基于分子互作网络探讨丹蒌片干预PI3K/AKT/NF- κB/TNF 通路防治 非酒精性脂肪肝病的机制

目的：基于分子互作网络探讨丹蒌片治疗非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的潜在分子作用机制。方法：通过TCMSP、PubChem和PharmMapper数据库检索丹蒌片所有活性成分及潜在作用靶点,通过DisGeNET、Gene cards及TTD数据库检索NAFLD的潜在靶点,Uniprot数据库校正去重后上传至Venny2.1软件绘制韦恩图并取其交集。同时利用Cytoscape 3.7.1软件构建药物-活性成分-靶点网络图,DAVID数据库进行GO及KEGG分析,将结果进行可视化处理。取18只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、丹蒌片组进行体内验证,取血清检测血脂水平,Western blot检测TNF通路相关蛋白,ELISA检测TNF-α、IL-6的表达水平。结果：共得到丹蒌片的141个有效活性成分,350个潜在靶点,478个NAFLD相关靶点;Venny2.1软件筛选出丹蒌片干预NAFLD的共有靶标蛋白115个,根据P≤0.01的GO注释分析得到335个BP信息,47个MF信息,32个CC信息,93个KEGG信号通路,主要涉及炎症反应、胆固醇代谢过程、胰岛素刺激的细胞反应、TN...     

藁本内酯抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及其与GPER相关机制

目的  观察藁本内酯(LIG)对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7向破骨细胞分化的影响,并探讨该作用与G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的相关机制。方法  体外培养RAW264.7细胞,RANKL诱导破骨细胞分化,并用LIG进行干预。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性检测和TRAP染色法评价破骨细胞形成和分化能力;qPCR法检测GPER及破骨细胞相关基因mRNA水平;Western blot法检测GPER蛋白表达;采用GPER特异性拮抗剂G36进行干预,观察LIG干预破骨细胞分化的作用变化。结果  LIG浓度为10 μmol/L时,TRAP活性检测结果显示,TRAP活性显著降低(P < 0.01);TRAP染色结果显示,与RANKL组相比,LIG组TRAP阳性细胞形成减少(P < 0.001);qPCR检测结果显示,与RANKL组相比,LIG组树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、活化T细胞核因子(NFATc1)、组织蛋白酶K(CTSK)和核因子κB受体(RANK)的mRNA水平显著降低(P < 0.05, P < 0.001),而GPER mRNA表达明显升高(P < 0.001);Western blot结果显示,与RANKL组相比,LIG组GPER蛋白表达升高(P < 0.001)。与LIG组比较,LIG+G36组TRAP阳性细胞数升高(P < 0.01),TRAP活性增强(P < 0.05),DC-STAMP、NFATc1、CTSK、RANK mRNA的表达升高(P < 0.05)。结论  LIG能够抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,其机制可能是促进GPER表达,减少RANK和下游转录因子NFATc1的表达,抑制破骨细胞分化和骨吸收功能。      

丹蒌片对ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积自噬及脂质代谢的调节作用

目的 探讨丹蒌片对肝脏脂质沉积小鼠脂质代谢及自噬的影响，为临床治疗动脉粥样硬化提供新的靶点与理论基础。方法 将小鼠分成正常对照组、模型组、给药组。利用全自动生化分析仪检测小鼠的血脂水平；HE染色判断肝脏病变程度；RT-qPCR、Western Blot方法检测PPAR-γ、LXR、ULK1、Beclin-1、LC3mRNA及蛋白的表达情况；免疫组化检测PPAR-γ表达。结果 经丹蒌片治疗后，下调了小鼠血清的TC、TG及LDL-c水平(P<0.05),上调了HDL-c水平(P<0.05);脂质代谢相关基因与蛋白PPAR-γ与LXR-α/β水平升高(P<0.05);促进LC3、ULK1、Beclin-1、PPAR-γ等自噬相关基因与蛋白高表达(P<0.05)而缓解高脂饮食引发的肝脏脂质沉积。结论 丹蒌片可能通过改善脂质代谢，提高自噬流，防治动脉粥样硬化。     

基于糖脂代谢基因探讨茯苓多糖干预乳腺癌细胞增殖的分子机制＊

目的 筛选乳腺癌中关于糖脂代谢的基因并研究茯苓多糖对其基因表达的影响。方法 选取GEO数据库中包含乳腺癌患者及匹配癌旁组织的2个基因数据集，取差异基因交集。应用DAVID6.8数据库对交集差异表达基因进行基因本体功能分析，在生物学过程中选取糖脂代谢相关基因，构建蛋白相互作用网络。采用CCK8法筛选茯苓多糖对乳腺癌细胞MCF-7的最佳给药浓度。RT-qPCR检测对照组与经茯苓多糖处理组MCF-7细胞中糖脂代谢相关基因的表达。结果 利用GEO2R分析数据后共取到交集差异基因27个。GO功能分析显示，生物学功能主要涉及糖异生、糖代谢过程、脂质代谢过程、脂质储存、脂肪酸代谢过程，共选取到7个糖脂相关基因（PCK1、RBP4、CD36、LEP、LPL、CAV1、ACACB）。RT-qPCR结果显示7个基因在细胞内表达水平经茯苓多糖干预后较对照组均明显变化。结论 研究表明PCK1、RBP4、CD36、LEP、LPL、CAV1、ACACB这些基因是乳腺癌糖脂代谢的关键基因，茯苓多糖能干预其在乳腺癌细胞中的表达。     

基于斑马鱼模型的鹿胶益气补血相关功效研究

目的 通过斑马鱼模型快速观察鹿胶补血、健骨、抗衰老等补益作用。方法 利用草甘膦(Gly)构建斑马鱼成鱼红细胞损伤模型,通过甲氨蝶呤(MTX)构建斑马鱼幼鱼造血功能损伤模型。通过泼尼松龙(Pred)构建斑马鱼幼鱼骨形成抑制模型。通过邻苯二甲酸二丁酯(DBP)构建斑马鱼幼鱼眼部细胞凋亡模型。结果 鹿胶可改善Gly诱导的斑马鱼成鱼红细胞核异常,促进造血因子SCL、GATA1的表达;改善Pred诱导的斑马鱼幼鱼骨形成抑制,促进成骨相关ALP、Runx2a的表达;减少DBP引起的斑马鱼幼鱼眼部细胞凋亡数,促进抗凋亡因子Bcl-2的表达。结论 鹿胶具有较好的保护红细胞、促进造血、促进骨形成、抗凋亡等作用,这些作用可能与其补血、抗骨质疏松、抗衰老等功效有关,该研究为鹿胶的临床应用提供科学依据,为进一步开发应用奠定基础。