胸腺细胞对胸腺止皮细胞分泌IL-6的促进作用

为分析胸腺细胞对胸腺基质细胞功能的调节作用，将胸腺细胞与小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）共育，分析胸腺细胞对ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的影响。结果表明，胸腺细胞能明显促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其促进程度与两种细胞的数量及共育时间有关。胸腺细胞（４×１０~６／孔）与ＭＴＥＣ１（１×１０~５／孔）共育４８小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６达高峰。去除胸腺细胞后９６小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的量仍比单独培养的ＭＴＥＣＩ多１．７倍。经丝裂霉素Ｃ处理的胞腺细胞仍能促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其作用程度与末经处理的胸腺细胞相似。而胸腺细胞培养上清及裂解液则不影响ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，从而证实胸腺细胞能促进ＭＴＥＣＩ分泌ＩＬ－６，其作用机制可能与细胞-细胞直接相互作用有关。     

肝细胞癌相关肿瘤抗原基因的筛选与分析

目的 筛选和分析肝细胞癌相关的肿瘤抗原。方法 用肝细胞癌组织构建cDNA表达文库，通过重组cDNA表达文库血清学分析法，用自体患者和异体患者的血清对文库进行筛选。将所得阳性噬菌体克隆体内剪切获得其pBK-CMV噬菌粒。通过限制性核酸内切酶鉴定插入cDNA片段，并作测序和生物信息学分析。同时将阳性克隆中的LIMS1插入片段进行原核表达。结果 自体血清筛选得到14种基因，异体筛选获得11种基因，两组中均筛选到kinectin，共有24种肝细胞癌相关的肿瘤抗原基因。其中有8种基因目前还不清楚其功能，其余16种基因根据确定的或者推断的功能可以分成8组。LIMS1原核重组蛋白表达成功。结论 本研究为肝细胞癌的免疫治疗提供了候选基因，并为理解肝细胞癌发生和发展的机制提供了线索。     

MLXSH保健液对人免疫功能的影响

观察了ＭＬＸＳＨ保健液对人免疫细胞应答功能的作用，对服药前、后人外周血Ｔ淋巴细胞的增殖情况及ＩＬ－２，ＩＬ－６的产生水平进行了测定。ＭＬＸＳＨ保健液对服药前，后的青年组及步入老年或已是老年的人群组外周血Ｔ淋巴细胞的增殖能力、产生ＩＬ－２和ＩＬ－６的能力均有不同的影响，对青年组免疫功能的作用不明显（Ｐ〉０．０５），对５５岁以上免疫应答偏低者，有显著增强免疫应答作用（Ｐ〈０．０５）。结果表明：ＭＬＳＳ     

FATE/BJ-HCC-2基因转染对肿瘤细胞生物学行为的影响

目的:观察FATE/BJ-HCC-2基因对肿瘤细胞生物学行为的影响,探讨FATE/BJ-HCC-2与肿瘤进展之间的关系。方法:将FATE/BJ-HCC-2基因转染肝癌细胞系Bel-7402细胞,3H-TdR掺入法和Transwell实验对转染细胞的增殖和侵袭能力进行检测;PCR方法检测细胞内的骨桥蛋白(OPN)和整合素连接激酶(ILK)基因的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示FATE/BJ-HCC-2转染肿瘤细胞的3H-TdR掺入值显著高于Mock细胞的掺入值,统计学分析二者差别有显著性意义(P<0.01)。FATE/BJ-HCC-2基因表达促进肝癌细胞系Bel-7402细胞的增殖,并且这种增殖效应可被特异性抗-FATE/BJ-HCC-2抗体所阻断。Transwell实验显示,转染FATE/BJ-HCC-2的细胞,其穿膜数量明显比对照组多,差别有显著的统计学意义(P<0.01)。对肿瘤细胞转移相关的细胞信号分子进行检测发现,骨桥蛋白(OPN)和整合素连接激酶(ILK)基因的表达水平上调。结论:肿瘤细胞获得FATE/BJ-HCC-2基因表达后其增殖和侵袭能力增强,FATE/BJ-HCC-2基因表达可能与肿瘤细胞的转移有一定关系。提示CT抗原的表达不仅仅是肿瘤发生中的伴随产物,它可能在肿瘤的发生发展过程中起到一定作用。     

酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答试验条件的优化

目的：探讨酶联免疫斑点（ELISPOT）实验特异性及敏感性的因素，优化酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的实验条件。方法：HLA－A2阳性正常人的外周血单个核细胞在体外经流感病毒抗原肽诱导1周后，观察不同实验条件对酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的影响。结果：CTL诱导时，效应细胞先分离出CD8^＋T细胞组获得的Flu抗原特异的细胞频数要高于CTL诱导后再分离出CD8^＋T细胞组（P＜0．05），自体DC（树状细胞）作APC（抗原提呈细胞）比自体CD8^-PBMC作APC，CTL的诱导效率高且特异（P＜0．05）；使用细胞因子组合（IL－7＋IL－2＋IL－6）优于单纯使用IL－2。CTL行ELISPOT检测时，T2－2细胞较T2－1细胞具有更强抗原提呈功能，增加Flu抗原特异的CD8^＋T细胞频数（P＜0．05）。结论：优化了酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的试验条件，优化的方法在临床肿瘤疫苗的研究中具有应用价值。     

胸腺基质细胞的抗原提呈作用

目的 研究胸腺基质细胞的抗原提呈能力。方法 应用ＯＶＡ－特异的、受Ｉ－Ａ＾ｄ分子识别限制的辅助Ｔ细胞杂交瘤（３ＤＯ．１８．３）识别提呈的ＯＶＡ的ＣＮＢｒ水解片段而被活化后产生ＩＬ－２,测定ＩＬ－２活性来分析胸腺基质细胞的抗原提呈作用。结果ＩＦＮ－γ能促进ＭＴＥＣＩ和ＭＴＳＣ４表达Ｉ－Ａ＾ｄ分子,并促进ＭＴＳＣ４表达Ｂ７－１分子。经ＩＦＮ－γ作用后,ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４均有抗原提呈能力,ＭＴＳＣ     

胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌IL—6的促进作用

为分析胸腺细胞对胸腺基质细胞功能的调节作用，将胸腺细胞与小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）共育，分析胸腺细胞对ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的影响。结果表明，胸腺细胞能明显促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其促进程度与两种细胞的数量及共育时间有关。胸腺细胞（４×１０＾６／孔）与ＭＴＥＣ１（１×１０＾５／孔）共育４８小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６达高峰。去除胸腺细胞后９６小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的量仍比单独培养的     

肿瘤/胎盘抗原基因PLAC1/CP1在胃癌中的表达及其诱导的体液免疫应答

目的:分析新的肿瘤/胎盘抗原基因PLAC1/CP1 mRNA在胃癌患者中的表达,及其表达的蛋白PLAC1/CP1诱导的自身体液免疫应答,为胃癌患者进行特异性免疫治疗提供部分依据.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测28例胃癌患者的癌组织和对应癌旁组织PLAC1/CP1 mRNA表达情况;ELISA方法检测患者血清中PLAC1/CP1蛋白特异性抗体的水平.结果:28例胃癌患者中,14例(50%,14/28)在mRNA水平表达PLAC1/CP1;8例(29%,8/28)血清抗PLAC1/CP1蛋白抗体阳性,占PLAC1/CP1 mRNA阳性标本的57%(8/14).结论:PLAC1/CP1在胃癌组织中表达率较高,并具有免疫原性,可能是胃癌免疫治疗的一个良好的靶基因.     

胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌干扰素的促进作用

目的分析胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌干扰素的影响。方法用胸腺细胞和胸腺基质细胞混合培养模型，测定ＩＦＮ活性并进行类型鉴别。结果胸腺细胞可以促进小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）产生Ⅰ型ＩＦＮ，胸腺细胞和胸腺基质细胞以４０１的比例培养时，促进作用最强。ＭＴＥＣ１细胞经抗ＩＣＡＭ－１抗体作用后，分泌Ⅰ型ＩＦＮ增多。用放线菌酮预处理ＭＴＥＣ１细胞后，胸腺细胞和抗ＩＣＡＭ－１抗体则不再影响ＭＴＥＣ１细胞产生ＩＦＮ。结论胸腺细胞与基质细胞的相互作用，可由粘附分子ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１介导。胸腺细胞能促进ＭＴＥＣ１细胞合成ＩＦＮ。     

应用MAGE-1抗原肽体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞形成

目的：探讨应用MAGE－1抗原肽治疗肝细胞肝癌（HCC）的可行性。方法：接受MAGE－1抗原九肽NYKCRFPEI孵育的外周血单个核细胞（PBMC）经3000rad的射线照射后用作抗原呈递细胞（APC），每隔7d刺激HCC病人自体的PBMC 1次，进行混合淋巴细胞培养（MLCs)，共4次后作为细胞毒T淋巴细胞（CTL），应用乳酸脱氢酶（LDH）释放分析法检测CTL对靶细胞的杀伤效应。结果；从培养的第1周至第4周，淋巴细胞共增加至原细胞数的32倍；在效应细胞；靶细胞（E：T）为10：1时，CTL对MAGE－1抗原九肽NYKCRFPEI孵育的自体淋巴母细胞的杀伤效应为62．5％，对MAGE－1阳性，HLA－A24阳性的HCC细胞株BEL7405的杀伤效应为40．2％，两者均明显高于自体淋巴母细胞的杀伤效应（17．9％）。和对MAGE－1阳性，HLA－A24阴性的HCC细胞株HLE的杀伤效应（19．6％），及对MAGE－1阴性，HLA－A24阴性的HCC细胞株QGY 7701的杀伤效应（1．6％）；在E：T为3．3：1时，CTL对肽孵育的自体淋巴母细胞的杀伤效应为53．6％，明显高于自体淋巴母细胞的杀伤效应（15．6％），对HLE的杀伤效应（13％）和对QGY7701的杀伤效应（1％）。结论：本实验结果表明，应用MAGE－1抗原肽NYKCRFPEI，能在体外从HCC病人的PBMC中有效地诱导出具有特异性杀伤能力的CTL。