporing the genetic mechanism: effects of tropomyosin 4 scilencing by lentivirus recomnination technology on the dendrite length of spinal cord neurons in vitro were observed, and its effects on the neurological function of rats after complete spinal cord transaction were assessed through Basso, Beattie, and Bresnahan scoring. DISCUSSION: This study will be powered to provide a novel and effective treatment strategy for neurological function recovery after spinal cord transection based on the lentivirus recomnination carrying tropomyosin 4, as well as optimistic future for clinical gene treatment of complete spinal cord transaction through figuring out the underlying mechanism. ETHICAL APPROVAL: This study was approved by the Ethics Committee of Kunming Medical University, China. The surgical operation and postoperative care of rats were in line with the rules of Chinese Experimental Animal Protection and Ethics Committee, and the guideline of the National Institutes of Health 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

人乳头瘤病毒感染与不同地域食管癌发生相关性Meta分析

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与不同地域食管癌(EC)发生的病因学关系.方法 在中国知网,检索有关EC发生与HPV感染相关的研究文献,研究纳入标准是:以原位杂交或聚合酶链反应为检测方法检测高危型HPV DNA,并且研究文献所选用病例既有EC组织又有正常对照组织.结果 人选17篇文献中:EC组织标本HPV检出率为44.0％,正常对照组织中HPV阳性率为16.7％,EC组织中HPV感染率与正常对照组织有显著差异(P＜0.05);分布在香港、上海、福建、广东、河南、四川、河北和新疆8个区域的被检标本中HPV感染率存在明显的地域差异(P＜0.05).结论 高危型HPV感染在不同地域普遍存在,可能是EC发生的重要病原因子.