补阳还五汤提取液对Schwann细胞氧化损伤的保护作用

本实验建立了Schwann细胞的体外氧化损伤模型,从对Schwann细胞的抗氧化损伤作用探讨补阳还五汤的疗效机制。用原代培养的Schwann细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分为氧化损伤组,补阳还五汤处理组及正常组:(1)应用MTT方法检测细胞的活性;(2)应用生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量;(3)采用荧光探针Fluo-3-AM标记细胞,用激光共聚焦显微镜观察H_2O_2对Schwann细胞内游离钙([Ca2+])抗氧化损伤的影响。结果显示:与对照组相比,H2O2处理组细胞活性降低(P<0.01),SOD含量明显减少(P<0.01),而补阳还五汤预处理后细胞内[Ca2+]i升高明显被减弱(P<0.01),细胞存活率明显升高(P<0.01)。以上结果表明补阳还五汤能通过抗过氧化损伤保护Schwann细胞。     

高温致神经管畸形相关基因CDK109克隆及其致畸相关性分析

目的通过筛选高温致畸金黄地鼠胚胎神经管cDNA文库,克隆高温致畸相关基因CDK109。方法利用本室构建的高温致畸胚胎神经管cDNA文库,采用噬菌斑原位杂交方法,用寡核苷酸探针筛选cDNA文库,挑取阳性噬菌斑,将其转化为质粒,再通过限制性酶切鉴定阳性克隆并测序,将该基因标记探针与孕8.5 d高温致畸胚胎神经管组织和正常对照胚胎神经管组织总RNA进行NORTHERN杂交,以便确认该基因在高温致神经管畸形中的异常表达。结果成功地从高温致畸金黄地鼠胚胎神经管cDNA文库中筛选出高温致畸相关基因CDK109全长,其在高温致畸组的表达明显高于对照组。结论 CDK109在神经管中的高表达与高温致神经管畸形密切相关。     

6—羟基多巴不同部位毁损大鼠帕金森氏病模型的建立及比较

目的：比较6－OHDA毁损黑质,黑质＋内侧前脑束,纹状体面制作PD模型的异同及可靠性。方法：在脑立体定位技术下,将20ug-OHDA分两点注入大鼠上述脑区,术后不同时间用阿扑吗啡诱发大鼠异常旋转行为,并进行检测比较。结果：6－OHDA毁损黑质及黑质＋内侧前脑束,PD鼠于术后一周即出现稳定旋转行为,两部位模型成功率为50％,纹状体毁损后一周PD鼠可出现轻微旋转,逐渐增强,模型成功率可达80％,结论：6－OHDA毁损大鼠黑质,黑质＋内侧前脑束,纹状体均可制作成功的PD模型。     

甲基苯丙胺对中脑边缘投射多巴胺神经元自发动作电位频率和I_h电流的影响

目的检测高浓度甲基苯丙胺(MA)对中脑边缘多巴胺神经元自发动作电位频率和超极化激活阳离子电流(Ih)的影响。方法应用立体定位仪将逆行示踪剂注入伏隔核区(NAc),标记投射到该区域的中脑边缘多巴胺神经元,并进行酪氨酸羟化酶(TH)染色鉴定;制备中脑脑片,应用膜片钳技术在全细胞模式下检测MA(10μmol/L)对标记神经元自发动作电位频率及Ih的作用。结果中脑边缘投射多巴胺神经元可被准确示踪标记,呈TH阳性,位于腹侧被盖区(VTA);MA可明显降低其自发动作电位频率(P<0.05),并抑制Ih电流(P<0.05)。结论甲基苯丙胺可抑制中脑边缘多巴胺神经元的自发动作电位频率和Ih电流。     

补阳还五汤对神经干细胞生长分化的影响

目的 :观察补阳还五汤对神经干细胞生长分化的影响。方法 :取孕 12d大鼠胚胎神经管上皮细胞 ,分别接种在灌服补阳还五汤的鼠血清和对照鼠血清的培养基内。不同培养时间内观察细胞的生长状况 ;用MTT法检测细胞活性 ;用免疫组化染色法检测神经元特异烯醇化酶 (NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 :药物血清组神经干细胞的生长明显好于对照组 ,OD值高于对照组 ;免疫组化染色显示 ,NSE、GFAP免疫阳性细胞药物血清组均多于对照组。结论 :补阳还五汤药物血清可促进神经干细胞的生长、存活和向神经元及神经胶质细胞的分化。     

营养不良可增加幼鼠齿状回颗粒下层的细胞增殖和神经生发(英文)

为了观察营养不良对幼鼠海马齿状回 (DG)和脑室下层 (SVZ)的细胞增殖和神经发生的影响 ,采用 5 -溴 -2 -脱氧尿苷(Brd U)标记结合免疫组织化学方法对脑切片分别进行 Brd U、Tu J1(β tubulin,β微管蛋白 )及 GFAP(胶质纤维酸性蛋白 )反应或双重反应。结果表明 ,营养不良幼鼠齿状回的细胞增殖和神经生发明显高于营养良好的幼鼠而脑室下层的细胞增殖数量在两者却无明显差异。在齿状回 ,新生的细胞中大约有 5 0 %为新生的神经元 ,10～ 2 0 %为神经胶质细胞。本文结果提示 ,幼鼠海马齿状回的细胞增殖和神经生发可能因营养不良而增加 ,这些新生的细胞可能对日后某些海马依赖性行为产生一定的影响     

bFGF对胚胎神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的影响

本研究观察了碱性成纤维生长因子对胚胎神经干细胞生长和分化的影响。从孕 12 d大鼠胚胎神经管分离神经干细胞 ,进行体外培养 ,分为碱性成纤维生长因子组及对照组。培养过程中观察神经干细胞的生长 ,于培养第 3、5、10 d用免疫组化方法检测培养细胞神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达 ,以观察神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的状况。碱性成纤维生长因子可明显地促进培养细胞的生长和分化。免疫组化细胞计数显示 ,培养第 3 d,特异烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数均明显增加 ;培养第 5 d,特异烯醇化酶阳性细胞数是对照组的 1.9倍 ,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数为对照组的 1.6倍 ,前者表达增加明显 ;培养第 10 d,两者的阳性细胞数仍高于对照组 ,但增加不明显。不同培养时间的胞体最长突起长度也均高于对照组 ;胞体直径及表面积随培养时间延长而增大。说明 ,碱性成纤维生长因子既能促进胚胎神经干细胞的生长 ,也可促使其分化为神经元及神经胶质细胞 ,尤以神经元为明显     

bFGF和EGF对胚胎神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的影响

目的：观察碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）对体外培养胚胎神经管神经干细胞生长和分化的影响。方法：从孕12天大鼠胚胎神经管分离神经干细胞，进行原代培养，分为bFGF组、EGF组、bFGF＋EGF组及对照组：培养过程中观察干细胞的生长，培养2小时做nestin染色鉴定神经干细胞，培养第5天用免疫组化方法检测培养细胞神经元特异烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，以观察神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的状况。结果：取材细胞大部分为nestin免疫阳性细胞；各实验组均可促进培养细胞的生长和分 化。免疫组化中，EGF使神经干细胞增殖成团，增加GFAP的表达（P＜0．01）；bFGF能明显增加NSE及GFAP的表达（P＜0．01）；两种因子联合应用，神经元和神经胶质细胞均比对照组增多（P＜0．01）。结论：EGF和bFGF两类生长因子均能促进胚胎神经干细胞的生长，在分化方面，EGF倾向于诱导干细胞增并向着胶质细胞分化，bFGF则诱导干细胞分 成更多的神经元。     

神经干细胞体外研究的现状

神经干细胞(NSCs)是一种存在于中枢神经系统内,能自我更新、具有多向分经潜能的未分化细胞,在一定条件下可分化为神经元,是形胶质细胞和少突胶质细胞。随着神经干细胞概念的提出,其良好的生物学特性和广阔的临床应用前景,使其成为了近年来生命科学领域中一大研究热点。目前,对它的研究已经单纯的生物学特性拓展到了分子和基因水平。通过基因工程技术将不同的目的基因转染到NSCs中,促进神经干细胞的增殖或诱导其分化,从而将神经干细胞优良的生物学特性和先进的基因工程技术相结合,形成转基因的神经干细胞,为神经系统疾病的临床治疗提供了崭新的策略。     

TNF-α和IFN-α对淋巴细胞迁移至小鼠皮肤区的影响

目的　体内观察TNF -α和IFN -α两种细胞因子对淋巴细胞迁移至小鼠皮肤区的影响。方法　以近交系BALB/C小鼠为实验动物 ,皮内注射细胞因子 ,尾静脉输注标记的淋巴细胞 ,然后切取注射区皮块 ,制样后行乳化计数测量。测量值计算后转化成细胞浓度因子 (CCF) ,用CCF值反应淋巴细胞迁移的水平。结果　TNF -α和IFN -α注射区CCF值均高于对照(P <0 0 1) ;且TNF -α与IFN -α联合应用的CCF值是TNF -α和IFN -α各自应用之和的 137%。结论　TNF -α及IFN-α可以体内诱导淋巴细胞迁移至小鼠皮肤区内。