人ATG4B的表达及蛋白纯化和鉴定

目的构建含His标签的自噬相关蛋白4同源物B(ATG4B)重组质粒以得到His-ATG4B蛋白,初步鉴定其生物学活性。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出ATG4B基因的编码序列,插入p ET-28a(+)载体中得到重组质粒,经酶切鉴定后转化Rossate菌,挑选小量诱导出的His-ATG4B菌液进行His-ATG4B蛋白的纯化,SDS-PAGE和Western blot法检测His-ATG4B蛋白的纯化效果,GST pull-down技术对蛋白生物学功能进行鉴定。结果用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到大小约1100 bp的目的片段,插入p ET-28a(+)载体中构建出His-ATG4B重组质粒,酶切鉴定及测序结果均表明His-ATG4B质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化蛋白,得到相对分子质量(Mr)约为47 000的His-ATG4B蛋白,且SDS-PAGE检测蛋白纯化效果较好;GST pull-down实验证实His-ATG4B蛋白可以和LC3B蛋白在体外相互作用,生物学活性良好。结论本实验成功得到His-ATG4B蛋白,为研究ATG4B在自噬中的作用机制奠定实验基础。     

半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1的基因克隆真核表达及细胞定位

目的 构建带FLAG标签的半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1(CRP1)的真核表达载体,明确该融合蛋白在人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞和乳腺癌ZR75-1细胞中的表达及定位情况.方法 采用PCR技术从乳腺cDNA文库中扩增出人CRP1基因,并将其插入到pCMV-Tag2B表达载体中;将重组质粒转染人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞,Western blot法检测转染细胞的表达情况;荧光显微镜观察pCMV-FLAG-CRP1在人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞中的定位.结果 双酶切和测序鉴定表明,pCMV-FLAG-CRP1真核表达质粒构建成功;Western blot法检测pCMV-FLAG-CRP1转染293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞后成功表达;荧光显微镜下观察,在293T、HepG2、ZR75-1细胞中,CRP1在细胞质和细胞核中均有分布,且胞质信号强于胞核.结论成功构建pCMV-FLAG-CRP1真核表达载体,CRP1可在不同细胞中的胞质和胞核表达.     

养阴解郁疏肝汤联合西药治疗围绝经期综合征肾虚肝郁证的临床观察

目的：探究观察养阴解郁疏肝汤联合西药治疗围绝经期综合征（PMS）肾虚肝郁证的效果。方法：选取本院2019年5月～2020年5月收治的PMS肾虚肝郁证患者139例,采用随机数字表法分为对照组（n=69）和研究组（n=70）。对照组行芬吗通西药治疗,研究组在对照组的基础上另加养阴解郁疏肝汤联合治疗,两组均治疗2个疗程。对比分析两组治疗前后患者证候积分、雌二醇（E₂）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）等性激素指标水平、生存、睡眠质量以及焦虑、抑郁评分的差异性,并对临床效果进行评价。结果：两组的临床有效率分别为92.86%和81.16%,研究组高于对照组（P<0.05）。治疗后研究组潮热汗出、烦躁易怒、抑郁寡欢、腰膝酸痛等证候评分均低于对照组（P<0.05）。与治疗前比,两组治疗后的E₂及升高,FSH下降（P<0.05）,LH比较无统计学意义（P>0.05）。研究组治疗后的绝经期生存质量表（MENQOL）、匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）、焦虑自评量表（SAS）和抑郁自评量表（SDS）评分均低于对照组（P<0....     

幽门螺杆菌胃炎中B细胞克隆的分子学分析

本研究目的在于确认幽门螺杆菌胃炎中PCR可探测到的克隆性B细胞数量,并评估其与胃淋巴浸润的W otherspoon-Isaacson(W-I)分级的相关性。扩增的DN A分别从34例幽门螺杆菌阳性胃炎的有消化不良症状患者和34例幽门螺杆菌阴性的相匹配对照者中获得。分别在6个标本(其中2/17例W-I1级,2/13例W-I2级,2/4例W-I3级)及24个多克隆涂片(15例W-I1级,7例W-I2级,2例W-I3级)中发现克隆带。另外4例有克隆带的W-I2级标本与多克隆涂片的制作有关,而不是由于复制所致。对照组中未发现克隆带。B细胞的克隆与W-I分级无关。所以作者认为:某些幽门螺杆菌…     

结肠镜检时应用脉搏血氧饱和度及经皮二氧化碳分压组合监测仪:对一种精巧耳夹的初步研究

背景:本研究评价了一种能同时监测脉搏血氧饱和度和经皮二氧化碳分压的新型耳传感器的准确性和实用性。方法:实施了一系列将这种组合传感器结果与动脉血气分析进行对比的有效性试验。获取25例经咪达唑仑和阿芬太尼镇静和8例未经镇静的接受结肠镜检的患者的监测数据。结果:对组合传感器和动脉血气分析的测量结果进行比较,发现两种方法测得的氧饱和度和二氧化碳分压之间有良好的相关性(r分别为0.96和0.93)。测得经咪唑达仑/阿芬太尼镇静的患者的经皮二氧化碳分压平均升高了7.6m m H g,而未经镇静的患者升高了2.3m m H g。结论:耳垂组合监测仪…     

延续性护理在酒精所致精神障碍患者中的应用

酒精所致精神障碍是指因长期反复过量饮酒导致躯体、心理强烈渴求,且造成精神、躯体功能损害.酒依赖的患病率逐年升高,已成为当前日益严重的医学和社会问题[1].酒精所致精神障碍患者住院期间经过药物治疗病情能得到控制,但是出院后不久因为复饮酒病情复发再次入院.     

阻抗法、检压法及pH探针法在就餐前后检测反流的直接比较

采用联合胃食管反流病(GERD)检测法在检测和对反流(RE)定性时每种方法各有利弊。本研究目的是将测定反流食团体积的阻抗监测法(Im p)和测定一般空腔的检压法与测量反流过程中酸浓度变化的pH监测法作比较。19例有症状的GER D患者和10例正常志愿者入选本试验,并在就餐前后分别进行研究。所有受试者都采用检压法,并用pH法和Im p同时进行了2h监测(6个位点:分别为食管LES肌上3cm、5cm、7cm、9cm、15cm和17cm处)。pH监测计显示反流pH值从4以上降至4以下。所有受试者共测到973次反流,但其中仅19%被上述3种方法同时检测到。Im p的检出率(96%…     

BRCA1基因真核表达载体的构建及其功能验证

目的：构建人乳腺癌易感基因BRCA1的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人BRCA1基因,将其克隆到pXJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,并用CCK8法测定细胞生长曲线。结果从人乳腺文库中扩增获得大小为5600 bp的DNA片段,并成功克隆至pXJ-40-myc载体上,经测序与目的序列完全一致;转染乳腺癌ZR75-1细胞后目的基因成功表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞生长缓慢;划痕实验说明,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞迁袭缓慢。结论成功构建了带myc标签的人BRCA1真核表达载体,为进一步研究BRCA1在乳腺癌发生发展中的功能奠定了基础。