应用环孢菌素A治疗特发性中枢性尿崩症一例

患者男，16岁。主因“口干、多饮多尿1年”于2005年7月入院。患者曾于2004年9月因多饮多尿，尿量7000—10000ml／d第一次住院。经禁水加压试验及相关化验诊断为“特发性中枢尿崩症和亚临床甲状腺功能低减”给予弥凝、左旋甲状腺素等治疗，病情一度好转，4个月前自行停用弥凝，仅服用左旋甲状腺素50μg／d至今。入院时食欲不振，便秘，晨起感恶心无呕吐。尿量约2000ml／d，夜尿2—3次，尿量1000ml左右。既往体健，无颅脑外伤史及其他自身免疫疾病史，无类似疾病家族史。查体：血压90／60mmHg，身高151cm，体重32．5kg。发育不良，营养较差。眉毛稀疏，无胡须、腋毛及阴毛。睾丸发育差，阴茎短小，余均阴性。     

前列腺素E2调节大鼠成骨细胞OCIL基因表达的信号通路研究

探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞破骨细胞抑制性凝集素(osteoclast inhibitory lectin OCIL)mRNA表达的调节及其信号转导机制.培养大鼠原代成骨细胞和UMRl06成骨细胞样细胞,采用不同浓度的PGE2和不同的信号通路调节剂干预细胞后,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测OCILmRNA的表达水平.PGE2、蛋白激酶A(PKA)激动剂福司可林、db-cAMP和钙离子载体A23187均促进OCIL mRNA表达,OCIL mRNA最大上调幅度分别为对照组的2.38倍、4.2倍、4.5倍和5.1倍(均P＜0.01).蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA下调OCILmRNA表达约50%(P＜0.01).PKA抑制剂KT-5720、钙通道阻断剂维拉帕米、钙调蛋白抑制剂W7和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD98059分别下调PGE2诱导的OCIL mRNA表达约56%、40%、65%和60%(均P＜0.01).PKC抑制剂白屈菜红碱促进PGE2诱导的OCIL mRNA表达约30%(P＜0.05).PKA、MAPK和Ca2+/钙调蛋白信号通路介导了PCE2诱导的大鼠成骨细胞OCIL基因表达.

Abstract：

To investigate the regulation of osteoclast inhibitory lectin (OCIL) mRNA expression by prostaglandin E2 ( PGE2 ) in rat osteoblastic cells and the involved signaling pathways. Rat primary osteoblasts and UMR106 osteoblast-like cells were cultured and treated with various doses of PGE2 or regulators of different signaling pathways for different periods of time, the cells were then harvested at indicated dates. Total RNA were isolated and OCIL mRNA expression were studied by real-time PCR. PGE2, Forskolin, db-cAMP, and A23187 increased OCIL mRNA by 2. 38 fold,4. 2 fold,4. 5 fold, and 5. 1 fold ( all P＜0. 01 ) respectively, while PMA downregulated OCIL mRNA expression by 50% ( P＜0. 01 ). KT-5720, verapamil, W7, and PD98059 downregulated PGE2 induced OCIL mRNA expression by 56%, 40%, 65%, and 60%, respectively( all P＜0. 0l ). While chelerythrine enhanced PGE2 induced OCIL mRNA expression by 30% ( P＜0. 05 ). PGE2 up-regulated the expression of OCIL in rat osteoblastic cells via PKA, MAPK, and Ca2+/Calmodulin signaling pathways.     

前列腺素E2调节成骨细胞核因子-κB受体激活物配基和护骨素表达的信号通路研究

目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞核因子-κB受体激活物配基(RANKL)和护骨素(OPG)mRNA表达的调节及其信号转导机制.方法 培养大鼠UMR106成骨细胞,采用不同浓度的PGE:和不同的信号通路调节剂干预细胞后,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果 PGE2、福司可林和db-cAMP均促进RANKL mRNA表达和抑制OPG mRNA的表达,RANKL mRNA表达分别为对照组的2.8倍(P=0.002)、2.2倍(P=0.006)和2.1倍(P=0.005).OPG mRNA表达分别为对照组的12%(P<0.01)、85%(P=0.005)和70%(P=0.013).A23187则下调RANKL和OPG表达58%(P=0.002)和53%(P=0.017).KT-5720下调PGE2诱导的RANKL mRNA表达约53%(P<0.01),而白屈菜红碱、维拉帕米、钙调蛋白抑制剂(W7、KN-62和PD98059)则对PGE:诱导的RANKL mRNA表达无明显影响(P>0.05).KT-5720、维拉帕米和W7分别阻断PGE2对OPG mRNA表达的抑制作用47%(P=0.01)、38%(P=0.029)和43%(P<0.01),而KN-62、PD98059和白屈菜红碱则均不影响PGE2对OPG表达的调节(P>0.05).结论 PKA信号通路介导了PGE2诱导的RANKL表达,而PGE2对OPG表达的下调作用则由PKA和Ca2+钙调蛋白信号通路介导.     

CTLA-4基因多态性与Graves病预后关系的研究

目的:对Graves病(GD)患者CTLA-4基因外显子1第17密码子49位点A/G多态性与GD患者的临床特点及其对抗甲状腺药物的疗效关系进行研究,为临床治疗的决策提供依据.方法:根据Graves病患者服用抗甲状腺药物的效果及其停药后是否复发分为A组(治疗效果较好、预后好组)与B组(难治性或易复发组).应用PCR技术并采用限制性内切酶BbvI来测定其外周血单个核细胞CTLA-4基因外显子1第17密码子49位点A/G多态性.分析其基因表型、基因频率与临床表现及预后的关系.结果:难治性或易复发的GD患者GG基因型及等位基因G频率明显高于治疗效果较好、预后好的GD患者,而AG基因型及等位基因A频率则明显低于治疗效果较好、预后好的GD患者.结论:CTLA-4基因外显子1第17密码子49位点表现为GG基因型可能是Graves病患者对抗甲状腺药疗效差及甲亢易复发的重要原因.     

噻氯匹定对2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白表达的影响

目的：为进一步阐明糖尿病(DM)患者血小板活化状态及抗血小板药物噻氯匹定的治疗作用。方法：采用流式细胞术检测了45例2型糖尿病患者及26例健康志愿者(对照组)血小板表面血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb，GPⅡb，P-选择素及血小板激活复合物-1(PAG-1)表达，并对其中20例2型DM患者应用噻氯匹定治疗(0．25g，qd)2wk，观察对上述指标的影响。结果：DM患者P-选择索及PAG-1表达的荧光强度较对照组明显升高，而GPⅠb表达的荧光强度较对照组下降(P=0．014)，GPⅡb表达则无明显改变(P=0．285)。噻氯匹定治疗2wk可使DM患者P-选择素及PAC-1的表达明显下降，对GPⅡb表达则无明显影响(P=0．815)，GPⅠb表达则上升(P=0．011)。结论：2型DM患者血小板活化增强，出现高凝倾向。噻氯匹定治疗能明显缓解血栓前状态。PAG-1的表达可作为GPⅡb-Ⅲa激活更敏感的新型特异性标志。     

糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ2型受体及Ⅳ型胶原mRNA表达初步研究

研究糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ 2型受体及Ⅳ型胶原的mRNA表达。方法 :大鼠随机分成两组 :单肾切组、糖尿病组。实验第 8周 ,应用RT -PCR检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ 2型受体 (AT2 )及Ⅳ型胶原mRNA表达。同时用放免法检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ含量。结果 :糖尿病组大鼠尿蛋白排泄率 (t=9.32 ,P <0 .0 1)、肾皮质血管紧张素Ⅱ水平 (t=2 .2 7,P <0 .0 5 )及Ⅳ型胶原mRNA表达 (t =3.71,P <0 .0 1)均较单肾切组明显升高 ;而AT2 的mRNA水平却下降 (t=2 .35 ,P <0 .0 5 )。结论 :糖尿病肾组织AT2 受体mRNA表达的下降及Ⅳ型胶原表达的增加参与了糖尿病肾病的发生、发展。     

尼尔雌醇影响OVX大鼠骨组织IL-6mRNA表达水平的研究

目的研究尼尔雌醇对OVX大鼠IL-6mRNA表达水平的影响,探讨绝经后骨质疏松的分子细胞学机 制。方法将30只3月龄雌性Wistar大鼠随机分成3组,每组10只,即OVX组、假手术组和尼尔雌醇组(雌醇 组)。对OVX组和雌醇组行双侧卵巢切除制备绝经后骨质疏松模型,雌醇组于术后1周予尼尔雌醇治疗。3个月 后处死全部实验动物,直接从骨组织中提取总RNA,采用相对半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测IL- 6mRNA表达情况。结果雌醇组IL-6mRNA水平显著低于OVX组(P＜0.01),与假手术组相比无显著性差异(P ＞0.05)。结论IL-6参与调节雌激素撤退所致的骨吸收,尼尔雌醇可以抑制IL-6的基因表达,减少骨丢失,维持骨 量。     

正常和去卵巢大鼠骨组织白细胞介素6 mRNA表达水平的研究

绝经后妇女由于卵巢功能低下 ,雌激素明显减少 ,导致骨重建偶联过程失衡 ,骨吸收超过骨形成 ,终致骨量减少 ,骨强度降低 ,出现骨质疏松。近年来 ,雌激素对细胞因子的调节在绝经后骨质疏松 (ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ,ＰＭＯ)发病中的作用受到重视。本实验旨在探讨雌激素对白细胞介素 (ＩＬ 6 )基因表达的调节及其与骨密度之间的关系。一、材料和方法1.主要试剂及仪器 :ＲＮＡ提取试剂盒、逆转录试剂盒、Ｔａｑ酶、异硫氰酸胍、β 巯基乙醇及ＤＥＰＣ均为Ｐｒｏｍｅｇａ产品。ＤＮＡｍａｒｋｅｒｓ(ＳＡＢＣ)购…