补阳还五汤的抗氧化作用

目的：探讨复方中药制剂补阳还五汤的抗氧化机制。方法：用水煎醇沉法制备补阳还五汤提取液,从新生鼠坐骨神经分离纯化雪旺细胞,建立过氧化氢（H2O2）损伤模型。将培养细胞分为补阳还五汤处理组、氧化损伤组及正常组和空白对照组,培养12h时,检测丙二醛（MDA）的含量,用免疫组化方法检测Caspase-3的表达,用RT-PCR技术检测胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的表达。结果：与氧化损伤组相比,补阳还五汤处理组的MDA含量明显减弱,Caspase-3呈弱阳性表达,GDNF mRNA的表达量减少不明显。结论：补阳还五汤具有良好的抗过氧化损伤效果,对H2O2引起雪旺细胞的损伤具有保护作用。     

低剂量LPS对PC12细胞抗氧化能力的影响

目的:探讨低剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞抗氧化能力的影响。方法:分别以浓度为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1μg/μl的LPS刺激PC12细胞24小时,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的安全剂量;采用安全剂量刺激PC12细胞24小时,收集培养基上清和细胞,采用试剂盒检测上清中的总抗氧化能力(T-AOC),细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的表达,Western blot检测细胞内Bcl-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca2+)的平均荧光强度。结果:LPS浓度小于0.1μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P>0.05);采用0、0.01、0.025、0.05、0.1μg/μlLPS分别刺激PC12细胞24小时,培养上清中T-AOC呈下降趋势,以0.05、0.1μg/μl组明显(P<0.01),细胞内SOD呈上升趋势(0.05μg/μl组,P<0.05;0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内Bcl-2表达逐渐升高(0.025~0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内ROS呈下降趋势(0.1μg/μl组,P<0.01),钙离子未见明显变化(P>0.05)。结论:低剂量LPS处理PC12 24小时具有剂量依赖性增强细胞抗氧化能力,并可能藉此参与应激耐受。     

胰岛素样生长因子-1对雪旺细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对雪旺细胞氧化损伤的保护作用。方法:用体外纯化培养的雪旺细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分成氧化损伤组、IGF-1保护组和正常对照组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性,生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,免疫印迹法检测凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2处理组细胞胞体积缩小、空泡化,细胞活性降低,SOD含量明显减少,Bcl-2表达减弱;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高,SOD含量较损伤组高,Bcl-2表达明显上调。结论:IGF-1对氧化损伤的雪旺细胞有保护作用。     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马cAMP-PKA-CREB信号通路的影响

目的: 观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)-cREB反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法: 将大鼠随机分为补阳还五汤组、尼莫地平组、模型组、假手术组。用改良Pulsinellis四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型,分别给予相应的药物,连续30 d。利用放射免疫分析法检测海马组织cAMP含量,Western blotting法检测PKA催化亚基(PKAc)蛋白表达,电泳迁移率改变分析法检测CREB的DNA结合活性。结果: 与假手术组比较, 模型组大鼠海马组织cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性均降低(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤组和尼莫地平组cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性均升高(P<0.01)。结论: 补阳还五汤可增加血管性痴呆大鼠海马cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性,增强cAMP-PKA-CREB信号通路的作用。     

京尼平抑制高糖诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化应激及凋亡损伤

目的:探讨京尼平(genipin,GEN)对高糖损伤的大鼠心肌H9c2细胞的抗氧化作用和抑制细胞凋亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,高浓度(50 mmol/L)葡萄糖处理H9c2细胞建立细胞损伤模型,分为正常糖对照组(NC组,葡萄糖浓度为5.6 mmol/L)、高糖损伤组(HG组,葡萄糖浓度为50 mmol/L)、正常糖+京尼平组(NC+GEN组)和高糖+京尼平组(HG+GEN组,京尼平浓度为10μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力;酶标法和WST-1法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;荧光探针DCF检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;ELISA法检测核小体片段的聚集值;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞内线粒体膜电位变化;利用Western blot法检测线粒体内抗氧化酶锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),以及早期凋亡蛋白细胞色素C(Cyt C)、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与HG组比较,HG+GEN组细胞活力显著升高(P 0.05),细胞内MDA的含量及细胞上清液中LDH的活性明显降低(P 0.05),细胞内SOD活性升高(P 0.05),细胞内线粒体膜电位明显升高(P 0.05),ROS水平降低(P 0.05),核小体片段聚集程度显著降低(P 0.05)。HG组线粒体内抗氧化酶Mn-SOD比NC组降低(P 0.05),但线粒体内凋亡蛋白Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平比NC组显著升高(P 0.05),而HG+GEN组与HG组相比,Mn-SOD升高(P 0.05),Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著降低(P 0.05)。结论:京尼平对高糖损伤的心肌H9c2细胞具有抗氧化保护作用和抑制细胞凋亡的作用。     

格雷夫斯病患者体内抗氧化状态及氧化损伤的研究

目的:观察格雷夫斯病(GD)患者体内抗氧化状态及生物大分子的氧化损伤情况。方法: 检测GD初发组和治疗组各31例患者血浆总抗氧化能力(TAC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及血浆丙二醛(MDA)和巯基(SH)含量,与31例正常对照比较;采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测各组外周血单个核细胞(PBMC)的DNA损伤情况(用彗星率表示)。结果: GD初发组血浆TAC、SOD、GSH-Px活性及SH含量明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),MDA含量及彗星率明显高于对照组(P＜0.01);GD治疗组各指标明显轻于初发组(P＜0.05,P＜0.01),但仍未达到对照水平。GD初发组及治疗组患者PBMC彗星率与TAC呈负相关,与MDA含量呈正相关。 结论:GD患者体内存在氧化应激及脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,生物大分子的氧化损伤可能参与GD的发生和发展。     

氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞泡沫化氧化损伤后血管紧张素转化酶2的表达变化及意义

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化后血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化与氧化应激损伤的关系,探讨ACE2的抗氧化作用。方法用不同浓度ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7泡沫化,油红O染色观察巨噬细胞内脂质堆积变化,并定量分析细胞内脂滴含量,通过检测细胞上清中丙二醛(MDA)含量鉴定细胞氧化损伤程度,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ACE2及MAS m RNA表达,化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性与还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果不同浓度(20、40、60、80mg/L)ox-LDL处理巨噬细胞24 h,油红O染色可见巨噬细胞变大、变圆,胞质内脂滴含量呈剂量依赖性增加;用60mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型组中MDA含量较对照组明显升高(P0.01);Real-time PCR结果显示,模型组ACE2和MAS m RNA表达水平较对照组显著减少(P0.05);与对照组比较,模型组中SOD活性与GSH含量显著降低(P0.05或P0.01)。结论巨噬细胞泡沫化氧化损伤进程与ACE2及其下游受体MAS表达下调密切相关,提示ACE2具有一定的抗氧化作用,其机制可能与SOD及GSH有关。     

丹参酮IIA对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究丹参酮IIA(tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的抗氧化、保护作用及其可能的作用机制。 方法 将C57BL/6J小鼠随机分成正常组、CCl4组以及Tan ⅡA保护组(Tan ⅡA 20 mg/kg+CCl4),每组10只。腹腔注射CCl4构建小鼠急性肝损伤模型。计算各组小鼠的肝脏指数,检测血清AST和ALT活性,测定肝组织SOD活性及GSH、MDA含量,HE染色观察肝组织病理变化,免疫组织化学法和Western blot检测肝组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。 结果 与CCl4组相比,Tan ⅡA保护组肝脏指数显著下降(P<0.01),血清AST(P<0.01)和ALT活性降低(P<0.05),肝组织SOD活性(P<0.01)及GSH含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),肝组织病理变化得到显著改善。同时,Tan ⅡA使肝组织p-PI3K和p-Akt表达水平明显升高(P<0.01),显著诱导Nrf2转位入核(P<0.01),促使其下游靶蛋白HO-1表达水平明显升高(P<0.01)。 结论 Tan ⅡA能够显著改善CCl4诱导的急性肝损伤,其机制可能与PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路有关。     

热休克蛋白70对未成熟心肌细胞功能的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌细胞功能的影响。方法健康新生长耳大白兔随机分为2组。对照组(C):腹腔注射生理盐水0.4ml,注射后24h取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。实验组(E):腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取离体心脏,方法同对照组。测定心肌细胞中HSP70含量及相关生化指标并作统计学处理比较。结果HSP70含量E组明显高于C组;E组ATP含量、SOD活性方面均优于C组(P<0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组(P<0.01),心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均优于C组(P<0.01),心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于C组(P<0.01)。结论HSP70对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护作用。     

丹酚酸A对缺血再灌注大鼠缺血期胃粘膜血流量及再灌注期胃粘膜脂质过氧化的影响

目的:探讨丹酚酸A(Sal.A)对缺血再灌注大鼠胃粘膜缺血期血流及再灌注期脂质过氧化的影响。方法:复制缺血-再灌注模型,用组织反射光谱法检测胃粘膜表面区域血液量(ΔEr)和血红蛋白氧饱和度(F)的变化,硫代巴比妥酸法测定胃粘膜丙二醛(MDA)含量和邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与对照组比较,Sal.AI(1mg/Kg)组显著减少缺血期大鼠ΔEr和F下降程度(P<0.05),再灌注期MDA含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);与对照组和Sal.AI(1mg/Kg)组相比,Sal.AII(10mg/Kg)组显著减少缺血期大鼠胃粘膜ΔEr和F下降程度(P<0.01)再灌注期MDA含量显著降低(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.01)。结论:丹酚酸A能改善缺血期大鼠胃粘膜血流并且降低再灌注时胃粘膜脂质过氧化水平和提高抗氧化的活性,减轻胃粘膜的再灌注损伤。     

正常和损伤坐骨神经及其提取液对PC12细胞和颈上神经节促神经突起生长的作用

本文一方面用大鼠正常和损伤坐骨神经与新生大鼠颈上节联合培养,观察坐骨神经对颈上节神经元突起生长的诱导作用;另一方面制备正常和损伤坐骨神经提取液,以观察不同浓度提取液对PC12细胞的促突起生长作用。结果表明,正常和损伤坐骨神经都含有对颈上节交感神经元起作用的促神经突起生长因子(neurite-promoting factors,NPFs),损伤神经的NPFs活性显著高于正常神经,损伤1～41天,坐骨神经的NPFs活性对颈上节的差别不大。正常和损伤坐骨神经提取液对PC12细胞亦有促突起生长作用,以损伤第4天神经提取液对PC12细胞的作用最大,这种作用从神经损伤后12小时持续至42天。此外,发现PC12细胞突起生长的速度与损伤神经提取液浓度成正相关。实验分析提示损伤神经所含NPFs可能不是单一的,估计有两种或两种以上,这些活性因子很可能是Schwann细胞产生和分泌的。     

过氧化氢对乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响及牛磺酸的拮抗作用

目的:研究过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞i的影响,以及牛磺酸对H₂O₂诱导钙超载的拮抗作用。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分4组:①正常对照组;②H₂O₂组:加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂;③H₂O₂＋牛磺酸(同时)组:牛磺酸30mmol/L与H₂O₂100μmol/L同时加入;④H₂O₂＋牛磺酸(先后)组:先加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂,2min后再加20mmol/L的牛磺酸。以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入H₂O₂后即刻与15min,检测i变化。结果:对照组心肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。H₂O₂加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著高于对照组(P＜0.05)。而H₂O₂＋牛磺酸(同时)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组);H₂O₂＋牛磺酸(先后)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组)。结论:H₂O₂可引起心肌细胞内钙超载;牛磺酸能显著减轻H₂O2诱导的心肌细胞内Ca²⁺超载。     

补阳还五汤加减治疗冠心病对血脂和雌二醇代谢的影响

目的:探讨补阳还五汤加减治疗冠心病血脂和雌二醇(E2)代谢的变化。方法:49例冠心病患者服用补阳还五汤加减治疗两个月,应用酶法检测治疗前后的总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG),均相酶法检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),免疫透射比浊法检测载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB),化学发光免疫法检测雌二醇(E2)。结果:治疗后TC、LDL-C、ApoB降低,ApoA1升高,与治疗前比较差异有显著性意义(P<0.05),TG、HDL-C、E2治疗前后比较无统计学差异(P>0.05)。结论:补阳还五汤加减治疗冠心病有助于改善血脂代谢。     

红景天甙对缺氧/缺糖损伤的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

目的:观察红景天甙对SH-SY5Y 细胞缺氧/缺糖损伤时细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位和活性的变化,探讨其对神经细胞线粒体膜电位的影响。方法:应用细胞培养,四唑盐比色实验( MTT )检测细胞线粒体活性,流式细胞术检测细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果: SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2、4、6、12 h后,细胞内[Ca²⁺]i和细胞凋亡百分率明显高于对照组, 均有显著差异(P<0.01);细胞经缺氧/缺糖处理后,线粒体膜电位和活性明显低于对照组,2 h时分别为29.17%(P<0.01),38.80% (P<0.01), 12 h时分别为56.72%(P<0.01), 63.58% (P<0.01);红景天甙能显著降低细胞内[Ca²⁺]i,抑制细胞凋亡的发生,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧/缺糖损伤组相比均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论:红景天甙可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关。     

筋脉通含药血清降低高糖培养大鼠雪旺细胞活性氧水平及PARP-1蛋白表达

目的 研究筋脉通含药血清对体外高糖培养雪旺细胞活性氧(ROS)水平及多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)蛋白表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组,分别灌胃筋脉通(JMT)、维生素C(VC)或蒸馏水制备含药血清和对照血清.取新出生大鼠的双侧坐骨神经用于制备雪旺细胞,分为高糖组、JMT组(加入筋脉通含药血清)、VC组(加入维生素C含药血清)及正常对照组.培养48 h后,采用激光扫描共聚焦显微技术检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平;采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞PARP-1(89 ku)的蛋白表达.结果 1)高糖组雪旺细胞ROS-DCF荧光值(86.59 ±8.14)显著高于正常值(P＜0.01);筋脉通含药血清组(44.58±8.67)与维生素C含药血清组(46.12±8.80)均显著低于高糖组(P＜0.01).2)与正常组比较,高糖组雪旺细胞内PARP-1(89 ku)含量(0.712 ±0.012)明显增加(P＜0.01);与高糖组比较,筋脉通含药血清组含量(0.307±0.025)明显降低(P＜0.01),且明显优于维生素C组(0.594±0.017) (P ＜0.01).结论 筋脉通含药血清能显著减少ROS生成,降低PARP-1的活性和酶解,减轻细胞DNA氧化损伤.     

PAR-1对动员肺巨细胞癌PLA801D/PLA801C细胞内Ca~(2+)的作用

目的 通过研究PAR-1对肺巨细胞癌细胞高、低转移细胞株PLA801D和PLA801C[Ca~(2+)]I的影响,探讨PAR-1参与调节肺癌细胞转移相关功能的分子机制.方法 激光共聚焦显微镜检测PLA801D和PLA801C细胞[Ca~(2+)]I;将反义和正义PAR-1分别转染至PLA801D(D-)和PLA801C(C+)中;用thrombin和TRAP激活PAR-1,观察PAR-1对D-和C+的[Ca~(2+)]I影响.结果 PLA801D(荧光强度59.55,下同)和PLA801C(35.46)细胞之间的平均[Ca~(2+)]I差异有统计学意义(P<0.01).C+的[Ca~(2+)]I(45.77)明显高于其对照组CV(35.46,P<0.05),D-的[Ca~(2+)]I(48.42)明显低于对照组DV(59.55,P<0.05).C+和CV的[Ca~(2+)]I分别在加入thrombin 80 s和100 s后荧光强度分别达峰值48.19±9.84和45.64±9.87(P<0.05);二者均在加入TRAP60 s后达峰值,分别为111.31±25.00和52.93±11.21(P<0.05).D-和DV的[Ca~(2+)]I在加入thrombin 60 s后达峰值,分别为40.71±5.89和61.07±21.36(P<0.05),二者均在加入TRAP 40 s后达峰值,分别为84.98±11.23和102.58±21.48(P<0.05).结论 PLA801D和PLA801C的转移潜能可能与其细胞的[Ca~(2+)]I有关.激活PAR-1能够上调PLA801D和PLA801C的细胞内Ca~(2+)信号.PAR-1促进肺巨细胞癌转移的机制与上调细胞内Ca~(2+)有关.     

周围神经Waller变性时巨噬细胞来源的探讨

一氧化氮是气体性递质 ,普遍认为其在介导巨噬细胞的吞噬作用时 ,可被诱导产生。但对于它在周围神经病理变化中的作用仍不清楚。本文采用 NADPH-d组化方法结合 S-10 0免疫组化方法探讨了大鼠坐骨神经 Waller变性时的细胞变化。取对侧坐骨神经作为对照。结果 :Schwann细胞在生理状态下有一氧化氮的表达 ,Waller变性后持续表达至第 5 d。在此期间一氧化氮合酶阳性的 Schwann细胞肥大、增殖 ,包绕并吞噬解体的髓鞘。自第 2 d开始 ,血管内可见 NADPH-d阳性的单核细胞附着并穿过血管壁 ,进入溃变的空膜管内。血管外的巨噬细胞和血管内的单核细胞具有相似的大小和细胞形态。第 5 d后 ,切片上的NADPH-d呈模糊的弱反应。提示 :( 1) Schwann细胞的吞噬功能由一氧化氮介导 ,( 2 ) Waller变性后 2～ 5 d,巨噬细胞来源于循环血中的单核细胞