慢性髓系白血病中let-7a-3甲基化态势及其临床意义

目的：探讨慢性髓系白血病（CM L ）患者中let‐7a‐3启动子的甲基化态势及其临床意义。方法建立实时定量甲基化特异性PCR （RQ‐MSP）分别检测25例对照者及52例CML患者骨髓单个核细胞中let‐7a‐3启动子未甲基化水平。结果52例CM L患者未甲基化let‐7a‐3启动子（59．6％）为阳性,而对照组仅1例（4％）阳性,两组比较差异有统计学意义（ P＜0．01）。ROC曲线分析表明,let‐7a‐3启动子未甲基化作为辅助诊断CM L有较好的特异性。未甲基化let‐7a‐3启动子水平与BCR／ABL融合基因转录水平呈显著正相关（ r＝0．641,P＝0．001）,但与患者的白细胞、血小板计数及血红蛋白水平无明显相关性（ P＞0．05）。在慢性期和加速期let‐7a‐3未甲基化水平显著高于急变期。结论 let‐7a‐3基因低甲基化水平随疾病进展而降低。     

甲基化特异性PCR检测PRAME基因启动子低甲基化30例及其临床应用

目的 建立实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)法检测急性髓系白血病(AML)患者黑色素瘤优先表达的抗原(PRAME)基因低甲基化水平,初步评价其临床意义.方法 用亚硫酸氢盐修饰后的基因组DNA为模板,建立EvaGreen染料法RQ-MSP检测PRAME基因低甲基化水平方法,检测18例(对照组)和30例(AML组)患者的骨髓单个核细胞中PRAME基因启动子低甲基化水平.结果 RQ-MSP融解曲线呈单一峰,标准品 5×107～5×102 copy/μL重复性良好;AML患者PRAME基因低甲基化水平(0.96～4 508.96,中位772.42)明显高于对照组(0～100.00,中位25.29),差异有统计学意义(P＝0.002).结论 建立的PRAME基因低甲基化RQ-MSP法特异性、重复性和灵敏性良好,可用于AML初诊和病情监测.     

建立高分辨熔解曲线分析法检测SF3B1基因突变

目的:建立高分辨熔解曲线分析法(high-resolution melting analysis,HRMA),检测骨髓增生异常综合征(my-elodysplastic syndrome,MDS)患者中SF3B1基因的突变。方法:针对SF3B1基因热点突变位点(密码子E622、H662、K666和K700)设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增反应体系,对30例初诊MDS患者的骨髓标本进行PCR扩增,应用HRMA对相应PCR产物进行突变检测,并对HRMA检测结果进行DNA测序验证。结果:HR-MA检测发现2例MDS患者存在异常的熔解曲线,经DNA测序验证1例为K666M杂合子突变,另1例为K700E杂合子突变。所建立的HRMA技术检测SF3B1基因突变的灵敏度为0.05(5%)。结论:成功建立检测SF3B1基因突变的HRMA技术,可快速筛查MDS标本中的SF3B1基因突变。     

多聚酶链反应检测老年人肺炎支原体的研究

目的探讨肺炎支原体(MP)与老年呼吸道感染的关系。方法应用多聚酶链反应(PCR)检测128例急性期老年患者痰和分泌物MP-DNA,其相应血清进行MP-IgM检测。结果128例急性期患者MP-DNA中有81例表达阳性,阳性率为63.28%(81/128),而血清学试验检测阳性率为28.13%(36/128),两者均阳性32例,两者均阴性58例,MP-DNA阳性而MP-IgM阴性38例,PCR法和血清学试验两者阳性符合率为39.51%。结论应用PCR方法检测急性期老年患者MP-DNA较血清学法更敏感,阳性率高。     

等长收缩运动中血浆内啡呔的检测及评价

目的观察健康青年人在等长收缩运动(IE)时血浆内啡肽(EOPs)的变化.方法选择健康自愿受试者40例,男女各20例,平均年龄(23.7±2.9)岁,研究设置二种模型即主观运动和被动运动.观察指标包括血浆中的亮氨酸脑啡肽(LEK)、β-内啡呔(β-END)和强啡呔(DYN).结果LEK、β-END、DYN在IE中均有不同程度的变化.结论在IE中LEK、DYN的变化程度较β-END明显(P＜0.01).     

MDRI基因表达与大肠癌的相关探讨

38例原发大肠癌切除标本以过氧化酶免疫组化方法检测多药耐药基因 (mdrl)表达物P糖蛋白 (Pgp)。Pgp/mdrl阳性表达率为 6 3 .2 % ,其中直肠癌的阳性率为 6 0 % ,结肠癌 6 9.2 %。 2 2例患者同时检测肿瘤组织及正常大肠粘膜Pgp的表达 ,正常粘膜仅 6例阳性 ,肿瘤组织 18例阳性 ,Pgp在大肠癌标本中阳性表达明显升高 (P <0 .0 5 )。而Pgp/mdrl表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、淋巴结和远处转移无关。     

死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化特异性PCR法的建立与初步应用

目的:建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化.方法:设计针对DAPK基冈启动子的MSP引物,建立MSP检测体系对甲基化阳性模板进行检测,评价其特异性、重复性和灵敏性,并经测序鉴定.结果:所建市的甲基化MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板.不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;对不同梯度稀释的甲基化阳性模板进行检测,其最大敏感性可达2%;在不同时间进行甲基化MSP检测的结果均一致.结论:成功建立的DAPK基因启动子甲基化MSP检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可用于肿瘤标本的批量检测.     

建立PCR-高分辨率熔解曲线分析法检测淋巴瘤MYD88基因突变

髓系分化起始反应基因88(MYD88)位于染色体3p22,编码蛋白为Toll样受体(TLR)信号传导途径中的一个重要接头分子,结构上主要包括2个功能域:N端的死亡域(DD)和C端的Toll域(TIR),在天然免疫应答和炎症反应中发挥着重要的调控作用[1-2].最近的研究发现39%活化B细胞(ABC)型弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中存在MYD88基因的获得性突变[3],其中位于TIR域的L265P突变发生率最高(29%).高分辨率熔解曲线分析(High resolution melting curve analysis,HRMA)是一种新型的突变分析技术,具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、高通量检测的优点,已在临床上得到越来越多的应用[4].我们拟建立HRMA法对MYD88 L265P突变进行检测.