甲基化特异性PCR检测PRAME基因启动子低甲基化30例及其临床应用

目的 建立实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)法检测急性髓系白血病(AML)患者黑色素瘤优先表达的抗原(PRAME)基因低甲基化水平,初步评价其临床意义.方法 用亚硫酸氢盐修饰后的基因组DNA为模板,建立EvaGreen染料法RQ-MSP检测PRAME基因低甲基化水平方法,检测18例(对照组)和30例(AML组)患者的骨髓单个核细胞中PRAME基因启动子低甲基化水平.结果 RQ-MSP融解曲线呈单一峰,标准品 5×107～5×102 copy/μL重复性良好;AML患者PRAME基因低甲基化水平(0.96～4 508.96,中位772.42)明显高于对照组(0～100.00,中位25.29),差异有统计学意义(P＝0.002).结论 建立的PRAME基因低甲基化RQ-MSP法特异性、重复性和灵敏性良好,可用于AML初诊和病情监测.     

死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化特异性PCR法的建立与初步应用

目的:建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化.方法:设计针对DAPK基冈启动子的MSP引物,建立MSP检测体系对甲基化阳性模板进行检测,评价其特异性、重复性和灵敏性,并经测序鉴定.结果:所建市的甲基化MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板.不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;对不同梯度稀释的甲基化阳性模板进行检测,其最大敏感性可达2%;在不同时间进行甲基化MSP检测的结果均一致.结论:成功建立的DAPK基因启动子甲基化MSP检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可用于肿瘤标本的批量检测.     

铜绿假单胞菌医院感染分布及耐药性分析

目的了解医院感染铜绿假单胞菌的分布及耐药情况。方法对2006～2009年医院感染患者临床各科标本中分离的189株铜绿假单胞菌标本类型、临床科室分布、药敏试验进行分析。结果呼吸道、外伤和手术伤口、泌尿道为铜绿假单胞菌医院感染的高发部位;重症监护病房(ICU)、呼吸内科、肾内科、神经外科为铜绿假单胞菌医院感染的高危科室。铜绿假单胞菌具有多重耐药性,复方新诺明、头孢曲松、庆大霉素、哌拉西林、头孢吡肟其耐药率均大于或接近50%。虽然对阿米卡星、亚胺培南、头孢噻肟、左氧氟沙星等耐药率较低(分别为25.9%、33.9%、39.2%、39.7%),临床用药也应注意。结论重视细菌培养,合理使用抗生素,减少耐药菌株,减少医院感染。     

56例巨幼细胞性贫血临床实验室特点分析

目的分析巨幼细胞性贫血（megaloblasticanemia,MA）患者的临床及实验室指标并探讨其临床意义。方法对56例巨幼细胞性贫血患者的临床和肝功能、心肌酶谱、血象和血清造血原料等实验室指标进行回顾性分析。结果56例患者中48例（85．7％）维生素B12缺乏、5例（8．9％）叶酸缺乏;51例（91．1％）出现贫血伴白细胞和（或）血小板减少,3l例（55％）平均红细胞体积（MCV）大于120fL;与正常对照相比,MA患者中乳酸脱氢酶（LDH）、α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）和间接胆红素（IBIL）明显增高,差异有高度显著性（P〈0．01）。结论LDH、HBDH、AST、TBIL和IBIL增高可作为巨幼细胞性贫血的临床实验室诊断的重要参考指标。     

肺炎克雷伯菌的医院感染分布及耐药性分析

目的 了解医院感染肺炎克雷伯菌的分布及耐药情况.方法 对2006～2009年从医院感染患者临床标本中分离的73株肺炎克雷伯菌标本类型、临床科室分布、药敏试验结果 进行分析.结果 痰液、尿液、脓液和血液中肺炎克雷伯菌检出率最高,分别为63.0%、15.1%、13.7%和4.1%;呼吸内科、重症监护病房、神经内科、神经外科、泌尿外科、肿瘤科为肺炎克雷伯菌医院感染的高危科室,分别为27.4%、24.7%、15.1%、9.6%、9.6%和6.8%;肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)携带率为28.8%,并具有多重耐药性,其对复方新诺明、头孢曲松、庆大霉素、哌拉西林、头孢吡肟的耐药率均大于50.0%,而对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦及阿米卡星的耐药率相对较低.结论 应重视细菌培养,合理使用抗菌药物,根据药敏结果 选择敏感抗菌药,对产ESBLs肺炎克雷伯菌应首选阿米卡星、亚胺培南,并应加强对产ESBLs菌株的监测.     

EvaGreen实时定量PCR检测急性髓系白血病GRAF基因表达

目的 研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中粘着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子(GTPase regulator associated with the focal adhesion kinase,GRAF)基因的表达及其临床意义.方法 建立EvaGreen染料法实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RQ-PCR),对71例AML患者和21例良性血液病患者中GRAF转录本水平进行检测,分析其临床相关性.结果 所建立的EvaGreen RQ-PCR方法具有良好的特异性、重复性,敏感度达102拷贝/μL.AML患者中GRAF转录本水平(0.01%～169.75%,中位3.82%)较对照组(14.49%～126.85%,中位56.04%)显著降低(P<0.05),GRAF基因表达量与患者性别、年龄、外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、FAB亚型、染色体核型分组均无相关性(P>0.05).结论 AML患者中GRAF基因表达下调,可能与其发病有关.     

EvaGreen染料法实时定量PCR检测急性髓系白血病PRAME基因转录本

目的:采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)法检测急性髓系白血病(AML)中黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因转录本,初步评价其在AML中的临床意义. 方法:设计PRAME基因引物,建立扩增PRAME基因转录本的EvaGreen染料法RQ-PCR法,对PRAME转录本克隆质粒进行扩增,评价其特异性、重复性和灵敏性.并对10例AML患者的骨髓单个核细胞标本进行初步检测. 结果:所建立的EvaGreen RQ-PCR法具有良好的特异性,最低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但其重复性差,而108～102拷贝/μl阳模的重复性良好.10例初诊AML患者PRAME转录本绝对含量为4.91×102～8.07×105拷贝/50ng(中位7.26×103拷贝/50ng),ABL标化后的相对含量为4.42%～13 170.01%(中位67.98%).而对照组8例缺铁性贫血患者中PRAME转录本相对含量为 0.00%～0.01% (中位0).1例AML患者诱导缓解后PRAME转录本下降,复发时又明显升高.结论: EvaGreen染料法RQ-PCR检测PRAME转录本方法敏感可靠,可用于AML患者临床监测.     

慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究

本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。